3000rpm×30 min离心，小 心吸取中间白 膜层，DMEM 洗涤2次，接 种于含 15%FBS的低 糖完全培养基 中
二、全骨髓培养法
• 制备细胞悬液同前，将所收集的细胞悬液用200 目滤网过滤, 制备成单细胞悬液,1000rpm×5min 洗涤2 次, 弃上清液, 取沉淀重新悬浮后, 接种于含 15% FBS 的培养液中
兔骨髓间充质干细胞的分离
密度梯度离心法 全骨髓培养法
一、密度梯度离心法
超酒精棉球、保 鲜膜、打火机、手术包、percoll分离液、 培养基、培养瓶等
• 取生后21天新西兰大白兔1只（兰州大学动 物房提供），重约0.3kg
水淹法处死后, 放入75% 的酒精内浸泡15 min。无菌条件下取出双侧股骨、胫骨、肱 骨，去除附带组织,浸入生理盐水中清洗2次
无菌间内，超净台上， 将长骨从中间剪断。 此方法优点： 1.可最大量提取出干骺 端干细胞（丁香园提 示干细胞大量存在于 干骺端） 2.操作简便，只需剪开 一次
• 以10ml 注射器吸取无血清低糖DMEM 培养 液反复冲洗, 以骨头发白为准,4号针头反复 抽吸制备成单细胞悬液,装入两离心管中以 1000rpm×5min离心，去除上清， DMEM 重悬，轻铺于等量的密度1.073g/ml Percol 分离液上（5ml:5ml）