例1，TMV和CMV在田间烟草植株上都呈花叶症， TMV和CMV在田间烟草植株上都呈花叶症 在田间烟草植株上都呈花叶症， 为了确定是否有TMV，或是将两者区分开， 为了确定是否有TMV，或是将两者区分开，便可 通过下列三种植物的接种来确定。 通过下列三种植物的接种来确定。
2.血清学检测技术 2.血清学检测技术
分子杂交
在DNA和RNA之间进行，依据是 DNA和RNA之间进行 之间进行， RNA与互补的 RNA与互补的DNA之间存在着碱基 与互补的DNA之间存在着碱基 的互补关系。 的互补关系。 在一定的条件下，RNA--DNA形成 在一定的条件下，RNA--DNA形成 异质双链的过程称为杂交。 异质双链的过程称为杂交。其中预 先分离纯化或合成的已知核酸序列 片段叫做杂交探针(probe)， 片段叫做杂交探针(probe)，由于大 多数植物病毒的核酸是RNA， 多数植物病毒的核酸是RNA，其探 针为互补cDNA也称为 也称为cDNA探针 探针。 针为互补cDNA也称为cDNA探针。
生理分化： 生理分化： 烟草株系：以烟草环斑病毒 号为代表，是典型株系。自然 以烟草环斑病毒2号为代表 以烟草环斑病毒 号为代表，是典型株系。 发生在温室的烟草幼苗，主要分布在美国东部。 发生在温室的烟草幼苗，主要分布在美国东部。 桃黄芽花叶株系：自然发生在杏、扁桃、桃上，分布在美国 自然发生在杏、 自然发生在杏 扁桃、桃上， 西部。此株系与Price 的烟草株系较难区分。因为两株系在 的烟草株系较难区分。 西部。此株系与 草本寄主上的症状相似，血清学上无区别， 草本寄主上的症状相似，血清学上无区别，而且大多数分离 物在桃树上都产生黄芽花叶症状 葡萄黄脉株系：自然发生在葡萄上，在草本寄主上引起的症 自然发生在葡萄上， 自然发生在葡萄上 状与上述两个株系类似，但可在豇豆上引起顶枯， 状与上述两个株系类似，但可在豇豆上引起顶枯，血清学上 也与上述两个株系不同， 也与上述两个株系不同，主要分布在美国西部 其他株系：李属植物上不同分离物 （李褐线分离物 Prune 李属植物上不同分离物 brown line，李茎环孔分离物Prunus stem pitting和樱桃叶斑 line，李茎环孔分离物Prunus pitting和樱桃叶斑 驳分离物Cherry mottle）存在血清学差异， 驳分离物Cherry leaf mottle）存在血清学差异，但差异不明 樱桃叶斑驳分离物不能由Xiphinema californicum传播 显。樱桃叶斑驳分离物不能由Xiphinema californicum传播
症状： 症状：
番茄症状（番茄环斑病） 枝条卷曲和坏死，嫩叶、 枝条卷曲和坏死，嫩叶、叶柄生褐色 坏死环和波纹，果实受侵染， 坏死环和波纹，果实受侵染，外表产生环 斑，灰色到褐色栓皮
葡萄上的症状（葡萄黄脉病） 叶黄脉、斑驳、环斑， 叶黄脉、斑驳、环斑，节间缩短呈莲蓙 状丛生，植株严重矮化，果实败育变小， 状丛生，植株严重矮化，果实败育变小，至 绝产，几年内植株渐渐坏死。植株剥皮后， 绝产，几年内植株渐渐坏死。植株剥皮后， 可见增厚的海绵状韧皮组织及坏死凹陷
检疫性植物病毒的检验方法 番茄环斑病毒 马铃薯帚病毒 *其他检疫性植物病毒
南方菜豆花叶病毒、可可枝肿病毒、香石竹环 斑病毒
检疫性植物病毒的检验方法
生物学检测技术 血清学检测技术 电子显微镜技术 分子生物学检测技术
1.生物学检测技术 1.生物学检测技术
