其颗粒的大小对于分离效果有何影响？影响 固定相活性的主要因素有哪些？
• 原则上，粒度越小，分离效果越好。
• 表面积越大，表明其吸附力越大，有较强的保留。
(3) 薄层色谱的分离效果的评价指标是什么？ 如何进行计算？ • 比移值: 一个化合物在薄层板上上升的高度 与展开剂上升的高度的比值称为该化合物 的比移值（Rf 值）。是薄层色谱的基本定 性参数。
• （3）展开 • 用20:1的环己烷-乙酸乙酯混合溶液为展 开剂，待样点干燥后，小心放入已加入展 开剂的250ml层析缸中进行展开，点样一端 应浸入展开剂0.5cm。盖好盖子，观察展开 剂前沿上升至离板的上端1cm时取出，尽 快用铅笔在展开剂上升的前沿处划一记号， 晾干后观察分离的情况，比较二者Rƒ值的 大小。
• (2) 薄层色谱中，最常用的固定相（吸附剂）有哪些？其颗粒的大小 对于分离效果有何影响？影响固定相活性的主要因素有哪些？ • (3) 薄层色谱的分离效果的评价指标是什么？如何进行计算？ • (4) 若化合物本身无色，薄层色谱的色谱图中组分迁移产生的展开斑 点位置如何确定？试举例说明两种常用的确定方法。 • (5) 常用的植物色素的提取方法有哪几种？ • (6) 常用的纸色谱的点样、分离方法有哪些？纸层析需要注意的问题？
• 叶绿素的提取通常利用叶绿素溶于有机溶 剂的原理 • 制备线粒体时，可将组织匀浆液悬浮在悬 浮介质中进行差速离心法进行分离。
实验设计： 薄层色谱用于顺、反式偶氮苯的分离 • 仪器：载玻片，烘箱，小烧杯，毛细管， 层析缸。 试剂：薄层色谱用硅胶G（Silica gel for Thin Layer Chromatography）（粒度为 100目）；苯（Benzene）（分析纯， A.R.）；环己烷（Cycl Ohexane）（分析 纯，A.R.）；反式偶氮苯。
色谱法分类
色谱法分类
按操作形式分类
平面色谱法Leabharlann 柱色谱法电泳法逆流分配
色谱法的特点
• 与经典的分离提纯手段(重结晶、升华、萃 取和蒸馏等)相比，色谱法具有快速、简便 和高效率等优点。并能对复杂化合物，甚 至立体异构体进行分离。 • —液相色谱(含柱、薄层色谱)适合于固体物 质和具有高蒸气压的油状物的分离，不适 合低沸点液体的分离； • —气相色谱适合于容易挥发物质的分离。
(4) 若化合物本身无色，薄层色谱的色谱图 中组分迁移产生的展开斑点位置如何确定？
• 相对比移值 (R
i，s)
• 相对比移值就是被分离物质(s)和参比物(i) 的Rf 值之比，或是被分离物质(s)和参比物 （i) 在薄层上移动距离之比.
•R
i,s
= R
f(i)
/ R
f(s)
(5) 常用的植物色素的提取方法有哪几种？
(1) 讨论色谱分析方法的基本原理。
（一）吸附色谱原理
层析过程中，主要发生物理吸附。
—物理吸附普遍性、无选择性。当固体吸附 剂与多元溶液接触时，可吸附溶剂分子， 也可吸附任何溶质分子， —吸附过程是可逆的。被吸附的物质在一定 条件下可以被解吸、而解吸与吸附的无选 择性和相互关连性使吸附过程复杂化
• 吸附色谱的原理： • 由于混合物中的各个组分对吸附剂(固 定相)的吸附能力不同，当流动相或展开剂 流经吸附剂时，发生无数次吸附和解吸过 程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前移 动，吸附力强的组分滞留在后，由于各组 分具有不同的移动速率，最终得以在固定 相薄层上分离。
• （二） 分配色谱原理 • 分配色谱是根据化合物在两种不互溶(或微 溶)的溶剂中的溶解度或分配不同这一性质 进行的。 • 有机溶质在固定相上移动的快慢取决于其 在两相间的分配系数。 • ——极性化合物在水中溶解度大些，分配 在固相中多些，移动较慢； • ——非极性化合物容易溶解于有机相中， 移动较快，因此得以分离。
• (三)、空间排阻色谱法原理
• 因固定相是多孔性填料称为凝胶，故又 称为凝胶色谱法 ；也称为分子排阻色谱法 。
• — 凝 胶 渗 透 色 谱 法 (Gel permeation chromatography; GPC)。以有机溶剂为 流动相者称之。 • — 凝 胶 过 滤 色 谱 (Gel filtration chromatography ; GFC )。 以水溶液为流 动相者称之。
色谱法应用
• • • • • 已广泛用于： —反应过程的监控和跟踪 —混合物的分离， —无机、有机化合物的制备 —化合物原料、产物的鉴定
• —纯度的检验。
发展方向
• • • • 新固定相的研究 检测方法的研究 专家系统 色谱新方法 （高效毛细管电泳法是目前研 究最多的色谱新方法 ）
B组讨论题
• (1) 讨论色谱分析方法的基本原理。
• （2）点样
• 取2块用上述方法制好的薄层板，分别在距 一端1cm处用铅笔轻轻划一横线作为起始 线。取管口平整的毛细管插入样品溶液中， 在板的起点线上点1％的未光照的偶氮苯的 苯溶液和光照过的偶氮苯的苯溶液两个样 点，样点间相距1～1.5cm。如果样点的颜 色较浅，可重复点样，重复点样前必须待 前次样点干燥后进行。样点直径不应超过 2mm。
(2) 薄层色谱中，最常用的固定相有哪些？
• 薄层色谱必须将被分离物质点于固定相上进行分离，固定 相要根据被分离化合物的性质来选择。
• 分离亲脂性化合物常常选用硅胶，氧化铝， 乙酰纤维素及聚酰胺。 • 分离亲水性化合物常常选用纤维素，硅藻 土及聚酰胺。 但也有例外，脂溶性叶绿素 在氧化铝及纤维素上均能得到较好的分离。
色谱分离技术的演变和发展
色谱分离技术概论
♪ 1906年俄国M.C Tswett创立了色谱分离技术 ♪ 20世纪30年代通过对植物代谢产物—色素如叶绿 素及胡萝卜素等分离，真正实现了液相色谱技术 有机制备的应用。 ♪ 40年代后，色谱技术逐渐得到发展 ．色谱学已发 展成为一门崭新的学科。 ♪ 色谱技术作为生命科学，材料科学，环境科学必 不可少的研究手段和工具。 ♪ 除了提供数目繁多的有机化合物的分离提纯方法 外，还提供了定性鉴定和定量分析的数据。
实验步骤
• （1）薄层板的制备
• 取7.5×2.5cm2左右的载玻片5片，洗净晾干。 • 在50ml烧杯中，放置3g硅胶G，逐渐加入0.5％ 羧甲基纤维素钠（CMC）水溶液8ml，调成均匀 的糊状，用滴管吸取此糊状物，涂于上述洁净的 载玻片上，用手将带浆的玻片在玻璃板或水平的 桌面上做上下轻微的颠动，并不时转动方向，制 成薄厚均匀、表面光洁平整的薄层板，涂好硅胶 G的薄层板置于水平的玻璃板上，在室温放置 0.5h后，放入烘箱中，缓慢升温至110℃，恒温 0.5h，取出，稍冷后置于干燥器中备用。