三 乙胺 调 ｐ Ｈ至 ２ ． ４。 １ ＿ ３ 样 品前 处理 １ ． ３ ． １试 料 的制 备 将 市售 的 空 白猪 肉样品 绞碎 得到 空 白试料 ，在 空 白试 料 中添
１材料和 Байду номын сангаас法
１ ． １试验 材 料和 主要 仪 器 岛津 Ｌ Ｃ ． ２ ０ Ａ高 效液 相色 谱系 统 ，包 括二 元象 、自动进 样 器、 荧 光检 测器 、柱 温箱 、Ｌ Ｃ — ｓ ｏ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ工 作站 ；色 谱柱 Ｗｏ ｎ ｄ ａ Ｓ ｉ ｌ Ｃ １ ８ Ｓ ｕ ｐ ｅ ｒ ｂ （ ４ ． ６ ｍｍｘ ２ ５ ｍｍ，５ ｐ ｍ） ；固相 萃 取小 柱 Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ １ ０ ０ ｍｇ ／ ｌ ｍ Ｌ，Ｓ ｕ ｐ ｅ ｌ ｃ ｌ ｅ ａ ｎ １ ０ ０ ｍｇ ／ ｌ ｍ Ｌ ；高速 匀浆 机和 振荡 器（ Ｉ Ｋ Ａ，德 国） ： 离心 机 （ Ｔ ＧＬ ． １ ６ Ｇ，上 海 安亭 ） ；天 子天 平（ Ｅ Ｌ ｌ ０ ４ ，梅特 勒） 。 环 沙 、达 氟 沙 星 、 恩 诺 沙 星 和 沙 拉 沙 星 标 准 品 （ 德 国 Ｄ ｒ ． Ｅ ｈ ｒ ｅ ｎ ｓ ｔ ｏ ｒ ｆ ｅ ｒ ） ，磷 酸 、氯 氧 化钠 、三 乙胺 、磷 酸 ■ 氧 钾 、王 氯 乙酸 （ 分 析纯 ，Ｊ ｌ 试 剂厂 ） ，甲醇（ 色 谱纯 ， Ｍｅ ｒ ｃ ｋ ） 、乙腈（ 色谱 纯 ， Ｍｅ ｒ ｃ ｋ ） ，供试 样 品为 市售 新鲜 猪 肉。 １ ． ２ 溶液 制 标 准溶 液 ：分 别取 达氟 沙星 标准 品约 １ ０ ｍｇ ，恩 诺沙 星 、环 丙沙 和沙 拉沙 星标 准 品各 约 ５ ０ ｍ ｇ ，精 密称 定 ，用 Ｏ ． ０ ３ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 氢氧化钠溶液溶解并稀释成浓度 为 ０ ． ２ ｍ ｇ ／ ｍＬ （ 达 氟沙 星） 和 ｌ ｍ ｇ ／ ｍＬ （ 恩 诺 沙 星 、环 丙沙 星 、 沙拉 沙星 ） 的标 准储 备 液 。然 后 准 确鼙 取 适精 标准 储 备液 用 乙腈稀 释成 １ 、５ 、１ ０ 、５ ０ 、ｌ ０ ０和 ２ ０ ０ ｐ ｇ ／ Ｌ （ Ｏ ． ２、ｌ 、２ 、１ ０ 、２ ０和 ４ ０ ｐ ｇ ／ Ｌ） 的标 准工 作液 。
２ ０ １ ５年 第 ６ 期
第４ ２ 卷 总第 ２ ９ ６ 期
广
东
化
工
１ ６ ９
ｗｗｗ． ｇ ｄ ｅ ｈ ｅ ｍ． ｅ ｏ ｍ
猪 肉中氟喹诺酮类 药物残 留检 测 国标方法 的改进
李丰 ，郝 燕 娟 ， 叶竹 林 ， 陈妙 婵 ，何彩 凤 ，彭 志 通
（ ， ‘ 州｝ Ｌ ＝ 标 枪测 技 术 中心 ，Ｊ 一东 广 州 ５ １ ０ ３ ０ ０ ）
ｍｉ ｘ ｕｒ ｔ ｅ ｏ ｆ ａ ｃ ｅ ｔ ｏ ｎ ｉ ｔ ｒ ｉ ｌ ｅ ａ ｎ ｄ Ｔ Ｃ Ａ（ ｔ ｈ ｅ ｍａ ｓ ｓ ｆ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ２％） ， ｈ ｉ ｇ ｈ － ｓ ｐ ｅ ｅ ｄ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ｉ ｆ ｕ ｇ ａ ｌ ｐ ｕ ｉ ｒ ｉ ｆ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ， ｈ ｉ ｇ ｈ ｐ ｅ ｆｏ ｒ ｒ ｍａ ｎ ｃ ｅ ｌ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙ ｗｉ ｔ ｈ ｌ ｆ ｕ ｏ ｒ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｃ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｏ ｒ ．
