２０１３年第７期 现代园艺
分子标记在我国辣椒种质资源分类上的应用现状及展望
鲁绪才
（黑龙江农业经济职业学院，黑龙江省牡丹江 １５７０４１）
摘要：综述了常见分子标记在我１３ｔ辣椒种质资源分类上的应用现状，并对技术发展趋势进行评价与展望。 关冀词：辣椒；种质资源；分子标谒
辣椒是我国主要蔬菜作物之一，栽培面积仅次于 白菜。辣椒杂交优势的开发和推广，使品种遗传资源日
渐狭窄，加强对辣椒属种质资源的研究，拓宽辣椒遗传
渠道，对促进辣椒遗传改良有重要意义。在种质资源研
究领域，以分子标记为基础的研究逐渐占据主导地位。
１ 分子标记的优越性及主要方法 ＤＮＡ分子标记技术主要是基于由单碱基突变和
易位、插入、缺失、倒位或转座等导致的ＤＮＡ序列变异
来研究多态性。其优越性包括：不受环境及基因是否表
达的限制；遍及整个基因组，数量极大；对生物体无不
良影响；多数表现为共显性，可分辨所有的基因型。 自１９８０年Ｂｏｔｓｔｅｉｎ首次利用ＲＦＬＰ标记作为遗传
标记开始，迄今已开发出了一系列的分子标记方法。用
于遗传多样性研究的可分为四大类：（１）基于Ｓｏｕｒｔｈｅｍ
杂交的ＤＮＡ标记，如ＲＦＬＰ等；（２）基于ＰＣＲ的ＤＮＡ 标记，如ＳＳＲ等；（３）基于ＰＣＲ与限制性酶切技术结合
的ＤＮＡ标记，如ＡＦＬＰ等；（４）基于单核苷酸多态性的
ＤＮＡ标记，如ＳＮＰ等。 ２ 分子标记在辣椒种质资源研究上的应用
２．１ ＲＦＬＰ标记的应用及评价
ＲＦＬＰ（ｒｅｓｔｒｉｏｒｉｏｎ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）是
Ｇｒｏｄｚｉｃｋｅｒ等发明的分子标记技术，其检测和显示通过
按照当前化肥市场价格及葡萄价格，即Ｎ ４．０９元
／ｋｇ、Ｐ２０５ ８．１９元／ｋｇ、Ｋ２ｏ ７．２０元／ｌ【ｇ、葡萄２．５０元／ｋｇ，
可得出各种肥料的最大施肥量及最佳施肥量，以及相
应的产量。
表２最大及最佳施肥量与相应产量 单位：ｋｇ／６６７ｍ：
在本试验区种植葡萄，氮的最大施人量为 １０．８ｋｇ／６６７ｍ２，折合尿素２３．５ｋｇ／６６７ｍ ；磷的最大施入量
为１８．８ｋｇ／６６７ｍ ，折合三料磷肥４２．７ｋ￣６６７ｍ２；纯钾的
最大施入量为１１．６ｋｇ／６６７ｍ ，折合硫酸钾 ２３．２ｋ＃６６７ｍ２。最佳施肥量：尿素２３．０ ｋｇ／６６７ｍ２钙镁磷
肥４０．５ｋ￣６６７ｍ２，硫酸钾２２．４ｋ＃６６７ｍ２。
２．４各处理对葡萄产量性状及品质的影响
从表３中可以看出，与无肥区相比，施肥小区的小
穗总数、单穗重有明显提高；不同施肥处理对葡萄的百 粒重影响不大；处理９的糖度最高，达到２４．７％，其次
是处理１１和处理７，表明Ｎ、Ｐ、Ｋ的适当配比能提高
葡萄的含糖量。
３ 结论
试验结果表明，葡萄最大施肥量：尿素 ２３．５ｋ￣６６７ｍ２，钙镁磷肥４２．７ｋｇ／６６７ｍ２，硫酸钾 表３不同处理对葡萄产量性状及品质的影响
２３．２ｋ￣６６７ｍ ；葡萄最佳施肥量：尿素２３．０ ｋ￣６６７ｍ２，三 料磷肥４Ｏ．５ｋ￣６６７ｍ ，硫酸钾２２．４ｋｇ／６６７ｍ ；Ｎ、Ｐ２ｏ５、
