植物组织中总氮含量的测定（凯氏定氮仪自动定氮法）一、原理：采用模块式消化，在硫酸作用下样品中的蛋白氮转化为硫酸铵。

通过添加硫酸钾升高沸点，高的沸腾温度有助于打断蛋白中的肽键和把氨基转化成氨离子，加入铜催化剂用于提高反应速率。

氨用碱性蒸馏释放并用标定的酸溶液滴定定量，采用颜色终点检测技术。

最后通过计算得出含氮量。

二、盐酸标定:a. Na2CO3校正液测定称取10g 左右无水Na2CO3研成细粉，在265℃1h或200℃2h的条件下烘干，在干燥器中冷却后移入烧瓶中，盖紧，在干燥器中存放b. 指示剂将0.1g 甲基红溶于100ml 乙醇中c. 过程称取0.1~0.15 Na2CO3 ，记重W，移入锥形瓶中，加20ml 水，加10滴指示剂，用待测的盐酸滴至粉红色，记下所用盐酸毫升数A1，将锥形瓶中的溶液煮沸几分钟，冷却至室温，此时粉红色褪去，继续用盐酸滴定至粉红色复现，记下滴定毫升数A2。

（A1为25多，可先加20ml后再慢慢滴定）d. 计算：C（mol/L）=(18.86×W1)/(A1+A2)三、试剂：1〉浓H2SO4（98%）2〉含铜凯氏催化片（每片含3.5g K2SO4和0.4g CuSO4·5H2O）。

3〉40%NaOH（W/V）4000g溶于10L水中4〉1%硼酸（H3BO3）吸收液，称取100g硼酸于10L水中，加100ml 溴钾酚绿溶液（100mg溴钾酚绿溶于100ml乙醇中），再加入100ml 甲基红溶液（100mg甲基红溶于100ml乙醇中。

），最后加适量的4%NaOH溶液，调PH值（H3BO3溶液最后颜色为紫红色为佳）。

5〉0.1mol/L盐酸标准溶液，标定后使用。

四、操作步骤（1）向每个消化管中加入0.1克样品，一片凯氏催化片，10ml浓硫酸。

接通消化器的电源，加热到420℃条件下消化30分钟，直到管内液体变为清澈透明为止。

（2）待消化管冷却后加在全自动凯氏定氮仪，按仪器说明进行操作，最后读数即可。

凯氏定氮仪用下列公式计算%氮含量：%凯氏氮= [(Vs – Vb)×N×1.401]/（W×10）其中：Vs ＝用于滴定样品的标准酸ml数Vb ＝用于滴定试剂空白的标准酸ml数N ＝标准HCL的当量浓度(0.1000)14.01 ＝氮的原子量W ＝样品或标准的重量g数10 ＝把mg/g转变为百分数的因数3，5—二硝基水杨酸（DNS）比色法测还原糖一、仪器与用具25ml刻度试管；离心管；100ml玻璃烧杯；100ml三角瓶；刻度吸管1ml、2ml、10ml；沸水浴；离心机；电子天平；分光光度计。

二、试剂1. 1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯葡萄糖（预先在80℃烘至恒重），在小烧杯中用蒸馏水溶解后定容至100ml，摇匀，冰箱中保存备用。

2.3,5－二硝基水杨酸(DNS)（显色液）：6.3g3,5－二硝基水杨酸和262ml 2mol/LNaOH，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g无水亚硫酸钠，搅拌溶解。

冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶备用。

三、实验步骤：1．可溶性糖的提取：准确称取烟叶样品0.100g，置于离心管中，加入8ml80%乙醇，于80℃水浴浸提30min，冷却后于4000转离心5min 收集上清液，残渣再加入8ml80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100ml容量瓶中并定容至100ml。

2．标准曲线的绘制：取干洁25ml试管6支，依次加入葡萄糖标准液（1mg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml和蒸馏水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml，再分别加入DNS试剂1.5ml，于沸水浴中加热5min，取出后立即浸入冷水冷却至室温，再用蒸馏水定容至25ml刻度处，摇匀，然后在540nm波长处比色。

