胃癌在我国是最常见的恶性肿瘤之一，手术是其最有效的治疗方法，对于术后复发失去再次手术机会的及晚期胃癌患者，化疗仍是最有效的手段之一，但其疗效不尽人意，因为在消灭肿瘤细胞的同时，受其毒副作用影响而表现出较差的预后。
因而寻求一种新的治疗方案迫在眉睫。
肿瘤的靶向治疗基于分子水平，通过抑制相关蛋白或基因在信号转导通路、血管生成等途径发挥较强的抗肿瘤作用，且细胞毒性作莪术醇对人胃癌细胞凋亡、ＭＭＰ２、ＮＯ影响的初步探讨徐立春陈海燕文洁陶亚玲扬州大学医学院肿瘤防治研究中心，江苏扬州225001[摘要]目的初步探讨莪术醇（Curcumol）对人胃腺癌细胞（SGC-7901细胞）凋亡、基质金属蛋白酶（MMP2）、一氧化氮（NO）的影响。
方法将莪术醇溶于无水乙醇中，初始浓度为9mg/mL，设实验1、2、3、4、5组，莪术醇的浓度分别是7.5、15、30、60、120μg/mL，并以含1%无水乙醇的培养液为对照组。
采用台盼蓝（Trypan blue）、噻唑蓝（MTT）法检测SGC-7901细胞的活性及莪术醇对SGC-7901细胞抑制增殖的影响；用流式细胞仪（FACSCalibur）检测莪术醇对SGC-7901细胞的凋亡率；用蛋白质印迹法检测莪术醇作用于SGC-7901细胞后，其MMP2的表达情况；NO试剂盒检测莪术醇作用SGC-7901细胞后的细胞培养液上清的NO含量。
结果30μg/mL的莪术醇在药物浓度与抑制肿瘤生长方面效果较佳，与对照组比较，其抑制肿瘤细胞增殖差异有统计学意义（P<0.05）；莪术醇实验组能促进细胞凋亡，与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）；莪术醇实验组作用细胞后，其MMP2蛋白表达明显下降，与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）；实验研究表明，随着莪术醇实验组浓度的增加，其细胞培养液上清中的NO含量逐渐降低，与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。
结论30μg/mL的莪术醇浓度是最佳药效组，它能显著抑制SGC-7901细胞的增殖，明显促进肿瘤的细胞凋亡，显著抑制MMP2的表达，降低细胞培养液上清中的NO含量，从而发挥系列抗肿瘤作用。
本研究从细胞分子水平探讨莪术醇治疗胃癌可能存在的部分机制，为临床应用莪术醇及其衍生物或结构类似物治疗胃癌提供理论与试验依据。
[关键词]莪术醇；SGC-7901；凋亡；基质金属蛋白酶；一氧化氮[中图分类号]R000[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2012）12（a）-0018-04Preliminary discussion on effect of curcumol in apoptosis,MMP2and NO in SGC-7901cellsXU Lichun CHEN Haiyan WEN Jie TAO YalingCancer Prevention Research Center,Medical College of Yangzhou University,Jiangsu Province,Yangzhou225001,China [Abstract]Objective To discuss the effects of Curcumol on the apoptosis,MMP2and NO of human gastric cancer cells (SGC-7901cells).Methods Curcumol was dissolved in dehydrate alcohol and the initial concentration of Curcumol was9 mg/mL.Group1,group2,group3,group4and group5were set up as experimental groups.The Curcumol concentrations were set as follows:7.5,15,30,60,120μg/mL,control group contained1%dehydrate alcohol(dissolvent compare).The Trypan blueand method was used to analyze the cytoactive of SGC-7901;MTT assay was performed to study the inhibitory rate of SGC-7901cells proliferation;the metastasis of SGC-7901was described through the scratches experiment;the apoptosis rate were detected by FACSCalibur and the expression of Matrix metalloproteinase2(MMP2)were detected by Western Blot.The content of NO in cell culture medium was detected by NO kit.Results Curcumol