生育红 （橙红色）
取本品约30mg，加无水
乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml， 摇匀，在75℃加热15分钟，溶
液应显橙红色。
（二） 三氯化铁－联吡啶反应
VitE 生 育 酚 [O] △ 对生育醌 Fe
2
KOH
Fe
3
红 色
联吡啶
CH 3 H 3C HO CH 3 O
内标物
As mr f1 ms Ar1 f2 Ar 2 ms
4. 计算含量
维生素D及前维生素D折算成维生
素D的总量（mi）
mi ( f1 Ai1 f2 Ai 2 )ms / As
单位 = 0.025 µg
第二法
适用于有维生素A醇及其它杂
质干扰时
皂化提取 分离净化
对照液 精密称取VitE对照品0.2011g 置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内 标液10ml，密塞，振摇使溶解，取 1~3ul注入GC仪，测定，计算 供试液 精密称取供试品0.1998g置棕 色具塞锥形瓶中，精密加入内标液 10ml，密塞，振摇使溶解，取1~3ul 注入GC仪，测定，计算
对照液 A对 0.373 A内 供试液 A样 296513
99m：84. 测定维生素C注射液的含量 时，在操作过程中要加入 丙酮，这是为了 A. 保持维生素C的稳定 B. 增加维生素C的溶解度 C. 使反应完全 D. 加快反应速度 E. 消除注射液中抗氧剂的干扰
98：85. 能发生硫色素特征反应的药物 是 A. 维生素A B. 维生素B1 C. 维生素C D. 维生素E E. 烟酸
正相色谱、内标法
杂质干扰时 1. 色谱条件 色谱柱
硅胶
流动相
内 标
正己烷 –正戊醇（997:3）
邻苯二甲酸二甲酯
2. 系统适应性试验
维生素D3
维生素D3 对照品
光照
△
前维生素D3
反式维生素D3
速甾醇D3
目的 获得待测成分及各种干扰成分色谱峰，
检查分离度是否符合规定
3. 计算校正因子（对照品为维生素D3）
液各5ml，置50ml棕色量瓶中，加正己烷至 刻度，摇匀，作为供试品溶液。照维生素D 测定法（附录Ⅶ K 第一法）测定，即得。
第五节 维生素E
O HO
苯并－二氢吡喃醇
CH3 R2 HO R1 O
*
*
*
名
称
R1
α-生育酚 β-生育酚 γ-生育酚 δ-生育酚
CH3 CH3 H H
R2 CH3 H
相对活性 1.0 0.5
A内 805741
0.368
. . VitE % % .% . .
本品含C31H52O3应为96.0 ~ 102.0%
BP
GC 内标 正三十二烷 R≥1.4
USP GC 内标 十六酸十六醇酯 R≥1.0
JP
4
2Ce
3
对 生育醌
（二） 试剂
硫酸铈滴定液（0.01mol/L） 二苯胺（亮黄→灰紫）
CM （M生育酚= 430.8） T n 0.01 430.8 T 2.154 （m g / m l） 2
例
取本品0.10g，加无水乙醇 5ml溶解后，加二苯胺试液1滴， 用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定， 消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不 得过 1.0ml。
பைடு நூலகம்
CH3 H
0.2 0.1
生物效价 右旋体
： 消旋体 = 1.4 ：10
（天然品） （合成品）
CH 3 H3C H 3 C CO O CH 3 O CH 3 CH 3 CH 3 CH 3 CH 3
dl－α－生育酚醋酸酯
一、结构与性质 苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链
1、易溶于有机溶剂，不溶于水
2、UV 3、酯键
（1）维生素D校正因子（f1）
内标 进样 f1 对照
As / m s f1 Ar / mr
（2）前维生素D折算成维生素D的校
正因子（f2）
N 2，排空气、密塞 对照品 2， 6 二叔丁基对甲酚 通
冷至室温 进样
90 ℃、1.5 h
99：77. 下列药物的碱性溶液，加入 铁氰化钾后，再加正丁醇， 显蓝色荧光的是 A. 维生素A B. 维生素B1 C. 维生素C D. 维生素D E. 维生素E
97：77．既具有酸性又具有还原性的 药物是 A. 维生素A B. 咖啡因 C. 苯巴比妥 D. 氯丙嗪 E. 维生素C
99m：132.维生素C的鉴别反应，常采 用的试剂有 A. 碱性酒石酸铜 B. 硝酸银 C. 碘化铋钾 D. 乙酰丙酮 E. 三氯醋酸和吡咯

