科玛嘉沙门菌显色培养基－甲副
科玛嘉沙门菌显色培养基－甲副(紫红)，大肠(蓝)
营养琼脂－甲副
TCBS-霍乱弧菌
TCBS-副溶血弧菌
Yersinia选择性平板-小44 肠结肠耶尔森菌
公牛眼，中间色深、透明环窄
注意事项
• KIA管最好用棉花塞,若用螺旋帽或硅胶塞， 将盖子拧松一些,使有足够的氧气促进反应。 • MIU需用橡皮胶塞盖紧,因尿素酶反应需避开 氧气。经4-6小时培养可先观察MIU管尿素酶 反应,若为红色多为变形杆菌；再经37℃过夜 培养后观察反应结果。
（三）菌种的保存与上送
对于分离可疑菌落，无论是否得到明确的 鉴定结果，都应保存，至少一式三份，分 别用做自留保存、上送总菌种库、质控考 核备用。
（四）注意事项：
• 涉及活菌的相关操作应在BSL-2级实验室的 生物安全柜中进行
• 检测过程中使用的样品、用具以及其它具 有潜在污染的物品应当具有传染性的物质 进行消毒处理。
Carry-Blair运送培养基采集保存粪便标本 碱性蛋白胨增菌37℃6小时 接种TCBS、庆大平板
霍乱 TCBS黄色 菌落、庆 大平板 灰 白色菌落
副溶血
TCBS蓝绿 色菌落
其他弧菌
弧菌分离鉴定程序图（二）
霍乱 血清凝集、
氧化酶 等试验
生化鉴定
副溶血 KIA/MIU 氧化酶、神 奈川试验
生化鉴定
弧菌分离鉴定程序图（二）
选A/A，产气+，H2S- / M+、I+、U-，山梨醇发酵-
生化鉴定 血清凝集 保存菌株，每月送省CDC做复核、毒力基因
类志贺邻单胞菌、气单胞菌分离鉴定程序图
Carry-Blair运送培养基采集保存粪便标本 用1个采样拭子直接分离MAC
挑选可疑菌落分别接种KIA、MIU 气单胞菌 K/A，H2S-，产气+，动力+，靛基质+，尿素邻单胞菌K/A，H2S-，产气-，动力+，靛基质+，尿素-
心
半透明 色，半透明 圆形 色或粉红色，
圆形
规则
半透明
科玛嘉
淡紫红色、
O157显色
白色或蓝色
培基
不生长或无 蓝色、混浊、
科玛嘉沙 门显色培
色
凸起、湿润、 边缘整齐或不
基
规则
紫色、光滑、不生长或无色 湿润、边缘 整齐、圆形
不生长或 不生长或无色 无色
耶尔森菌 选择平板
光滑、湿润、 中心红色、周 围透明圈的公 牛眼状菌落
挑取5个可疑菌落分别接种KIA、MIU 生化反应符合志贺菌
(K/A、气-、H2S- / M-、I±、U-)
系统生化
志贺菌分离鉴定程序图（二）
血清学鉴定 保存菌株，每月送省CDC做复核、毒力基因
耶尔森菌分离鉴定程序图（一）
CarS（添加胆盐、山梨醇）4℃冷增菌（7-20天）
• 细菌的染色体DNA提取时使用DNA提取试剂 盒。
• 实时荧光PCR采用TaqMan探针法，使用 Premix Ex TaqTM (大连宝生物TaKaRa)
• 对于PCR检测阳性或可疑阳性, 但分离培养 阴性的标本，需进行第二次分离培养，以 提高检出率。
（二）鉴定
1、菌落形态鉴定 2、生化鉴定 挑取5个可疑菌落进行特异的
2.用于细菌检测的标本采集：
用5支无菌棉拭多点采集 粪便标本（如有脓血或黏液 应挑取脓血、黏液部分，液 体粪便应取絮状物，使棉拭 表面布满粪便），插入1支CB运输培养基（50ml具旋盖 密封的离心管）。
二、标本的保存与运送
（一）标本的保存
1. 用于病毒检测的粪便标本：标本采集 后30分钟内立即将标本放置在-20℃冰箱中， 如有特殊情况未能及时放入-20℃的冰箱， 标本可在4℃短期储存，不能超过48小时， 保存期内避免标本发生反复冻融。
分别在第7、14、21天划线接种 Yersinia选择性平板、 MAC，25℃培养24-48h
选择形态可疑菌落（“公牛眼”状） 接种于改良克氏双糖
耶尔森菌分离鉴定程序图（二）
改良克氏双糖斜面（甘露醇取代乳糖）： A/A 、气-、H2S-、尿素+、25℃动力+、37℃动力-
系统生化 保存菌株，每月送省CDC做复核、毒力基因
寄生虫
1 致泻大肠杆菌（EPEC、ETEC、 轮状病毒（A组、B 阿米巴
EIEC、EHEC、EAEC）
组和C组轮状病毒）
2 沙门菌
肠道腺病毒
蓝氏贾第鞭毛虫
3 志贺菌
诺如病毒
隐孢子虫病
4 弯曲菌
札如病毒
5 小肠结肠炎耶尔森菌
星状病毒
6 弧菌（霍乱弧菌、副溶血弧菌）
7 嗜水气单胞菌
8 类志贺邻单胞菌
监测任务（2009年）
弯曲菌
荧光PCR检测
生化、血清学和/或PCR鉴定
37℃ 16小时
接种科玛嘉沙 门显色平板