3．还原糖的测定：取提取液1ml于试管中（空白中用1ml蒸馏水代替），加入DNS试剂1.5ml，摇匀，于沸水浴中加热5min，取出后立即浸入冷水冷却至室温定容至25ml，摇匀，然后在540nm波长处比色。

4．计算：还原糖（％）=〔（C×V/a）/(W×1000)〕×100 C—标准曲线方程求得的还原糖含量mg数；V－提取液的体积（ml）；W—样品重量（g）;a=0.01注意：1.在称取烟叶前离心管内先加入4ml80%乙醇，加入烟叶后立即充分摇匀，以防烟叶凝结成块，影响还原糖测定。

2.称取完烟叶后，在浸提之前先混匀后静置10min。

3.在第一次浸提过程中应充分摇匀3-4次，第二次和第三次充分摇匀2次，摇匀之前先将盖子打开，释放管内热蒸汽，以防管内液体喷出。

4.吸取提取液之前应再次摇匀提取液，比色之前也应将待测液充分摇匀后才能进行比色，因为还原糖沉降速度极快，不充分摇匀将严重影响实验数据的准确性。

5.水浴锅内水位必须达到离心管内液面之上6.比色之前应先检查比色杯空杯（内乘双蒸水）的吸光度是否一致。

最好选用差别在0.003之内的比色杯。

烟叶中烟碱的测定（提取脱色法）（一）方法原理由于烟碱和无机酸结合较有机酸强，因此，用一定浓度的无机酸提取，完全可以把烟碱从烟叶中分离出来。

同时，用粉状活性炭脱去提取液中杂色。

然后根据烟碱对紫外光有选择吸收，其吸光度与烟碱含量呈正相关，可由紫外分光光度计测得待测液的浓度，计算出烟碱的含量。

（二）试剂及仪器47.2g/LHCl：吸取20mLHCl（37%的盐酸或密度为：1.18g/ml的盐酸），定容至500ml分析天平、紫外分光光度计（石英比色皿）、恒温水浴锅。

（三）操作步骤1．待测液的制备称取粉碎均匀通过60目筛的烟样30mg（0.03g）左右，置于100mL三角瓶中，加入1/3角勺粉状活性炭和HCl 20mL，不断振荡10min，然后过滤到100mL容量瓶中，并少量多次用蒸馏水冲洗三角瓶，将洗液滤入容量瓶中，并定容至刻度，充分摇匀，以备测定用。

另把HCl20mL加入100mL容量瓶中，用蒸馏水定容后，摇匀做空白。

2．测定将上述待测液置紫外分光光度计上，以空白作参比，调吸光度为零，在236nm、259 nm、282 nm处测定待测液的吸光度。

（四）结果计算1.059×[A259－1/2（A236+A282）]烟碱%＝————————————×100×100 W（1-水%）×34.3×1000式中 W——干样重(g)；1.059——换算为重量法测定值的校正系数；34.3——烟碱的吸光系数。

(五)注意事项（1）不要用颗粒状活性炭。

（2）及时清洗用具，否则活性炭很难洗干净烟叶中氯含量的测定（浸提法）——热蒸馏水法一、实验原理依据烟叶中的氯大都以离子状态存在的特点,用热水将氯从烟叶中提取出来,可节省时间、提高效率,但提取液中有影响滴定终点的黄色素。

根据碱性醋酸铅常用作液体澄清剂的特点,在用热蒸馏水浸提烟叶中氯的同时,加入碱性醋酸铅,有效去除浸提液中干扰测定的色素,得到一个快速制备氯待测液前处理的简便方法(浸提法)。