氟 喹 讲酮类 足 一类 人 工合 成 的广谱 杀 菌性 抗 菌药物 ， 其 抗 菌 谱广 、抗 菌 活性 强 、 与其它 抗菌 药物 无 交叉 耐 药性 等特 点而 广 泛 应用 ｒ 禽和 水 产养 殖 业 【 ｌ 】 ，如 环 丙沙 星 、达氟 沙星 、恩诺 沙 星 和沙 拉沙 星 等 。此类 药 物使 用 不当 导致 的药 物残 留可能 直接 危 害 人 体健康 ，也 ｜ 丁 能 使致病 菌 产 生耐 药性 ， 接对 人 类健 康造 成 影 响 ，闪此 人 们越 来越 关注 氟喹 诺 酮类 药物 的残 留 安全 问题 ｌ 】 － ２ 】 。 联 合 田 粮 农组 纵 ／ 世 界卫 生 组 织食 品添 加 剂专 家联 席 委 员会 、欧 盟 、美 国 Ｆ Ｄ Ａ 等 都制 定 了相应 的最 高 残 留限量 和禁 用 法规 ，我 国 侄２ ０ ０ ２ 年 公 夼 的农业 部 ２ ３ ５ 号公 告规 定 了部 分氟 喹诺 酮类 药物 在 动 物肌 肉组 织 中 的最 高残 留限 量为 ｌ ０ ～ ５ ０ ０ ｐ ｇ ／ ｋ ｇ Ｉ ｊ Ｊ 。 氟 喹 诺酮 类药 物在 动物 源 食 品中 的残 留分 析方 法 主要 有酶 联 免 疫Ｉ 吸附法 （ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ ） 、高效 液相 色谱 法（ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ） ￣ ［ Ｉ 高效 液相 色谱 ． 质 谱 联用 法 （ Ｈ Ｐ Ｌ ｃ — ＭＳ ） 等【 ４ Ｊ 。 目前 ，在猪 肉产 品的 检测 中， 主要 用 到 困 家标准 方法 《 动物 性食 品 中氟喹 诺 酮类 药物 残 留检测 ． 高 效液 相 色谱 法 》 ｆ 农 业部 １ ０ ２ ５弓公 告 １ ４ － ２ ０ ０ ８ ） Ｊ 。笔者 在研 究过 程 中发 现 ，此 国标 方 法 的净化 步骤 不 能完 全 收集 目标 物 ，造 成回 收率 偏 低 。本 研 究针对 回收 率偏低 问题 ，对 国标 方法 的提 取 、净 化步 骤 进 行 改进 、优化 。经试 验验 证 ， 改进后 的方 法 的检 出限 、回收 率 符 合要 求 ，简便 、高效 、准 确 。
Ｉ ｍ ｐｒ ｏ ｖｅ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ ｆ ｏ ｒ Ｆｌ ｕＯ ｒ Ｏ ｑｕｉ ｎＯ ｌ Ｏ ｎｅ ｓ Ｒｅ ｓ ｉ ｄ ｕｅ ｓ ｉ ｎ Ｐｏ ｒ ｋ ｏ ｆ
Ｎａ ｔ ｉ ｏ ｎａ ｌ Ｓ ｔ ａ ｎｄａ ｒ ｄ
Ａｂｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：０ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ：Ｍ ｉ ｎｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ｏ ｆ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕｒ ｅ Ｂｕ ｌ ｌ ｅ ｔ ｉ ｎ Ｎｏ ．１ ０２ ５ ｌ ４ — ２ ０ ０ ８“ Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｌｕ ｆ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｏ ｌ ｏ ｎ ｅ ｓ ｒ ｅ ｓ ｉ ｄ ｕ ｅ ｓ ｉ ｎ ａ ｎｉ ｍａ ｌ ｄ ｅ ｒ ｉ ｖ ｅ ｄ ｏ０ ｆ ｄ ｂ ｖ ＨＰ ＬＣ”
