存活率，再 生率和脱毒 率高
意义：超低温保存是种资源长
久保存的理想方法，在液氮中亦 可保证材料的遗传稳定性.
去除原菌 感染
原理：在冰冻和冻融期间，细
胞的结构和功能受损严重，含有 病毒的顶端细胞液泡较大，水分 多，易形成冰晶而致死，分生组 织含水分少，胞质浓，不易被冻 死
植株再生后无毒
优点
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植物组织培养脱毒技术进展 研究
主讲人： 小组成员：邱智海，史丽丽，王 珍，熊化鑫，徐德贵， 徐小金，鄢惠庆，杨 林，余欢，曾国敏
组织培养脱毒
脱毒技术的发展过程
常用的脱毒技术 无病毒植株检测方法 脱毒技术的未来
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植物组织培养常用脱毒方法
茎尖大小和脱毒率
热处理
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如采用茎尖培养和热处理都不能除去 悬钩子丛矮病毒（RBDV），若热处 后，再采用茎尖玻璃化超低温保存， 存活的植株中35%无该病毒
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脱毒甘蔗
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脱毒草莓
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敏感，该法只对球状病毒（如葡萄扇 叶病毒，苹果花叶病毒）或线状病毒 （如马铃薯X,Y病毒）有效果，而对 杆状病毒（如千日红病毒）不起作用
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制作人：王珍
分子生物学法
1.核酸杂交技术； 2.RT-PCR； 3.荧光定量PCR； 4.DNA微阵列技术
特异性强，灵敏度高，而且不需要准备 抗血清以及放射性探针，操作简单，适 用广泛，是植物病毒检测的重要方法
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展望
现有的脱毒技术多种多样，各有优缺 点，目前应用的趋势是将不同的方法 结合起来，从而阻止植物病毒的扩散
抗病毒化学药剂
超低温保存
抗病毒化 学药剂来抑制病毒核 酸与蛋白质的合成或 是改变寄主的代谢方 式
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•化学抗病毒试剂：9（2-羟二氧）甲基鸟嘌 呤，2-硫尿嘧啶，叠氮 胸苷，2,4-氧六氢三氮杂 苯（DHT）和类似嘌呤 碱基代谢物质三氮唑核 苷（病毒唑）
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•优点：与茎尖培养相 结合，可较容易脱去 多种病毒，而且此法 对取材要求不严，接 种茎尖可大于1mm， 易于分化出苗，提高 成活率 •缺点：不能脱去所有 病毒，尚不能完全抑 制病毒使其失活
脱毒技术的发展过程与应用
自1952年法国莫勒尔使用生长点培养 法获得无病毒植株后，该种脱毒技术被 广泛使用。通过脱毒，使植株恢复种性， 增强抗性，生长健壮，光合作用增强， 明显提高了植株的产量和品质。尤其是 该技术在马铃薯和甘薯上的应用，对其 种植逐步走向规模化，标准化，区域化 具有重要意义。
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酶联免疫吸附法
原理
优缺点
①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性 ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原 或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。用洗涤的方法使固相 载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载 体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底 物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的 量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。 优点：由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从 而使测定方法达到很高的敏感度。 缺点：需要制备抗体，而且一次只能检测一种病毒。
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茎尖脱毒法
原理：病毒在寄主植物内靠维管系统运输，茎尖分生 组织中未形成维管束，所以病毒的运动受阻，所以茎 尖组织中不含或只含低浓度病毒
依据： 病毒在植物体内分布是不均一的，越接近生 长点约（0.1-1mm区域），病毒浓度越稀，因此有可 能采用小的茎尖离体培养而脱除植物病毒 技术关键：1.被脱毒植物携带病毒的诊断及其在体内 的分布；2.母体植株的选择和预处理；3.茎尖的剥离； 4.脱毒效果检测；5. 影响脱毒效果的因素
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无病毒植株检测
脱毒后的无病毒植 株须经严格的病毒 鉴定和检测证明确 属无毒良种种源， 并采取严密的防病 毒重复污染措施才 能取得预期效果
建立快速，高灵敏 度，高通量的病毒 检测体系是病毒害 预防和综合防治的 先决条件
1.酶联免疫吸附反应 （ELISA） 2.分子生物学法
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东方百合组培脱 毒时，茎尖小于 0.3mm，成活率 只有20%，小于 0.1mm全部死亡
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高温处理
热处理
原理：高温可抑制病毒的增殖，
减缓病毒在植物体内的扩散速度
方法：1.热水浸泡；2.高温空气处
理.
优点：热处理结合适宜的茎尖分
生组织大小是获得无病毒植株的关键 因素.
缺点：并非所有病毒都对热处理
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脱毒工作室
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超低温
无需昂贵 仪器或设 备 出无毒苗 所需时间 短
指示植物鉴定：a.摩擦接种法 b.嫁接法
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脱毒率
席梦利等对宜兴 百合脱毒培养得 出接种 0.3~0.5mm茎尖 脱毒效果最好
茎尖脱毒的关键是茎尖大小和脱毒率， 脱毒的成功率与所切茎尖分生组织大 小成反比，为了提高脱毒率，须切下 足够小茎尖分生组织（0.2~0.5mm） 同时其再生能力与分生组织大小成正 比