易水解

△
VitE 生育酚 醌型化合物
[O]
H orOH
二、 鉴别
（一）硝酸反应
VitE 生 育 酚
75℃15′
HNO3
生 育 红
橙红色
[O ]
CH 3 H 3C O
CH 3 C 16 H 33
强氧化剂
HO CH 3
生育酚
HNO3
CH 3 H 3C O O O CH 3 C 16 H 33
（四） RP - HPLC法（外标法） 测定对象→血清中VitA和VitE 固定相→十八烷基硅烷键合硅胶 流动相→甲醇-水（96 ：4） 检测波长→ 8′前330nm 8′后292nm
W对 稀 释 度 W样 A对 稀释度 样 A样
108．在三氯醋酸或盐酸存在下，经 水解、脱羧、失水后，加入吡 咯即产生蓝色产物的药物应是 A. 氯氮卓 B. 维生素A C. 普鲁卡因 D. 盐酸吗啡 E. 维生素C
维生素EUV图
（四） TLC法
薄层板 展开剂 硅胶G 环己烷 -乙醚（4 ：1）
显色剂
VitE
硫酸（105℃ 5′）
Rf = 0.7
三、特殊杂质
1. 酸度 检查制备过程中引入的游离羧酸，
酸碱滴定法
2. 游离生育酚的检查
（一）原理
利用游离生育酚的还原性， 将硫酸铈还原成硫酸亚铈
生 育 酚 2Ce
（三） 限量 ≤2.15％
VT 限 量% 100% W
1.0 0.002154 限量% 100 % 0.1 2.15%
药典规定 消耗硫酸铈液（0.01mol/L）≤1.0ml
若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L， 应重新计算硫酸铈的消耗量
设：应消耗硫酸铈液≤ V ml 0.01×1.0 ＝实际浓度× V
灵敏度法 维生素D2 Ch.P（2005） 取本品10mg，加90% 【检查】麦角甾醇
乙醇2ml溶解后，加洋地黄皂苷溶液（取
洋地黄皂苷20mg，加90%乙醇2ml，加
热溶解制成）2ml，混合，放置18小时，
不得发生浑浊或沉淀。
四、含量测定
HPLC 药典附录 维生素D测定法 共有三法
第一法
适用于无维生素A醇及其它
迅即变为紫色，最后成绿色。
维生素D3
Ch.P（2005）
【鉴别】（1）取本品约0.5mg，加三氯
甲烷5ml溶解后，加醋酐0.3ml与硫酸
0.1ml振摇，初显黄色，渐变红色，迅
即变为紫色、蓝绿色，最后变为绿色。
2. 与三氯化锑反应 BP
维生素D + 三氯化锑 →橙红色→粉红色 3. 其他显色反应
（二）IR
反相色谱系统
按第一法
第三法
适用于按第二法处理后前维
生素D仍被干扰的样品 第二法净化后样品
对照

维生素D
外标法计算维生素D含量
维生素D2
Ch.P（2005）
【含量测定】 精密称取本品25mg，置100ml
棕色量瓶中，加三甲基戊烷80ml，避免加热
，用超声处理1分钟使溶解，加三甲基戊烷
至刻度，摇匀；精密量取上述溶液与内标溶
第十章 维生素类药物的分析 （三）
第四节 维生素D的分析
CH3 H H CH3 CH3 CH3 H CH3 CH2 HO H H
维生素D2（骨化醇、麦角骨化醇）
CH3
H H CH3
CH3 CH3
CH2 HO H
H
维生素D3（胆骨化醇）
一、结构与性质
1. 溶解性 2. 不稳定性 脂溶性 含多个双健易被氧化，
对酸不稳定
3. 旋光性 4. 显色反应 性状项下比旋度
5. 紫外吸收特征 性状项下吸收系数
二、鉴别试验
（一）显色反应
1. 与醋酐-浓硫酸反应 Ch.P（2005）
维生素D2
Ch.P（2005）
【鉴别】（1）取本品约0.5mg，加三 氯甲烷5ml溶解后，加醋酐0.3ml与硫
酸0.1ml，振摇，初显黄色，渐变红色，
校正因子：
A内 f相 对 A对 W内 W对
A内 A样
W内 W样
A样 A对
A内 A内

W样 W对
实际工作中的计算方法
A对 A内
K1
A样 A内
K2
K 2 W对 稀 释 度 VitE % 100% K 1 W样 稀 释 度
例 内标液
取正三十二烷加正己烷溶解 并稀释成1.0mg/ml溶液
0.01 1.0 V（ml） 硫酸铈实际浓度
例 Ce(SO4)2 = 0.01020mol/L
0.01 1.0 V（ml） 0.98 （ml） 0.01020
四、 含量测定
（一） GC法 1、GC特点 选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好
挥发性低、不 稳定、极性强 →衍生化易受 样品蒸气压限 制