原理： 原理： 植物病毒对鉴别寄主或指示植物的特异反应。 鉴别寄主谱： 鉴别寄主谱： 对一种病毒有特殊反应的一组寄主，一般包括 3～5种不同反应类型的寄主植物。一般包括： 系统侵染的寄主 局部侵染的寄主 不受侵染的寄主
3.电子显微镜技术 3.电子显微镜技术
原理： 以电磁波为光源，利用短波电子流， 以电磁波为光源，利用短波电子流，分辨率达 0.99Å，比光学镜要高1000倍以上 到0.99Å，比光学镜要高1000倍以上
主要方法： 超薄切片、负染技术、免疫电镜技术
4.分子生物学检测方法 4.分子生物学检测方法
分子杂交检测 PCR技术检测 PCR技术检测
生物学特性： 生物学特性： 稳定性差，难纯化， 稳定性差，难纯化，纯化的病毒制剂 中有两类粒体： 的蛋白外壳的T粒体 中有两类粒体：无RNA的蛋白外壳的 粒体 的蛋白外壳的 侵染性核蛋白的B粒体 粒体， 粒体具侵染性 粒体具侵染性， 和侵染性核蛋白的 粒体，B粒体具侵染性， 二者血清学性质有差异。 粒体分子量 二者血清学性质有差异。T粒体分子量 3.2×106，沉降系数 沉降系数53S，B粒体分子量 × ， 粒体分子量 5.5×106，沉降系数 沉降系数126～128S。B粒体 × ～ 。 粒体 RNA分子量 ×106 ，占粒体重量的 ％ 分子量2.3× 占粒体重量的40％ 分子量
复盆子上的症状：侵染当季不表现症状，第 侵染当季不表现症状， 侵染当季不表现症状 二年叶片表现黄色斑驳，条纹或脉褪绿， 二年叶片表现黄色斑驳，条纹或脉褪绿，叶 片生长推迟， 片生长推迟，病株表现不结果或形成易碎果
悬钩子上的症状：植株矮化，小果并减产， 植株矮化，小果并减产， 植株矮化 幼龄植株叶片出现褪绿环斑。第二年， 幼龄植株叶片出现褪绿环斑。第二年，叶片 症状不明显，但新叶出现偏上性，早落。 症状不明显，但新叶出现偏上性，早落。第 三年有10％～ ％的果枝死亡。 ％～80 三年有10％～80％的果枝死亡。
病原： 病原： 番茄环斑病毒 学名 Tomato ring sopt virus （ToRSV） 异名 烟草环斑病毒2号 Tomato ring spot virus No.2 烟病毒13号 Nicotiana virus 13 桃黄芽花叶病毒 Peach yellow bud mosaic virus 葡萄黄脉病毒 Grape yellow vein virus 分类地位 线虫传多面体病毒组 R/1:2.8/44+2.4/41:S/S:S/C,Ve/Ne Nepovirus
原理： 抗原与抗体的特异结合 方法： 免疫电泳和免疫电镜、琼脂双扩散、 ELISA等。 ELISA等。
琼脂双扩散反应沉淀线判断图
抗原1 抗原2 抗原1 抗原2 抗原1 抗原2
抗血清 抗血清
抗血清
两种抗原相同， 抗血清不专化 都与已知的抗 含有两种以上 血清反应 的抗体
两种抗原有一 定的亲缘关系 但不完全相同
苹果上的症状（ decline） 苹果上的症状（apple union necrosis and decline） 砧木和接穗接合部肿胀，裂开，剥开树皮， 砧木和接穗接合部肿胀，裂开，剥开树皮，树 皮内侧变厚，多孔，愈合斑连接处有不明显的线， 皮内侧变厚，多孔，愈合斑连接处有不明显的线， 在这条线相对方向的形成层表面也有一类似的线， 在这条线相对方向的形成层表面也有一类似的线， 沿着这条线有一小的深沟或一条光滑的细缝， 沿着这条线有一小的深沟或一条光滑的细缝，坏死 的树皮覆盖在沟或缝上。 的树皮覆盖在沟或缝上。 叶变少，变小，黄化，嫩枝呈束状丛生， 叶变少，变小，黄化，嫩枝呈束状丛生，果实 较小，果皮颜色加深。树皮颜色淡红 较小，果皮颜色加深。