在含有C1-的溶液中，以K2C rO 4作指示剂，用AgNO3标淮溶液瘸定，由于AgCl 的溶解度比Ag2CrO4小，反过来说，铬酸银的溶液度比AgCl的高，开始时只生成AgCl沉淀，待CI-作为AgCl全部沉淀完毕后，过量一滴AgNO3才生成Ag2CrO4砖红色沉淀。

NaCl十AgNO3_——＞AgC1(乳白色)十NaNO3。

铬酸钾和银盐的反应如下：K2CrO4十2AgNO3——＞2KNO3十Ag2CrO4(砖红色)由消耗的标准硝酸银用量，即可计算出氯离子的含量。

二、试剂与仪器1.材料烟叶样品经40℃烘干,粉碎过60目筛,混匀。

2.主要仪器和试剂（1）离心机，恒温振荡器及各种玻璃器皿；（2）0.01 mol/L AgNO3标准溶液, 50 g/LK2CrO4，活性炭，12％Na2HCO3三、试验方法1.准确称取0.3 g烟叶样品,置于50 ml离心管中,加入60℃热蒸馏水25ml,活性炭大约0.4~0.5g,振荡15 min。

2.4000转离心6min后,过滤到50 ml容量瓶中,冷却后定容至刻度,充分摇匀。

3. 吸取滤液25ml于100 ml三角瓶中,用12％Na2HCO3调待测液到微碱性（加0.35ml左右，pH基本在7-9之间）。

4.加入50 g/L K2CrO4指示剂10滴（0.4ml）,用0.01 mol/L AgNO3标准溶液滴定,不断摇动,当待测液出现砖红色沉淀时,记下AgNO3的用量,计算测定结果。

四、结果计算式中 V—滴定时所消耗硝酸银的体积N—硝酸银的当量浓度W—烟叶称祥重量(克)，0.0355—每l毫克当量氯离子的克数100—换算成每100克烟叶中氮的百分含量。

五、注意事项1.用铬酸钾做指示剂只能在中性或微碱性溶液中进行，测定溶液应在pH6.5—10.5之间。

这是因为在酸性溶液中，指示剂的铬酸根离子与氢离子发生如下反应：2H+十2CrO4-＝2HCrO4=CrO4-十H2O因而减低了铬酸根离子的浓度，影响铬酸银沉淀的生成。

然而在强碱性溶液中，则银离子与氢氧根离子反应生成氧化银沉淀，又会影响分析结果，其反应如下：2Ag-十2OH-＝2AgOH==Ag2O十H2O2.氯离子含量太高时，生成白色氯化银沉淀过多而影响终点，此时可减少待测液吸取量。

3.大量硫酸盐存在会对测定发生干扰，当待测液中硫酸根离子存在量在32毫克以下时对本测定一般无干扰。

4．滴定时要充分摇动：在等当点前C1-没有被滴定完，但有一小部分C1—会被AgC1沉淀吸附，特使终点提前，所以要充分摇办使被沉淀吸附的C1—释放出来，以获得准确的结果。

5.可以提前烘干样品，计算时不考虑含水量。

烟叶钾的测定——NH4OAc浸提，火焰光度法一、方法原理以NH4OAc作为浸提剂与阳离子起交换作用，NH4OAc浸出液常用火焰光度计直接测定。

为了抵消NH4OAc的干扰影响，标准钾溶液也需要用1mol·L-1NH4OAc配制。

二、主要仪器与试剂1.火焰光度计、往返式振荡机2.试剂（1）1mol·L-1中性NH4OAc（pH=7.0）溶液。

称取化学CH3COONH477.09g加水稀释，定容至近1L。

用HOAc或NH4OH调pH=7.0，在酸度计上调节）。

根据50mL所用NH4OH或稀HOAc的毫升数，算出所配溶液大概需要量，最后调至pH=7.0。

（2）钾的标准溶液的配制。

称取KCl（二级，110℃烘干2h）0.1907g 溶于1mol·L-1NH4OAc溶液中，定容至1L，即为含100µg·mL-1K的NH4OAc溶液。