1. 发酵 2. 除菌过滤
1. 甲醛脱毒
3.脱毒和精制
2. 超滤浓缩 3. 硫酸铵沉淀法、超滤精制
1. 微孔膜除菌过滤
4.除菌及吸附
2. Al(OH)3吸附
脱毒、浓缩和精制工艺
1.脱毒、浓缩和精制工艺流程
发酵滤液
脱毒
0.36%甲醛，pH 中性，37℃,30d
原制类毒素
超滤浓缩
浓缩液
0.16g/ml 硫酸铵沉淀
氨基酸及维生素等，在维持一定的产毒水平下，适当加深 水解，同时加入少量的甘油及炭末，以增加厌氧环境、稳 定毒素和吸附培养过程产生的有害物质，从而提高产毒水 平获取高价毒素。 3.培养、产毒和收获毒素：一般采用培养罐深层培养，培 养基中加炭末、甘油等以利破伤风菌生长和产毒，在培养 过程利用平压通气的方法排出破伤风菌生长过程中产生的 H352S℃和或CO低2于气3体2。℃培产养毒温水度平必都须会严大格幅控度制降在低3。4℃，高于
用法
1.上臂三角肌肌内注射。 2.剂量 （1）无破伤风类毒素免疫史者应按附表方法进行全程 免疫。
（2）经全程免疫和加强免疫之人员，自最后1次接种3 年以内受伤时，不需注射本品，超过3年者应用本品做 1次加强注射，严重污染的创伤或受伤前未经全程免疫 者，除注射本品外，可酌情在另一部位注射破伤风抗毒 素。
注意
若已经注射过破伤风类毒素的人类发生外伤后， 没有必要再注射破伤风抗毒素，因为做为类毒素 的抗原和抗毒素的抗体同时注射后也会发生拮抗 作用而使相互作用降低，失去免疫效果。
吸附精制破伤风类毒素
本品系精制破伤风类毒素经氢氧化铝吸 附制成。用于预防破伤风。
本品为乳白色均匀混悬液，含防腐剂硫 柳汞，长时间放置后吸附剂下沉，溶液上 层应澄明无色，但经振摇后能均匀分散。
破伤风类毒素是用破伤风菌经减毒加工处理后制成的疫苗， 注射到人体后需要经过一定时间后人体才会产生自动
免疫力。因此，如果人体未接种过破伤风类毒素而发生外 伤，或是刚刚注射破伤风类毒素而自身尚产生免疫抗体时 发生外伤，为防止感染破伤风，应首先注射破伤风抗毒 素，以使被动免疫和自动免疫衔接起来，从而达到预防破 伤风的目的。
本品系由无细胞百日咳疫苗原液、白喉类毒素原液及破伤风类毒素原液 加氢氧化铝佐剂制成。为乳白色悬液，放置后佐剂下沉，摇动后即成均 匀悬液，含防腐剂。（主要用于3个月~6周岁的儿童）
本品系用破伤风梭状芽孢杆菌菌种，在适宜的培养基中培养产生 的毒素经甲醛脱毒、精制，并加入氢氧化铝吸附制成。为乳白色 均匀混悬液，长时间放置佐剂下沉，溶液上层应澄清无色，但经 振摇后能均匀分散，含防腐剂。
破伤风类毒素 - 【保存期】
于2-15℃ 冷暗干燥处保存，有效期为1 年。
破伤风类毒素 - 【注意事项】 1.体质瘦弱，患热性病、呼吸道病、心脏病以及临
产前2个月的家畜均不宜注射。
2.使用时必须充分振摇，混合均匀。
3.注射后15日内，须逐日进行观察。如注射部位发 生化脓，应施行外科治疗。反应过强时，可注 射破伤风抗毒素。
破伤风梭菌
破伤风梭菌是一种革兰氏阳 性厌氧芽胞杆菌，广泛存在 于泥土、粪便之中，对环境 有很强的抵抗力。创伤时其 可污染深部组织，若伤口较 深，又有坏死组织，局部缺 血、缺氧，就形成了适合细 菌生长繁殖的环境。
破伤风梭菌
破伤风临床表现
破伤风防治原则
由于破伤风痉挛毒素能迅速与神经组织发生不可逆性结合， 故一旦发病治疗困难，所以预防尤为重要。如遇到可疑伤 口应做到清创、扩创，同时使用大剂量青霉素抑制细菌繁 殖。用破伤风抗毒素对患者进行紧急预防，对已发病的人 要进行特异性治疗。
1889： Kitasato用减弱的毒素免疫家兔制 备出破伤风抗毒素，证明了给动物注射培 养物的滤液而产生破伤风的症状，是因为 有一种毒素的存在
1889： Von behring和Kitasato用抗毒素 治疗人的破伤风，证明对有明显破伤风症 状的患者，基本上是无效的
1923： Ramon报告用甲醛和热处理的方 法，制备出了有抗原性的类毒素
破伤风的治疗
1，彻底清创，用双氧水或１:１０００的
高锰酸钾液体冲洗，或湿敷伤口，开放伤口，绝 禁缝合。伤口已愈合，一般不需清创。 3.破伤风抗毒血清的应用：Ｔ．Ａ．Ｔ１０-２０万 ｕ，或５万加入５％葡萄糖溶液５００-１０００ ｍｌ静滴。以后每日肌注５０００-１００００单 位必要时鞘内注射，人体破伤风免疫球旦白也可 应用，免于皮试。
破伤风类毒素 - 【用法与用量】