沙门菌
菌株保存、结果录入与分析
检测程序
（一）标本的接种培养
1．直接分离培养 采集的粪便立即划线接种选择性培养基。 进行培养。
2．增菌培养 将拭子放入5ml增菌液中进行增菌培养。增 菌培养后，用接种环挑取增菌液（在接种 前轻混匀增菌管内液体），接种选择性培 养基进行划线培养，采取分区划线的方式， 一般划3-4区，以分离出单个菌落。
存
大肠杆菌、沙门
菌、嗜水气单胞
菌、类志贺邻单 胞菌
常规PCR或实时
接种TCBS、 接种CIN、 庆大平板 MAC平板
霍乱弧菌、副溶 血弧菌、溶藻弧 菌等其他致泻性 小肠结肠炎 弧菌、嗜水气单 耶尔森菌 胞菌、类志贺邻 单胞菌
免疫磁 珠富集
微需氧 42℃ 3-5 天
接种科玛嘉 O157显色平板
O157:H7 大肠杆菌
空弯菌分离鉴定程序图
Carry-Blair运送培养基采集保存粪便标本
用1个采样拭子直接分离哥伦比亚血琼脂或 Skirrow琼脂, 42℃微需氧培养2-3天 挑选疑似单菌落做氧化酶、触酶 和马尿酸水解酶实验
阳性者进行革兰氏染色进行镜下形态鉴定
革兰氏染色疑似菌落进行PCR鉴定
弧菌分离鉴定程序图（一）
其他弧菌 KIA/MIU 氧化酶 等试验
生化鉴定
保存菌株，每月送省CDC做复核、毒力基因
大肠O157分离鉴定程序图（一）
Carry-Blair运送培养基采集保存粪便标本 ｍEC增菌液37℃增菌14小时
免疫磁珠富集，同时可用O157金标检测卡筛检 接种科玛嘉O157显色平板
挑取淡紫色或紫红色可疑菌落分别接种KIA、MIU
细菌病原检测内容及流程
粪便标本 C-B运输培养基（5支棉拭子）
TSB肉 直接接种 碱性蛋白 改良PBS 汤增菌 MAC和XLD 胨增菌 冷增菌
mEC 增菌
直接接种哥伦 比亚羊血平板
SBG 增菌
37℃ 6小时 37℃ 24小时 37℃ 6小时 4℃ 10-20天 37℃ 14小时
甘
油
冻
志贺菌、致泻性
37℃ 37℃
5. O157:H7科玛嘉平板 O157:H7
37℃
6. 耶尔森菌选择平板 小肠结肠炎耶尔森菌
25℃／37℃
7. 哥伦比亚血平板
弯曲菌
微需氧42℃
病毒标本 1. 采便盒
轮状、杯状、星状和腺病毒等
-20℃以下
3．核酸检测
自TSB肉汤增菌液中提取核酸（DNA），利 用实时荧光PCR快速检测沙门菌、小肠结肠 炎耶尔森菌、致病性弧菌（霍乱弧菌、副溶 血弧菌、溶藻弧菌等其他致泻性弧菌）、志 贺菌、嗜水气单胞菌和类志贺邻单胞菌，使 用多重常规PCR致泻性大肠杆菌（EPEC、 ETEC、EIEC、EHEC、EAEC）。
系统生化
保存菌株，每月送省CDC做复核
致泻性大肠杆菌分离鉴定程序图
Carry-Blair运送培养基采集保存粪便标本 用1个采样拭子直接分离MAC
挑选可疑菌落粉红色、突起、光滑、湿 润分别接种KIA、MIU
选A/A，产气+，H2S- / M+、I+、U-
保存菌株，每月送省CDC做PCR鉴定
选择培养基上菌落生长特点
监测流程
哨点医院监测科室的医生或护士在门诊或 急诊发现符合监测病例定义的患者时，按 照方案要求收集病例的基本信息、临床症 状等（填写病例信息个案调查表、样品登 记表），并采集粪便标本；标本运送至监 测实验室进行相关的细菌学、病毒学检测； 最后进行结果的分析以及整合。
标本的采集
1.用于病毒检测的标本采集： 采集粪便5克（5毫升），置于无菌粪便采 样杯（不加任何试剂）。
粪便标本的保存、运送和分离选择性培养基
接种培养基
目标菌
温度
标本保存 1.
Carry-Blair
所有腹泻病原菌
室温
标本运送 1.
Carry-Blair
所有腹泻病原菌
室温
1. 3%氯化钠碱性蛋白胨水弧菌、嗜水气单胞、类志贺邻单孢菌 37℃
增菌肉汤 2. SBG增菌肉汤 3. mEC 增菌肉汤
沙门菌 EHEC
选择 培养基
志贺菌
大肠埃希菌
O157:H7
沙门菌
耶尔森菌
霍乱弧菌 邻单胞菌 气单胞菌
无色、透明、粉红或红色、 粉红或红色、 无色至浅橙 圆形、光滑、 中等大小，光无色透明 中等大小，光
光滑、湿润、混浊、凸起、 混浊、凸起、 色，透明或 湿润、扁平、 滑，湿润，无 /半透明 滑，湿润，无
MAC 边缘整齐、 湿润、边缘整 枫叶状 半透明，菌 半透明
症候群
地区
哨点医院
数量
沈阳市儿童医院 沈阳（80）
沈阳新民中心医院
40份 40份
大连（40） 腹泻症候群320份 （细菌标本320份、