had a good effect on drug concentration and restrain the tumor growth in30μg/mL,and compared with controls,it had significant difference in restrain the proliferation of tumor cell(P<0.05);Curcumol could promote the apoptosis,it showed significant difference when compared with controls(P<0.05);Curcumol could make the expression of MMP2protein descend to varying de-grees,it had significant difference when compared with controls(P<0.05);this research showed with the increasing of the concentration of curcumol,the content of the NO in the supernate gradually reduced,it had significant difference when compared with controls(P<0.05).Conclusion Curcumol in30μg/mL is the best efficacy group,it can significantly inhib-it the proliferation of SGC-7901cell,significantly promote the tumor cell apoptosis,significantly inhibit the expression of MMP2,reduce the content of NO in supernate,and express the series antitumor function.This study discusses the possible mechanism of curcumol cure the stomach cancer from cell and molecular level;provide the basis in theory and experiment for clinical application that Curcumol and its derivatives or structure analogues treat stomach cancer.[Key words]Curcumol;SGC-7901;Apoptosis;MMP2;NO[基金项目]江苏省医学卫生重点基金资助项目（编号：K200511）。
[作者简介]徐立春，研究员，教授，主要从事肿瘤防治基础与临床方面的研究。
用明显减少，故成为肿瘤治疗的新希望。
近年来，中药及其有效成分抗肿瘤作用的研究取得很大进展。
研究显示，天然药物及有效成分可以通过诱导细胞凋亡、细胞分化、抑制血管生成、逆转多药耐药等发挥抗肿瘤作用。
同时中药具有多靶点、多环节、多效应、毒副作用低、提高机体免疫力、不易产生耐药等优点。
莪术醇（Curcumol）又名姜黄环奥醇，为具有半缩酮的氢化奥类化合物，为莪术的提取物———莪术挥发油中抗肿瘤活性成分。
目前研究发现莪术提取物莪术醇能杀伤肿瘤细胞，诱导肿瘤细胞凋亡，有抑制血管生成的作用，且不良反应少，有学者认为抑制肿瘤生长与抑制环氧化酶2mRNA和血管内皮生长因子mRNA的表达有关[1-4]。
本研究以人胃腺癌（SGC-7901）细胞为研究对象，采用现代高新技术从细胞分子水平探讨莪术醇抑制胃癌细胞生长可能存在的部分机制，为临床应用莪术醇及其衍生物或结构类似物治疗胃癌提供理论与实验依据。
1材料与方法1.1材料①莪术醇（纯度95%）：扬州大学中西医结合研究所提供。
②RPMI-1640培养基：美国GIBCO公司；③Annexin V-FITC试剂盒：上海晶美生物工程有限公司；④Braford检测蛋白含量试剂盒、Mouse Anti-actin、山羊抗兔IgG-HRP、山羊抗鼠IgG-HRP：武汉博士德生物工程有限公司；⑤Rabbit Anti-MMP2：美国eBioscience公司；⑥NO试剂盒：南京建成生物公司；⑦MTT、DMSO：上海生工生物工程有限公司；⑧细胞株：人胃腺癌SGC-7901细胞株由上海细胞生物所提供。
1.2方法1.2.1将莪术醇溶于无水乙醇溶液，其工作浓度中乙醇的最终浓度为1%，设实验组和对照组，实验组莪术醇的浓度为7.5、15、30、60、120μg/mL。
SGC-7901细胞复苏后加入RPMI1640培养液（pH=7.2，10%小牛血清，青霉素及链霉素各100U/mL）后置于CO2培养箱中培养，2～3d传代一次。
用对数生长期的细胞进行实验。
1.2.2采用MTT法检测不同浓度组的莪术醇对人胃腺癌SGC-7901细胞细胞增殖的影响。
将对数生长期的SGC-7901细胞计数接种于96孔培养板，每孔约5000个细胞，设6个复孔，200μL/孔，置于CO2培养箱中培养，24h后，更换含莪术醇的培养液，药物浓度及分组按实验设计进行。