SCDLP培养基
十六烷三甲基 溴化铵琼脂
配培 养基 和稀 释液
供试 液的 制备
增 菌 培 养
18~24h
36±1℃
分 离 纯 化
18~24h
灰白色、扁 平、周围有 水溶性蓝绿 色素
特征菌落
36±1℃
无菌落或无特征菌落
镜检
革兰染色、镜检→ 氧化酶试验 绿脓菌素试验 生化试验 硝酸盐还原试验 42℃生长试验 明胶液化试验
双倍胆盐乳糖
产酸：黄色 产气：气泡
EMB琼脂
镜检
配培 养基 和稀 释液
供试 液的 制备
增 菌 培 养
44.5±0.5℃ 检查 结果 24-48h 判断
分离培养
产酸产气蛋白胨水 培养4来自.5±0.5℃ 24±2h 靛基质
36±1 ℃ 18~24h
特 征 菌 落
不产酸不产气
书写检验 记录单
最终结 果判断
样品的制备 液体样品 固体样品 样品的制备注意事项 均质器
膏、霜、乳剂半固体状样品
无菌容器、材料及操作
样品的均一性 玻璃珠 磁力搅拌
样品的检验及保管 及时检验 样品应放在室温阴凉干燥处 样品先进行微生物检验(原料)，再做其他指标 须防止微生物的再污染和扩散 测试方法：
菌落总数检验
• 菌落总数（Aerobic bacterial count）：化妆品检 样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基 成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质 等），1g（1mL）检样中所含菌落的总数。所 得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的 嗜中温的需氧性和兼性厌氧菌落总数。 测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程 度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。
2007版化妆品卫生规范与2015版化妆品安全技术规范对比：
总则
2015版化妆品安全技术规范
侧重点
2007版化妆品卫生规范
仪器和设备 规格没有规定
有：天平/培养箱
全部操作应在无菌室内进 全部操作应在符 行，或在相应条件下，按 合生物安全要求 无菌操作规定进行。 的实验室中进行 样品采集 如检出粪大肠菌群或其它 直接删除 致病菌，自报告发出之日 起该菌种及被检样品应保 存一个月。 如为5mL 则加到45mL 灭 直接删除 菌生理盐水，混匀后，制 成1：10 检液。
书写检验 记录单
最终结 果判断
★铜绿假单胞菌检查流程图
黄绿色 菌膜 灰白色 湿润
十六烷三甲基溴化铵平板 粉红/ 紫红色
SCDLP培养基
氧化酶试验
盐酸层呈粉紫色 氯仿层呈蓝绿色
N2
绿脓菌素试验
硝酸盐还原产气试验
明胶液化 试验
明胶液化
明胶培养基（高层）
结果报告
被检样品经增菌分离培养后，经证实为革 兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆 为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿 假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明 胶、硝酸盐还原产气和42℃生长试验三者 皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出铜 绿假单胞菌。
化妆品中常用的中和剂
样品中： 国际方法：尼泊金酯类防腐剂的中和剂：吐 温80（30g/L）和卵磷脂(3g/L)+普通肉汤。 化妆品安全技术规范：培养基成分中直接有 卵磷脂（1g）吐温80（7g）。（稀释法也能 同步起到中和的效果） 生产用水中的余氯：每125ml水样中加入 0.1mg硫代硫酸钠。（注意添加方式和使用 范围）
• 日常维护： • 设备的计量与保证； • 超净台及时清洁与杀菌（操作前后半 小时）； • 检验后材料的及时处理； • 环境卫生（沉降菌的检测每周）。
问题2
油性样品如何处理
稀释液生理盐水-极性溶剂、液体石蜡-非极性 溶剂、吐温80-非离子型表面活性剂，分子一端 是亲水基团，一端是亲油基团，常用作增溶剂 和油/水乳化剂。决定了加入的顺序。
紫黑色
液面玫瑰红色
★粪大肠菌群检查流程图
结果报告
根据发酵乳糖产酸产气，平 板上有典型菌落，并经证实 为革兰氏阴性短杆菌，靛基 质试验阳性，则可报告被检 样品中检出耐热大肠菌群。
铜绿假单胞菌
• 未检出2天，检出4天 • 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa） 属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌， 氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还 能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐， 在 42℃±1℃条件下能生长。 该菌对人有致病力，可使伤处化脓，引起败血 症等。在自然界中分布甚广，空气、水、土壤
○
○
○
注： ① 指甲油卸除液不需要测微生物项目。 ② 乙醇含量≥75%（w/w）者不需要测微生 物项目。 ③ 配方中没有微生物抑制作用成分的产品 （如物理脱毛类产品、纯植物染发类产品 等）需测微生物项目。
重点讨论 ④ 一个样品包装内有两个以上独立小包装 或分隔（如粉饼、眼影、腮红等），且只 有一个产品名称，原料成分不同的样品， 应当分别检验相应项目；非独立小包装或 无分隔部分，且各部分除着色剂以外的其 他原料成分相同的样品，应当按说明书使 用方法确定是否分别进行检验。