检疫性植物病毒的检验方法 番茄环斑病毒 马铃薯帚顶病毒 *其他检疫性植物病毒
南方菜豆花叶病毒、可可枝肿病毒、香石竹环 斑病毒
番茄环斑病毒 Tomato ring spot virus
分布： 分布： 1936年 美国东部新泽西发生ToRSV 1936年，美国东部新泽西发生ToRSV 至今已有30多个国家和地区发现有该病毒， 至今已有30多个国家和地区发现有该病毒， 多个国家和地区发现有该病毒 主要集中在北美温带地区，即美国和加拿 主要集中在北美温带地区， 大。
病毒特性： 病毒特性： 等轴对称球形，直径28nm，在烟草汁液中， 等轴对称球形，直径28nm，在烟草汁液中， 58 ℃下10min、20 ℃下2d、4 ℃下21d、－ ℃ 、－20 、 、 、－ 下几个月以后失去侵染力。 下几个月以后失去侵染力。接种的烟叶和黄瓜子 叶汁液，稀释限点为10 叶汁液，稀释限点为 －3，而系统侵染的烟草汁 稀释限点低于10 液，稀释限点低于 －1。
寄主： 寄主： ToRSV寄主范围广， ToRSV寄主范围广，包括双子叶和单 寄主范围广 子叶植物的35个科 自然界，ToRSV主要 个科， 子叶植物的35个科，自然界，ToRSV主要 侵染木本植物，草本及观赏植物。 侵染木本植物，草本及观赏植物。
危害情况： 危害情况： 1975年 ToRSV侵染加拿大安大略的 1975年，ToRSV侵染加拿大安大略的 地区葡萄，产量损失76％～ ％， ％～95％，甚至造 地区葡萄，产量损失76％～95％，甚至造 成绝产。同年， 侵染后， 成绝产。同年，ToRSV 侵染后，纽约葡萄 严重减产，奥尔良悬钩子果实减产21％～ 严重减产，奥尔良悬钩子果实减产21％～ 50％。 50％。
桃树和李属其它树种上的症状（桃树黄芽 花叶）：沿中脉产生扁椭圆形羽缘状病斑， 沿中脉产生扁椭圆形羽缘状病斑， 沿中脉产生扁椭圆形羽缘状病斑 由灰绿色变为浅绿色， 由灰绿色变为浅绿色，芽发育成为小而变 形的丛生叶，成浅黄色而死亡。 形的丛生叶，成浅黄色而死亡。 （桃树茎痘病）：树皮变厚 发软， （桃树茎痘病）：树皮变厚，发软，海绵 树皮变厚， 剥开树皮， 状，剥开树皮，树干上出现凹陷的痘斑和 沟槽。叶片褪绿，叶芽发育推迟， 沟槽。叶片褪绿，叶芽发育推迟，落叶提 果实畸形，果味变异， 前，果实畸形，果味变异，提前成熟和脱 落。
植物病毒分子探针具专一性强、灵敏度高、 准确快速等优点 分子探针的长度一般在500～1500核苷酸 分子探针的长度一般在500～1500核苷酸 碱基对（bp） 碱基对（bp） 常用广谱分子探针，即包括多个不同专化 性基因的核苷酸片断。
PCR技术检测 PCR技术检测
PCR （Polymerase chain reaction）聚合酶联反应：
检验方法： 检验方法： 生物学检测：
黄瓜：局部褪绿斑， 黄瓜：局部褪绿斑，而后产生系统褪绿和斑驳 苋色藜和昆诺阿藜：小局部褪绿斑， 苋色藜和昆诺阿藜：小局部褪绿斑，后系统侵染顶端枯死 菜豆：局部褪绿斑或坏死斑， 菜豆：局部褪绿斑或坏死斑，系统症状为皱缩和顶叶坏死 烟草：局部坏死或环斑，幼叶系统褪绿环纹和斑纹， 烟草：局部坏死或环斑，幼叶系统褪绿环纹和斑纹，后隐症 矮天牛：局部坏死斑， 矮天牛：局部坏死斑，幼叶坏死和枯萎 番茄：局部坏死斑，幼叶产生系统斑驳和坏死 番茄：局部坏死斑， 豇豆：局部褪绿斑或坏死斑，引起系统侵染， 豇豆：局部褪绿斑或坏死斑，引起系统侵染，植株顶端坏死