（二）抑菌圈的形成
• 在平板底部四边，分别 对角注明“SH”、“SL” 和“UH”、“UL”标记 • 将不锈钢小管(俗称为牛 津杯)放置在含敏感试验 菌的琼脂培养基上。
th sl
uh
• 以无菌滴管分别在每个 牛津杯内加入相应的抗 生素溶液至满但不溢出 管外 • 且四杯内液面高度相同， 盖上平皿盖，静置30分 钟。
管碟法测定抗生素效价 原理和方法
一 原理 在一定的抗生素浓 度范围内，对数剂量 ( 浓 度) 与抑菌圈的表面积或 直径成正比，可以得出 一条曲线。 抗生素浓度换算成对 数，则抑菌圈直径与抗 生素对数成直线关系
管碟法的材料
一，仪器 菌种 培养基 培养皿 牛角杯 陶瓦圆盖 二，试剂 无菌生理盐水 ph6.0的磷酸缓冲液 青霉素标准品储备液 青霉素标准品使用液
• 双碟的制备： • • 取内径90mm、高16—17mm的平底双碟； • 注入加热融化的培养基20ml，使在碟底内均 匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层。
• 另取培养基适量加热融化后，放冷至48－ 50℃（芽孢可至60℃），加入规定的试验菌悬液 适量（能得清晰的抑菌圈为度。） • 二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径 在 18－24 mm。
管碟法测定操作
• 1. 试验用菌液 • 金黄色葡萄球菌悬液：取金黄色葡萄球菌 的营养斜面培养物，接种于营养琼脂斜面 上，在35~37℃培养20h到22h，；临用前用 水或者灭菌生理盐水溶液将菌苔洗下，备 用
2 供试品及标准品的配制
• 标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平衡。供 试品应放于干燥器内至少30min方可称取。称量 最好为一次取样称量，动作迅速，不得反复称取， 取样后立即将称量瓶瓶盖盖好，以免吸水。 • 标准品的称量最好用1/100,000克的分析天平， 样品称量不得低于1/10,000克的分析天平。天平 中的干燥加入剂应保持经常注意更换。 • 称量结束后，超声波处理后的磷酸缓冲液， 定容至刻度，过滤并稀释。
Байду номын сангаас
• 将培养基置入适宜试 验菌生长的培养箱中， 琼脂培养基中的试验 菌开始生长。
• 抑菌圈直径大小与抗生素浓度相关； • 比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小， 可计算出抗生素的效价。
计算检品的效价
• • • • • • • 求出W和V W=（SH+TH）-（SL+TL） V=（TH+TL）-（SH+SL） TH供试品高剂量的抑菌圈 TL供试品低剂量的抑菌圈 SH标准品高剂量的抑菌圈 SL标准品低剂量的抑菌圈
微生物发的分类
• 稀释法 • 浊度法 • 双碟法
• 2、浊度法系利用抗生素在液体培养基中对 试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后 细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品 对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品 效价的种方法。
3 、管碟法：是利用抗生 素在含敏 感试验菌的 琼脂培养 基中的球面 扩散渗透 作用，从而 形成一定的抑菌圈。 通 过 琼 脂培 养 基 ，可 观 察并测量 出抑菌圈的 大小。
• 求出θ=D· log（IV/W）
• θ供试品和标准品的效价比 • D标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般 为1 • I 高低剂量之比的对数，即log2或log4 • Pr = Ar×θ • Pr供试品实际单位数 • Ar供试品标示量或估计单位
抗生素效价微生物检定法
赵永成 生工1001 4104100139
1.概述
一、抗生素的概念及抗生素的生物检定
抗生素是由微生物所产生的极微量便 具有选择性地杀死或抑制其他病原微生物 生长的一类天然有机化合物。 抗生素的生物检定是以抗生素对微生 物的抗菌效力作为效价的衡量标准。
一、抗生素的效价和单位
抗生素的含量用效价和单位表示。该 词有时不加区别统称为效价单位。 效价（ｐ otency ），指检品的实际 单位数与其标示量的比值。常表示为效价 的百分数。 单位（ unit,u ）单位是衡量抗生素有 效成分的具体尺度。
• １、重量单位 以抗生素的生物活性部分重量作单 位 • １微克（ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００单 位。 ２、类似重量单位 以特定的纯粹抗生素盐类的重 量作为１单位。如纯粹金霉素盐酸盐及四环素盐 酸盐（包括无生物活性的盐酸根在内）１微克 （ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００个单位。 这是根据国际使用习惯而来的。 ３、质量折算单位 以特定的纯抗生素盐的质量为 单位而加以折算。青霉素0.6ug为1单位 ４、特定单位 以特定的抗生素标准品的某一质量 定为一单位。