员 还 有 牛 瘟 病 毒 （ Ｐ 、 瘟 热 病 毒 （ Ｄ 、 豹瘟 病 毒 Ｒ Ｖ）犬 Ｃ Ｖ） 海
（ Ｄ 等 Ｐ Ｖ）
检测 方 法 ， 些 方法 简便快 捷 ， 这 具有 高通 量 、 敏感 度 的优 高 势． 能够有 效应用 于大规模 的样 品筛 选和疫情 监控 些方 这
法包括 竞争 Ｅ ＩＡ、夹 心 Ｅ ＩＡ、 Ｔ Ｐ Ｒ、荧 光定 量 Ｒ — ＬＳ ＬＳ Ｒ — Ｃ Ｔ Ｐ Ｒ、 Ｃ Ｅ ＩＡ等 。 Ｃ Ｐ Ｒ— Ｌ Ｓ ２１ 国际诊 断技 术研 究进展 ．
Ｒ ｍｉａｔ ｉ ｏ ｔ ｉ ａ ｉａ ［］Ｔ ｅ Ｖ ｔｒ ａｙＲｅｏｄ ｕ ｎ ｎｓ ｎ ｇ ａ ｎ Ｐ ｋｓ ｎ Ｊ ．ｈ ｅｅｉ ｒ ｃｒ ． ｓ ｔ ｎ
１９ ，３ （ ） １ ８ １９ ９ ６ １９ ５ ： １ － １ ．
２ Ｃｈ ｐ Ｓ Ａｎ ｅ ｏ ｏ ｃ ａ ａｙ ｉ ｆ ｔ ｅ ｐ ｅ ｅ ｔｏ ｆ Ｐ ｓｅ ｉ ． ｃ ｎ ｍｉ ｎ ｌ ｓｓ ｏ ｈ ｒ ｖ ｎ ｉ ｎ ｏ ｅ ｔ
Ｎ Ｏ 作用 ２ ａＨ ４小 时可 以灭活 病毒 ５‘ 次 分布 着 Ｎ Ｐ Ｍ— — Ｌ６个 基 因 ． 别 编码 ６种 结 依 — — Ｆ Ｈ— 分 构蛋 白和 ２种 非结 构 蛋 白
２ 诊 断 技 术
ＰＲ Ｒ Ｖ的感 染 其后 韩 国科学 家Ｃ ｏ 等［又研 究 出了一 种 ｈｉ ６ ］
向是 从 分 子 水 平 出发 ． 于 Ｐ Ｒ 和 Ｅ ＩＡ 建 立 的 各 种 新 型 基 Ｃ ＬＳ
羊 高度 易感 ． 该病 发病 率可 达 １ ０ ． ０ ％ 目前没 有感 染人 的报
道 …。小 反 刍兽 疫属 国际兽疫 局 （ Ｉ 法定 通报 的 动物 疫 Ｏ Ｅ） 病 ． 国规定 为 一类 动物 疫病 我 该 病于 １４ ９ ２年首次 在非洲 的科特迪 瓦发 生 近几年 在 我 国周边 国家 时有发生 ． 国于 ２ ０ 我 ０ ７年 ７月在 西藏 自治 区 Ｅ土县 发生小 反 刍兽疫 疫情 ［． ｔ ３ 虽然 我 国采取 了快 速 、 效 ］ 有
同 时 扩 增 出 Ｐ Ｒ 基 因 上 一 个 ３ ７ｂ Ｐ ＶＮ ３ ｐ的 片 段 和 Ｍ 基 因 上 一 个 １ １ｐ的 片 段 ， Ｒ Ｖ 只 能 扩 增 出 Ｎ 基 因 的 ３ ７ｂ ９ｂ 而 Ｐ ３ ｐ
１ Ａ ｊｄＨ， ａ ｘ ｕ－ｓａ Ｆ ｒｔ ｅ ａ．ｅｓ ｅ ｅｉ ｍ ａ Ｑ ｍａ－ ｌＩｌｍ，ｏｙｈＭ，ｔ １ ｔ ｄ ｓＰ ｔｓ Ｐ ｔ
Ｐ ＣＲ、 荧光 定 量 ＲＴ Ｐ Ｒ、 Ｃ Ｅ ＩＡ 等 ， 些新 技 术灵 敏 、 捷 、 — Ｃ Ｐ Ｒ— ＬＳ 这 便 高通 量 ， 而且 能 够在 野外 进行 。现将 这 些诊
断技 术 的 研 究 进 展 作 一 综 述
关键 词 ： 小反 刍兽 疫 ： 断技 术 ： 究进 展 诊 研 中 图分 类号 ：８ ４４３ ￥５ ． ＊ 文 献标识 码 ： Ｂ 文 章编 号 ：０ ４ ５ ９ （０ ） １ ０ ０ — ２ １０ — ０ ０ ２ １ １ － ０ ７ ０ １ 淋 巴结 、 、 等 组 织获 取 抗原 ， 免试 验 羊 获得 抗 血 清 。 脾 肺 高