ｉ ｐ ｒ ｏ ｌｏ ｆ ｘ ａ ｃ ｉ ｎ ，ｄ ａ ｎ ｏ ｌ ｆ ｏ ｘ ａ ｃ ｉ ｎ ，ｅ ｎ ｒ ｏ ｌ ｆ ｏ ｘ ａ ｃ ｉ ｎ ａ ｎ ｄ ｓ ａ ｒ ａ ｌｏ ｆ ｘ ａ ｃ ｉ ｎ ｗｅ ｒ ｅ １ ２ ． ４ ｐ ｇ ／ ｋ ｇ ，３ ． ６¨ ｋ ｇ ，１ ３ ． ５／ ． ｔ ｇ ／ ｋ ｇ ，ｌ ８ ５ ｐ ｇ ／ ｋ ｇ ．Ｃｏ ｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ：Ｔ ｈ ｅ ｉ ｍｐ ｒ ｏ ｖ ｅ ｄ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗａ ｓ ｓ ｉ ｍｐ ｌ ｅ ， ｃ ｏ ｎ ｖ ｅ ｎ ｉ ｅ ｎ ｔ ． ｅ ｉｃ ｆ ｉ ｅ ｎ ｔ ａ ｎ ｄ ａ ｃ ｃ ｕ ｒ ａ ｔ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ， ｗｈ ｉ ｃ ｈ Ｗａ Ｓ ｓ ｕ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｌ ｆ ｕ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｏ ｌ ｏ ｎ ｅ ｓ ｒ ｅ ｓ ｉ ｄ ｕ ｅ ｓ ｉ ｎ Ｐ ｏ ｒ ｋ Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ ： ＨＰ ＬＣ； ｆ ｌｕ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｏ ｌ ｏ ｎ ｅ ｓ ；ｏ ｏ ｒ ｋ； ｉ ｍｐ ｒ ｏ ｖ ｅ ｍｅ ｎ ｔ
提取 溶 液 ：磷 酸盐 缓冲 溶液 ：取磷 酸 ＿ Ｉ Ｉ 氯钾 ６ ． ８ ｇ ，加 水使 溶 解 并稀释 至 ５ ０ ０ ｍＬ ，ｐ Ｈ为 ４ ． ０ ～ ５ ． ０ 。三 氯 乙酸／ 乙腈溶 液 ：称取 ２ ｇ 三 氯 乙酸于 容 量瓶 中 ，加水 定容 到 １ ０ ０ ｍＬ ，得 到 的三氯 乙酸 溶 液 与 乙腈 按 体积 比 ３： １ 的 比例 混 合 ，搅拌 均匀 ，备 用 。 磷 酸／ 三 乙胺 溶液 ：取 磷酸 ３ ． ４ ｍＬ ，用 水稀 释至 １ ０ ０ ０ ｍ Ｌ 。用
ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｐ ｕ ｒ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｔ ｅ ｐ ｓ ｔ ｏ ｉ ｍｐｒ ｏ ｖ ｅ ，ａ ｉ ｍｅ ｄ ａ ｔ ｉ ｍｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｇ ｒ ｅ ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ｙ ａ ｎ ｄ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｅ ｉｃ ｆ ｉ ｅ ｎ ｃ ｙ Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ：Ｔｈ ｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｎ ｇ ｓ ｏ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｐ ｏ ｒ ｋ ｓ ａ ｍｐ ｌ ｅ ｓ ｉ ｎ ｃ ｌ ｕ ｄ ｅ ｓ ａ