量值得传递过程？结论？ 量值溯源过程？
常规洁净工作台？
• 试剂要求： • 无菌容器（？）及溶液； • 试剂充足； • 空间充分（10平方米2人操作）； • 培养基的制备（有效期的确认）与质 量控制（促生长与回收率的验证）推荐 项；
目前大部分微生物实验室
• 人员操作方面： • 无菌操作，避免污染； • 一定专业技术或工作经验（招聘与外 部审核时） • 相互协作； • 测试结果的证明。
总则重点
1.具有代表性。2.不少于2个包装单位的取 样中共取10g或10mL。3.供检样品，应严格 保持原有的包装状态。容器不应有破裂， 在检验前不得打开，防止样品被污染。4. 应置于室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。 4.宜先取出部分样品做微生物检验。5.严格 上微生物无复测一说。（可能的因素多）， 因此对微生物检验人员要求严格。6.生物 安全开始重视。
化妆品卫生标准
微生物检验方法
（2015版化妆品安全技术规范） GB/T 7918.1-1987 化妆品微生物标准检验方法 总则 菌落总数 （2015版化妆品安全技术规范） GB/T 7918.2-1987 化妆品微生物标准检验方法
耐热大肠菌群（2015版化妆品安全技术规范） 粪大肠菌群：GB/T 7918.3-1987 化妆品微生物标准检验方法
灰/黑色
Baird Parker’s平板
血浆凝块
甘露醇高盐琼脂
液态血浆 血浆凝固酶试验
结果报告
凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经 染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌， 并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳 性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球 菌。
霉菌和酵母菌
• 霉菌和酵母菌数测定（Determination of molds and yeast count）化妆品检样在一 定条件下培养后，1g或1mL化妆品中所 污染的活的霉菌和酵母菌数量，藉以判 明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其 一般卫生状况。 • 本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和 培养特性，在虎红培养基上，置 28℃±2℃培养5d，计算所生长的霉菌和 酵母菌数。（5-50）
详细操作步骤
侧重点
2007版化妆品卫生规范
2015版化妆品安全技术规范
菌落总数定 嗜中温的需氧性菌落 需氧性和兼性厌氧菌 义 总数 落总数 TTC 121℃ /20min 高压灭 溶解后过滤除菌，或 菌 115℃高压灭菌20min
粪大肠菌群（Fecal WHO更改 coliforms）
大肠培养温 置44℃±0.5℃培养 度和培养时 箱中培养24h～48h 间
金黄色葡萄球菌
未检出2天，检出3天 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus） 为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽 胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶 阳性。 该菌是葡萄球菌中对人类致病力最强的一种， 能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致 败血症。
SCDLP培养基或 7.5%NaCl肉汤
化妆品微生物检验
• 化妆品因含有水分，油脂，蛋白质，多元醇等，为 微生物的生长创造了良好的条件，造成产品变质。 • 为了抑制微生物的繁殖和消费者使用过程中的产品 污染，往往在化妆品中加入防腐剂(尼珀尔金甲脂、 乙酯、丙脂及苯氧乙醇等)，但不能过量。 • 因此，化妆品一方面为微生物的生长繁殖提供了良 好的环境；另一方面由于防腐剂的应用又可抑制微 生物的生长。 • 为了避免测试结果可能出现假阴性（实际应该生长 或是污染了，由于防腐剂的存在而导致结果不生长 或是结果偏小），需要添加中和剂。
测试流程
48小时出结果（30-300）：
供试液 的制备 混合平板 的制备
细菌的培 养
书写检验 记录单
数据 处理
检查结果、 观察与计数
TTC亦不可多加会抑制菌落生长
• 为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每 100mL 卵磷脂吐温 80 营养琼脂中加入 1mL 0.5％的 TTC 溶液，如有细菌存在，培养后 菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。
耐盐分
增 菌 培 养 分 离 纯 化
Baird Parker’s 或血琼脂
配培 养基 和稀 释液
镜检
24~48h 36±1℃ 特征菌落
供试 品的 处理
24±2h 36±1℃
无菌落或无特征菌落
书写检验 记录单
最终结 果判断
革兰染色、镜检→ 生化试验:血浆凝固酶试验 甘露醇发酵试验
★金黄色葡萄球菌检查流程图
耐热大肠菌群 Thermotolerant coliform bacteria
置44.5℃±0.5℃培养 箱中培养24h，如既不 产酸也不产气，继续 培养至48h 霉菌和酵母 置28℃±2℃培养72h 置28℃±2℃培养5d（ 菌 读数时间灵活）
详细操作步骤重点