获 得结 果 ＶＮ Ｔ是 一种 灵敏 和特 异 的检测方 法 ． 通常 是在 原 代羔 羊 肾 细胞 或 非洲 绿 猴 肾细胞 进 行培 养 Ｒ Ｖ感 染 Ｐ 产 生的抗 体 和 Ｐ Ｒ Ｐ Ｖ感 染 产 生 的抗 体会 产 生交 叉反 应 ． 可 与 Ｒ Ｖ进 行 交 叉 中 和 试 验 ．当 Ｐ Ｒ 中和 滴度 高 于 Ｒ Ｖ Ｐ Ｐ Ｐ 时． 则判 为 Ｐ Ｒ阳性 但 是 Ｖ Ｔ需要 １ ～ ２天才 能得到结 Ｐ Ｎ ０１ 果。 需要组 织培养 ， 消毒样 品 ， 劳动强 度大 。 这些传统 方法要 么操作 复杂 费时较长 ． 么灵敏度 或特异性 不高 ． 要 存在 着各 种各 样 的问题 ． 不适 合实 际应用 于 Ｐ Ｒ疫情 的 大规模 检验 Ｐ 与监测 因此 目前 各国都普 遍在原有 技术基础 上 ． 发新的 开 检测方 法 随着分 子生物学 技术 的发展 ． 目前主要 的研 究方
快 速竞 争 Ｅ ＩＡ试验 （ａｉ — ＬＳ 方法 用 来检 测 和 监 ＬＳ ｒｐｄｃ Ｅ ＩＡ）
控 Ｐ Ｒ 该 方 法 是 在 包 被 了 Ｐ Ｒ 重 组 核 衣 壳 蛋 白 （Ｐ Ｐ Ｐ Ｖ ｒ—
Ｐ Ｖ Ｎ） Ｒ — 的反 应皿 中 ． 将血 清 与 单抗 混 合 孵育 ３ ０分 钟 ， 然 后对 单抗 进行 定量 检 验了 ２ ９个 Ｐ Ｒ ４ Ｐ Ｖ阳性 血清 和 ７ ３ ３ 个 阴性 血 清样 品 ．相对 特异性 与敏 感性 分别 达 到了９ ． ８５ ％
和 ９ ．％ 用该 方法 检测 免疫 了 Ｒ Ｖ的高免 血清 ． Ｖ Ｔ ３４ Ｐ 当 Ｎ 滴度 大 于 ５ ２时 ． ｌ 检测 结 果 呈 阳性 ． 显示 的抗体 滴 度 非 但
常低 ． 只有 ２ １ 。如果 Ｖ Ｔ滴 度 ≤１ ８ 则 检 测结 果 呈 阴 ～６ Ｎ ２． 性 ． 明该 方 法能 较好 地 区分 Ｐ ＲＶ与 Ｒ Ｖ感染 说 Ｐ Ｐ
然 后 于 琼 脂 糖 凝 胶 板 上 进 行 免 疫 扩 散 ．反 应 ２ ４小 时 后 可
小反 刍 兽疫 （ Ｐ 是 由小 反 刍兽 疫 病 毒 （ Ｐ Ｐ Ｒ） Ｐ ＲＶ） 起 引 的 ， 床 以 发热 、 临 口炎 、 泻 和肺 炎 为 主要 特 征 的急 性 、 腹 烈 性 传染 病 主要 感染 包括 野 生动 物在 内 的小 反刍 动物 ． 山
的扑灭措施 ． 该病 已威胁 到了我 国小反 刍动物 的健康 。 但 由 于该 病没 有有效治 疗方法 ． 只能预 防 ． 因此诊 断监测 技术 是 控 制该病 的重要 手段 ． 对该病 开展研 究也显 得 十分 重要
１ Ｐ ＲＶ 结 构 概 述 Ｐ
Ｐ Ｒ 是副 黏 病毒 科 麻疹 病 毒属 成 员 ． ＰＶ 同属 的其 他 成
克隆血 清从 待测 样 品 中捕 获抗 原 ，然后 用单 抗进 行 检测 。
对 ２ １个实 验室 样本 和 ２ ９个野 外 样本 进行 检测 ． ３ ５ 特异 性 达到 ９ ．％． ２８ 敏感 性达 到 ８ ． ． 种方 法能够 有效 避 免前 ８９ 这 ％
由于小反 刍兽 疫没 有有 效 的治疗 方法 ，只能 预 防 ， 因 此 诊断 监测 技术 是控 制该 病 的重要 手段之 一 。 通过 加强 对 该 病 的流行 病学 监测 ． 够进 一步 明晰该 病 的致 病机 理 和 能 免疫 机理 ． 有效 防控乃 至最 终 消灭小 反 刍兽疫 奠 定理 论 为 基础 基 于 Ｐ Ｒ和 Ｅ ＩＡ 的各种 检测 技 术 ， Ｃ ＬＳ 具有 快 速 、 特 异、 灵敏 、 高通量 性 ， 将成 为 在 国际上检 验 检疫 小反 刍兽 疫 常用 、 用 的技术 通 参 考文献 ：