Ｌ ｉ Ｆ ｅ ｎ ｇ ， Ｈ ａ ｏ Ｙ ａ ｎ ｊ ｕ ａ ｎ ， Ｙｅ Ｚ ｈ ｕ ｌ ｉ ｎ ， Ｃ ｈ ｅ ｎ Ｍｉ ａ ｏ ｃ ｈ ａ ｎ ， Ｈｅ Ｃ ａ ｉ ｆ ｅ ｎ ｇ ， Ｐ ｅ ｎ ｇ Ｚ ｈ ｉ ｔ ｏ ｎ ｇ
（ Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｈｕ ｉ ｂ ｉ ａ ｏ Ｔ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ Ｔｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ Ｃｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ， Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ５ １ ０ ３ ０ ０ ， Ｃｈ ｉ ｎ ａ ）
Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ： Ｔｈ ｅ ｒ ｅ ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ｉ ｅ ｓ ｏ ｆ ｏｕ ｆ ｒ ｌ ｆ ｕ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｏ ｌ ｏ ｎ ｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ８１ － ３％ ～ １ Ｏ ３ ． ５％ ａ ｔ ｔ ｈ ｒ ｅ ｅ ｓ ｐ ｉ ｋ ｅ ｄ ｌ ｅ ｖ ｅ １ ． ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｅ ｃ ｉ ｓ ｉ ｏ ｎ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ０ ． ２ ％￣ ４ ． 】％．Ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ｍｉ ｔ ｏ ｆ ｑ ｕ ａ ｎ ｔ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏｆ
［ 摘 要】 目的：对 农 业部 １ ０ ２ ５号公 告 １ ４ — ２ ０ ０ ８《 动 物性 食 品中 氟喹 诺酮 类药 物残 留检 测． 商 效液 相色 谱法 》的 提取 净化 步骤 进行 改进 ， 旨在 提高 方法 回 收率和 检 测 效率 。方 法 ：样 品改 用体 积 比 ３：１ 的三 氯 乙酸（ ２ ％质璺 分数 ） 溶 液 与 乙腈溶 液提取 高 速离 心净 化 ，高效 液相 色谱 荧光 检 测器 测定 。 结果 ：加 标低 、 中、高 浓度 水平 ， 回收 率为 ８ １ ＿ ３ ％￣ １ ０ ３ ． ５ ％ ，精 密 度为 ０ ． ２％＂ － ４ ． １ ％。方 法检 测环 丙沙 星 、达氟 沙星 、恩 诺沙 星和 沙 拉沙 星 的定 量 限分别 为 １ ２ ． ４ ｐ ． ｇ ／ ｋ ｇ 、３ ． ６￣ ｇ ／ ｋ ｇ 、１ ３ ． ５ ａ ｌ ｇ ／ ｋ ｇ 、１ ８ ． ５￣ ｇ ／ ｋ ｇ 。结 论 ：改善 后 的方法 简便 、离效 、准 确 ，能满 足猪 肉 中氟喹 诺酮 类药 物 残 留的检 测 ［ 关键 词】 高效 液相 色谱 ；氟 喹 诺酮类 药 物 ；猪 肉 ：改进 【 中 图分类 号］ ０ ６ ５ ［ 文献 标识 码 】 Ａ 【 文 章编 号］ １ ０ ０ ７ １ ８ ６ ５ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ６ ． ０ １ ６ ９ ． ０ ２