福建分析测试Ｆｕｊｉａｎ　Ａｎａｌｙｓｉｓ＆Ｔｅｓｔｉｎｇ　

Ｒ一１一苯基乙基氨基甲酸酯一ｐ一环糊精键合手性固定相的　

制备与应用研究　

郭丽珍，余光艳，望丹妮，谢飞云，李杭燕，林杰，翁文　

（漳州师范学院化学与环境科学系，福建漳州３６３０００）　

摘要：利用Ｒ一１一苯基乙基异氰酸酯对８一环糊精键合固定相进行衍生，合成了Ｒ一１一苯基乙基氨基甲酸酯一ｐ一环糊　

精手性固定相，填充后在反相条件下考察其对氢化安息香、安息香和ｄ一苯乙醇的手性拆分，探讨了流动相中乙腈含　

量、缓冲盐类型等对手性拆分的影响。氢化安息香获得了基线分离，分离因子可达１．２１４，安息香得到了部分分离，Ｏｒ．一　

苯乙醇未能拆开。结合线性溶剂强度（ＬＳＳ）模型和计量置换理论（ＳＤＭ－．－Ｒ）对色谱保留机理进行了探讨，认为水分子　

和乙腈分子一起参与了溶质的置换。　

关键词：手性固定相ＩＢ一环糊精；Ｒ－一１一苯基乙基异氰酸酯；氢化安息香；色谱保留机理　

中图分类号：０６５６．４文献标识码：Ａ文章编号：１００９—８１４３（２０１２）０４－一０００１—０６　

Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒ－１－Ｐｈｅｎｙｌｅｔｈｙｌｃａｒｂａｍｏｙｌａｔｅｄ　

Ｂ—ＣＤ　Ｂｏｎｄｅｄ　Ｃｈｉｒａｌ　Ｓｔａｔｉｏｎａｒｙ　Ｐｈａｓｅ　

Ｇｕｏ　Ｌｉ－ｚｈｅｎ，Ｙｕ　Ｇｕａｎｇ－ｙａｎ，Ｗａｎｇ　Ｄａｎ－ｎｉ，Ｘｉｅ　Ｆｅｉ－ｙｕｎ，Ｌｉ　Ｈａｎｇ－ｙａｎ，Ｌｉｎ　Ｊｉｅ，Ｗｅｎｇ　Ｗｅｎ　

（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｚｈａｎｇｚｈｏｕ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈａｎｇｚｈｏｕ，Ｆｕｊｊａｎ　３６３０００，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｒ－１－Ｐｈｅｎｙｌｅｔｈｙｌｃａｒｂａｍｏｙｌａｔｅｄ　Ｂ－ＣＤ　ｂｏｎｄｅｄ　ｃｈｉｒａｌ　ｓｔａｔｉｏｎａｒｙ　ｐｈａｓｅ（ＣＳＰ）ｗａｓ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｒ－一１－ｐｈｅｎｙｌｅｔｈｙｌ　

ｉｓｏｃｙａｎａｔｅ　ａｎｄ　ｐ一－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ　ｂｏｎｄｅｄ　ＣＳＰ．Ｔｈｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ＣＳＰ　ｗａｓ　ｐａｃｋｅｄ　ｉｎｔｏ　ｓｔａｉｎｌｅｓｓ　ｓｔｅｅｌ　ｃｏｌｕｍｎ　ｂ：ｒ　ｓｌｕｒｒｙ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｎ　

ｅｎａｎｔｉｏｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｈｙｄｒｏｂｅｎｚｏｉｎ．ｂｅｎｚｏｉｎ　ａｎｄ　－ｐｈｅｎｅｔｈｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｗｅｒｅ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｍｏｄｅ．．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　

ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ　ａｍｏｕｎｔ　ａｎｄ　ｂｕｆｆｅｒ　ｔｙｐｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｎａｎｔｉｏｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｈｙｄｒｏｂｅｍｏｉｎ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｂａｓｅｌｉｎｅ　

ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ　ｃｏｕｌｄ　ｒｅａｃｈ　１．２１４．Ｂｅｎｚｏｉｎ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｐａｒｔｉａｌ　ｅｎａｎｔｉｏｓｅｐａｒａｔｉｏｎ，ａｎｄ　Ｏｔ－ｐｈｅｎｅｔｈｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ　

ｃｏｕｌｄ　ｎｏｔ　ｂｅ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｗｈｏｌｌｙ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｗｉｔｈ　ｌｉｎｅａｒ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｓｔｒｅｎｇｔｈ（ＬＳＳ）　

ｍｏｄｅｌ　ａｎｄ　ｓｔｏｉｃｈｉｏｍｅｔｒｉｃ　ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ（ＳＤＭ—Ｒ）．Ｗａｔｅｒ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　ａｎｄ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　ｗｅｒｅ　

ｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ　ｔｏ　ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｉｓｐｌａｃｉｎｇ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｏｌｕｔｅ．．　

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：　Ｃｈｉｒａｌ　ｓｔａｔｉｏｎａｒｙ　ｐｈａｓｅ；Ｂ－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ；Ｒ一１一ｐｈｅｎｙｌｅｔｈｙｌ　ｉｓｏｃｙａｎａｔｅ；ｈｙｄｒｏｂｅｎｚｏｉｎ；ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　

ｍｅｃｈａｎｊｓｍ　

高效液相色谱（ＨＰＬＣ）手性拆分已成为药物、农　

药、食品、生物、环境、材料等领域不可或缺的一种　

分析方法口ｔｌ。进行手性拆分时，可在流动相中添加手　

性选择剂（ｃｈｉｒａｌ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ａｄｄｉｔｉｖｅｓ，ＣＭＰＡｓ），或　

者使用手性固定相（ｃｈｉｒａｌ　ｓｔａｔｉｏｎａｒｙ　ｐｈａｓｅｓ，ＣＳＰｓ）。　各种类型的手性固定相如多糖衍生物型、蛋白质　

型、酒石酸型、印迹聚合物、刷性固定相等已被开发　

并应用于手性拆分『２一。环糊精及其衍生物由于具有　

良好的手性识别性能，也被广泛地用于制备手性固　

定相　。本文利用Ｒ一１一苯基乙基异氰酸酯对Ｂ一　

收稿１３期：２０１２一－３—２８　

基金项目：国家自然科学基金资助项目（２０７０５０３１）；福建省高校新世纪优秀人才支持计划资助项目（ＪＫ２０１　１０３０）　

作者简介：郭丽珍（１９８５～），女，硕士研究生，主要从事色谱手性拆分研究。　

通讯作者：翁文（１９７４～），男，教授，研究方向：手性拆分及手性识别。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｅｎｇ＿ｗｅｎ＠１２６．ｃｏｒｎ

　２　福建分析测试研究报告　

环糊精键合固定相上的羟基进行部分衍生，制得了　

Ｒ一１一苯基乙基氨基甲酸酯一Ｂ一环糊精手性固定　

相，匀浆法装柱后考察其对氢化安息香等的拆分性　

能，并结合色谱保留模型探讨了手性识别机理。　

１　实验部分　

１．１仪器及试剂　

Ｗａｔｅｒｓ　６００型高效液相色谱仪（美国），含Ｗａ—　

ｔｅｒｓ　６００泵系统，Ｗａｔｅｒｓ　２４８７紫外可见双波长检测　

器，Ｅｍｐｏｗｅｒ　ＩＩ色谱工作站；ＲＰＬ—ＺＤ１０装柱机，大　

连日普利科技仪器有限公司；Ｖａｒｉｏ　Ｍｉｃｒｏ元素分析　

仪（德国Ｅｌｅｍｅｎｔａｒ公司）；Ｍｉｌｌｉ—Ｑ超纯水系统（美国　Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司）。　

硅胶（粒径５　ｍ，孔径９０　Ａ，比表面积　

２２０　ｍ２／ｇ），中科院兰州化学物理研究所；Ｒ一１一苯基　

乙基异氰酸酯、３一缩水甘油基氧丙基三甲基硅烷、　

氢化钠购自Ａｌｆａ　Ａｅｓａｒ公司，分析纯；Ｂ—ＣＤ（国药　

集团化学试剂有限公司）经水重结晶两次后真空干　

燥使用；Ｒ，Ｒ一及ｓ，ｓ一氢化安息香（１）、安息香　

（２）、　一苯乙醇（３），分析纯，Ａｃｒｏｓ产品，结构如图　

１；Ｎ，Ｎ一二甲基甲酰胺（ＤＭＦ，分析纯）用前经无水　

硫酸镁干燥并减压蒸馏；吡啶（分析纯）经ＫＯＨ固　

体浸泡过夜后常压蒸馏；甲醇、乙醇、乙腈均为色谱　

纯，美国ＴＥＤＩＡ试剂公司；冰醋酸和三乙胺，汕头西　

陇化学试剂有限公司；磷酸缓冲盐，上海化学试剂　

有限公司。　

Ｈ　

图１氢化安息香及其类似物的结构　

Ｆｉｇ．１　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｈｙｄｒｏｂｅｎｚｏｉｎ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ａｎａｌｏｇｕｅｓ　