大动物（马、驴、骡、鹿）一律皮下注射1毫升，小驹等 幼畜减半，经6个月后，再注射1次，山羊、绵羊皮下注射 0.5毫升。平时注射1次即可，受伤时再用同剂量注射1 次。 若受伤严重，还应皮下注射破伤风抗毒素。
破伤风类毒素 - 【反应】
注射后数小时，在注射部位发生直径5-15厘米的炎性肿 胀，经5-7日炎症逐渐消退，但遗留一个硬结，需再经多 日才能消散。
滤液
0.10g/ml 硫酸铵
沉淀
用注射用水溶解
过滤
滤液
超滤
去除硫酸铵
滤液
除菌过滤
pH6.8~7.2,0.22um 的微孔滤膜
精制类毒素溶液
Al(OH)3吸附 吸附精制破伤风类毒素 包 装 精制类毒素制剂
发酵工艺要点
1.种子: 应选用产毒效价高，免疫力强的破伤风菌株。 2.产毒培养基：国内多采用以蛋白质水解为基础，再添加
（3）用含破伤风类毒素的混合制剂做过全部免疫者， 以后每10年用本品做1针加强注射即可。
接种对象
主要是发生创伤机会较多的人群，孕妇接种本品可 预防产妇及新生儿破伤风
孕妇可在妊娠第4个月注射第1针，6～7个月时注射 第2针，每次注射0.5ml。
破伤风类毒素 - 【免疫期】
注射后1个月产生免疫力，免疫期为1年。第二年再注射 1.5毫升，免疫力可持续4年。
（3）除菌过滤：将精制类毒素稀释、调整到适 当浓度（即含万分之一硫柳汞、0.85%NaCl),用 5%NaOH调pH至6.8~7.2。使用0.22um的微孔 虑膜，除菌过滤分装。
（4）吸附精致破伤风类毒素的制备:将类毒素吸 附于Al(OH)3以增强类毒素的免疫效果和减轻接种 副反应.
（5）精致类毒素的吸附:在无菌条件下,按 7Lf/ml精致类毒素加入吸附剂中,补加1/100,硫柳 汞防腐剂,使其最终含量为1/10 000.同时补加 1/15mol/L,pH6.6磷酸盐缓冲,使其含量达到 1/300mol/L,搅拌均匀后分装.
1.脱毒、浓缩和精制工艺要点
（1）脱毒：收获的毒素经脱毒后即为类毒素，脱 毒一般用0.3%~0.4%的甲醛溶液。此外pH、温 度及脱毒时间等均影响脱毒效果。现采用加入 0.36%的甲醛、pH中性、37℃脱毒。
(2)浓缩和精制 ：一采用超滤浓缩与硫酸铵沉淀相 结合的方法精制破伤风类毒素，即超滤、硫酸铵 沉淀、超滤三步法，可有效地提高破伤风类毒素 的制品质量。
1926： Ramon和Zcokker用破伤风类毒 素成功地给人进行了免疫，从而开创了类
毒素预防免疫的新时代。
破伤风类毒素的概念
破伤风类毒素: 是一种用于破伤风 病的自动免疫制剂， 是由产毒力高的破 伤风梭菌培养液经 福尔马林脱毒后精 制或毒素精制后个 脱毒而成的。
破伤风梭菌
破伤风类毒素制造工艺
破伤风类毒素培养设备
破伤风类毒素和破伤风抗毒素
破伤风类毒素是用来预防破伤风的一种免疫疫苗。为了防 止破伤风病的发生，医生给病人注射一定量的破伤风类毒 素，从而达到预防破伤风病的目的。
而破伤风抗毒素是用对破伤风病具有免疫力的人或动物血 清经加工精制而成的免疫抗体，注射到人体后，可直接对 破伤风起到抵抗的作用，但这种抗毒素是被动的，而且在 体内只能维持很短时间，因此，最根本的还是应该注射破 伤风类毒素，以使体内产生自动免疫抗体，从而达到长久 的预防皮伤风的目的。
4.控制、解除肌肉强直性收缩：可用冬眠灵或苯巴 比妥 钠，１０％水合氯醛，安定，杜冷丁等。 抽搐严重时可用硫喷妥纳液体静注。
5.预防性气管切开：有呼吸困难时应用，切开后应 加强 护理，及时吸痰。
6.抗生素(头孢唑啉钠)的应用。
7.全身支持疗法
破伤风类毒素的发展历史
1884： Nicolarier通过动物实验发现了破伤 风与泥土中的细菌有关。
（1）菌种：国内使用的生产菌种为罗马尼亚 L58株，菌号为64008
（2）发酵工艺流程：
菌种
传代 33~34℃.48h
活化菌种
扩陪 33~35℃.
发酵种子
发酵 33~35℃.
发酵液
除菌过滤
滤液
破伤风工艺类毒素制造
1.
破 伤 风 类 毒 素 制 造 工 艺
1.菌种传代
1. 传代
2. 扩培 2.培养产毒及收获毒素
如果人体未接种过破伤风类毒素而发生外伤，或是刚刚注 射破伤风类毒素而自身尚产生免疫抗体时发生外伤，为防 止感染破伤风，应首先注射破伤风抗毒素，以使被动免疫 和自动免疫衔接起来，从而达到预防破伤风的目的。若已 经注射过破伤风类毒素的人类发生外伤后，没有必要再注 射破伤风抗毒素，因为做为类毒素的抗原和抗毒素的抗体 同时注射后也会发生拮抗作用而使相互作用降低，失去免 疫效果。