７２ 第１ １ 第卷 期
２１ ．． 夹 心 Ｅ ＩＡ ２ ＬＳ
鸯麓 莴 兽缝
反 刍兽疫 的有 效 防控 、 障进 出 １ 品安 全提 供 了重 要 的 保 ３食 技 术储 备
３ 结 论
Ｓ ａｈ等 Ｅ 展 出针 对 Ｐ Ｒ ｈｇ ７ ］ 发 Ｐ Ｖ核衣 壳 蛋 白抗 原 表位 的 特异性 单抗 ４ ６ 并 以此 建立 夹心 Ｅ ＩＡ方法 。首 先用 多 Ｇ ， ＬＳ
ｄ ｓＰ ｔｓＲ ｍｉａ ｔ ｉ ｉｅｉｎｇａｓ Ｊ ． ｖｎｉ ｅｅｉ ｅ ｅｉ ｕ ｎｎｓ ｎＮ ｇｒ ｏｔ［ ］ ｔ ｅ ｅ ｔ ｅｖｔｒ ｖ —
ｎ ｒ ｅ ｉ ｎ ， ９ ３ １ （ ） １ １ １ ０ ａｙ ｍ ｄｃ ｅ １ ９ ，６ ２ ：４ — ５ ． ｉ
传 统 的 诊 断 方 法 有 琼 脂 糖 凝 胶 免 疫 扩 散 试 验
（ ＧＩ 、 流 免 疫 电 泳试 验 （ Ｉ Ｐ） 间 接荧 光 抗 体 试 验 Ａ Ｄ） 对 ＣＥ 和 （Ｆ Ｔ） ＩＡ 以及 病 毒 中和 试 验 （ Ｎ 、 疫 捕 获 Ｅ ＩＡ 试 验 Ｖ Ｔ） 免 ＬＳ （— ＬＳ 等 。 中 Ａ Ｉ Ｖ Ｔ与 ｃ Ｅ ＩＡ是 最 主要 的方 ｃ Ｅ ＩＡ） 其 Ｇ Ｄ、 Ｎ — ＬＳ 法 ＡＧ Ｄ是一 种简 单廉 价 的检测 方法 ． Ｉ 首先 从病 体 黏膜 、
一
中 和表 位 的单 克 隆抗 体 ． 建立 了竞 争 Ｅ ＩＡ 的检测 方 法 ＬＳ 该技 术 相对 于 传统 的 Ｖ Ｔ． Ｎ 更加 方便 快 捷 ． 合 野外 样 品 适
的迅 速 鉴定 但 也存 在 一些 缺点 ．例 如不 能 区分 Ｒ Ｖ与 Ｐ
些 去垢 剂 敏 感 ， 多数 的化 学 灭 活剂 ， 如 酚 类 、％的 大 例 ２ ＰＲ Ｐ Ｖ基 因组 为单股 负链无 节段 Ｒ Ａ Ｒ Ｎ ＮＡ链从 ３ 至 ‘
磷 南 麓 姆 毒 兽庭
２ 年 ３ ）１ ０ （ ２ 第１ １第卷 期 １
小 反 刍 兽 疫 快 速 诊 断 技 术 研 究 进 展
赵 雪丽 ， 靳 冬 ， 光辉 ， 刘 程 果， 志明。 吴 张 健
（ 南 省动 物疫 病预 防控 制 中心 ， 河 河南 郑州
４００ ） ５ ０ ８
摘 要 ： 小反 刍兽 疫是 一种 主要 感 染小反 刍动 物 的急性 、 触性 疫病 。 接 对养 殖业 危 害 巨大 该病 没 有有效 治 疗方 法 ， 能预 防 ， 只 因此诊 断监 测技 术 是控 制该 病 的重要 手段 。 统 的血 清学诊 断技 术如 病毒 中和试 验 （ 传 ｖＮＴ） ） 等存 在诸 多缺 陷 ， 以用 于大规 模 的 疫情 监控 。 目前 国际上 应 用于该 病 快速诊 断的新 技 术主要 有 Ｅ ＩＡ、． 难 ＬＳ ＰＴ—
２１１ 竞 争 Ｅ ＩＡ ．． ＬＳ
病 毒 粒子 呈 多形 性 ． 为 圆形 ． 毒囊 膜 里 面 是 核 衣 多 病
壳， 由核 衣 壳蛋 白 （ 、 蛋 白（ ） 大 蛋 白 （ ） Ｎ）磷 Ｐ、 Ｌ 组成 。直径 １０ ７ ０ｎ 平 均 为 ５ ０ｎ ５ ～ ０ ｍ． ０ ｍ。外 被 厚 ８５ １ ． ｎ 的囊膜 ， ．～ ４５ ｍ 囊 膜 上有 ８ １ ｍ 的纤 突 ． 突 上 有 血凝 素 ． 神 经 氨 酸 ～ ５ｎ 纤 无