１－２　Ｒ一１一苯基乙基氨基甲酸酯一１３一环糊精键合　

手性固定相（ＰＥＣ…１３　ＣＤ　ＣＳＰ）的制备　

参考文献［８／，Ｂ—ＣＤ在氢化钠的作用下与３一缩　

水甘油基氧丙基三甲氧基硅烷反应，再键合到硅胶　

表面合成了ｐ—ＣＤ键合手性固定相（１３一ＣＤ—ＣＳＰ）。　

元素分析得ｃ和Ｈ的质量百分数分别为６．３０％和　

藿　ｓ・　。　＋　１．１２％，计算得键合量为０．５６　ｍｏｌ・ｍ　。　

将５．００４６　ｇ的Ｂ—ＣＤ—ＣＳＰ置于三颈圆底烧瓶　

中，Ｎ　保护下加入６０　ｍＬ吡啶，１　ｍＬ　Ｒ一１一苯基乙　

基异氰酸酯，４５℃反应２４　ｈ后过滤，依次用吡啶、　

甲醇和乙醇洗涤数次，６０℃真空干燥得Ｒ一１一苯基　

乙基氨基甲酸酯一Ｂ一环糊精键合手性固定相（以　

ＤＭ　Ｆ　ＣＨ￣　ＯＩ　ｓｉ　

晕　ｓｉ　

ｓ　◎　∞　

ｐｙｒｉｄｉｎｅ　

Ｏ　¨　Ｒ：◎　一　

图２　Ｒ一１一苯基乙基氨基甲酸酯一Ｂ一环糊精键合手性固定相合成路线　

Ｆｉｇ．２　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒ一１－ｐｈｅｎｙｌｅｔｈｙｌｃａｒｂａｍｏｙｌａｔｅｄ－６一ＣＤ　ｂｏｎｄｅｄ　ｃｈｉｒａｌ　ｓｔａｔｉ

ｏｎａｒｙ　ｐｈａｓｅ　郭丽珍等：Ｒ一１一苯基乙基氨基甲酸酯一Ｂ一环糊精键合手性固定相的制备与应用研究　３　

下简称ＰＥＣ—Ｂ—ＣＤ—ＣＳＰ），元素分析得ｃ、Ｈ和Ｎ　

的质量百分数分别为８．１９％、１．１２％和０．４２％。合　

成路线如图２。合成的手性固定相以甲醇一水（４０：　

６０）作为匀浆液和顶替液，在４０～４８　ＭＰａ下装柱　

（２５０　ｍｍ×４．６　ｍｍ　ｉ．ｄ．），流出液约１２０　ｍＬ。　

２结果与讨论　

实验在反相条件下进行。所有流动相在使用前　

都经过０．２２　ｍ滤膜过滤和超声波脱气，流速为　

１．０　ｍＬ　ｍｉｎ～，检测波长设为２５４　ｎｍ和２２０　ｎｍ，柱温　

为３７℃。进样体积为１０　Ｌ。保留因子ｋ由（ｔ　一ｔ。）　

／ｔ０计算而得，其中ｔ　为保留时间，ｔｏ为死时问。分离　

因子仅由ｋ　计算而得。　

２．１　流动相中乙腈含量对手性拆分的影响　

首先对比了乙腈和甲醇作为流动相中有机添加　剂对手性拆分的影响，发现当乙腈作为添加剂时，色　

谱峰形较对称，基线噪音小，柱压也较低，后续实验　

以乙腈作为有机添加剂。表１为流动相中乙腈含量　

对ＰＥＣ—Ｂ—ＣＤ—ＣＳＰ拆分氢化安息香、安息香和ｏＬ一　

苯乙醇的影响。可以看出，随着乙腈含量的降低，三　

个化合物的保留因子都逐渐升高，安息香受到的影　

响最大。　一苯乙醇先洗脱，然后是氢化安息香、安息　

香。氢化安息香获得了理想的拆分，安息香部分分　

离，而　一苯乙醇未能拆开。氢化安息香有二个手性　

中心，分子中的二个苯环和二个羟基可能都参与了　

手性识别，而安息香只有一个手性中心，仅一苯乙醇　

的结构更为简单。另外，安息香中的羰基氧原子可能　

与环糊精上的羟基有较强的非特异性作用，从而导　

致保留时间长而分离因子没有提高。对氢化安息香　

和安息香，分离因子随乙腈含量的降低而上升。图３　

为三个化合物拆分的典型色谱图。　

图３化合物１—３在ＰＥＣ一１３一ＣＤ—ＣＳＰ上拆分的典型色谱图　

Ｆｉｇ．３　Ｔｙｐｉｃａｌ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅｎａｎｔｉｏｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｌ一３　ｏｎ　ｔｈｅ　ＰＥＣ－１３－ＣＤ－ＣＳＰ　

Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ：Ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ，Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ（９５，５，ｖ／ｖ）；ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，３７　ｃｃ；ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ，１　ｍＩ．／ｍｉｎ．　

表１流动相中乙腈含量对氢化安息香及其类似物手性拆分的影响　

Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ　ａｍｏｕｎｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｎａｎｔｉｏｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｙｄｒｏｂｅｎｚｏｉｎ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ａｎａｌｏｇｕｅｓ　

Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ：Ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ：３７℃：ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ：１．０　ｍＬ　ｍｉｎ一