Ｋ２Ｏ最佳施肥比例为１：１．６：１．１。 （收稿：２０１３－０３－２５） 参考文献： …刘权，马宝琨，曲泽洲．果树试验设计与统计【Ｍ１．北京：中国农业出 版社。１９９２ 【２】贺普超．葡萄学【Ｍ】．北京：中国农业出版社，１９９９ 【３】马育才．田间试验与统计方法【Ｍ】．北京：农业出版，１９８５ 作者简介：甘付华（１９８０一），２００６年７月毕业于新疆农业大学，农学 硕士学位，农艺师，从事设施园艺、土壤肥料方面的工作。
⑩ 现代园艺 ２０１３年第７期
不同的探针与酶组合来实现。用已克隆的ＤＮＡ片段作 探针与Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹后酶切ＤＮＡ样品分子杂交，经放
射自显影或非同位素显色来揭示供试样品间的多态
性。
Ｔａｎｋｓｌｅｙ（１９８８）、Ｐｒｉｎｃｅ（１９９３）等构建辣椒分子遗
传图谱时，ＲＦＬＰ标记技术在辣椒中得以应用。在国内， 中国农科院蔬菜花卉研究所的张玉玺等曾采用ＲＦＬＰ
技术对辣椒种质资源分类展开过研究。
ＲＦＬＰ标记具有数量大、稳定遗传、重复陛好、共显
性等优点。作为第一代分子标记深受重视并广泛应用。
但其操作过程较繁琐，需要对探针进行同位素标记，即 使应用非放射性Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术也较为耗时费力。
２．２ Ｒ．ＡＰＤ标记的应用及评价
ＲＡＰＤ（ｒａｎｄｏｍ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ）是建立
在ＰＣＲ基础上可对整个未知序列基因组进行多态性
检测的分子技术，由Ｗｅｌｓｈ等和Ｗｉｌ—ｌｉａｍｓ等发明。
雷进生从１００条随机引物中筛选出１９条用于 ＲＡＰＤ标记，通过聚类分析把６７份辣椒种质材料划分
为４类［１】。马艳青等利用ＲＡＰＤ技术，对来自不同生态
类型的辣椒种质资源亲缘关系进行研究，聚类结果表
明，ＤＮＡ分子水平上辣椒亲缘关系与传统方法研究结 论基本一致阁。陈学军用２３条ＲＡＰＤ引物共扩增出
２０９条带，证实：Ｃ．￣ｌｎｕｕｍ与Ｃ．ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ、Ｃ．ｃｈｉｎｅｎｓｅ亲
缘关系较近，而与Ｃ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ、Ｃ．ｂａｃｃａｔｕｍ亲缘关系较
远１３１，与细胞学研究结果一致。蒋向辉等运用形态标记
与ＲＡＰＤ标记对７份朝天椒种质资源进行遗传多样性
分析，两种方法聚类分析结果相似１４１。 ＲＡＰＤ标记操作简便，避免了ＲＦＬＰ技术繁琐的
Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交操作以及放射性同位素给人带来的危
害；可同时检测多个基因位点，且可检测ＲＦＬＰ标记不
能检测的重复序列区域。不足之处为：一般表现为显性 遗传，所提供的信息量不完整且重复性较差。ＲＡＰＤ标
记在早期运用较多，现已逐渐被取代。
２．３ ＳＳＲ标记的应用及评价
ＳＳＲ（Ｓｉｍｐｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｒｅｐｅａｔ）最早由Ｈｔｔ等人在 ｉ９８９年建立。罗玉娣等利用２７对ＳＳＲ引物对３３个辣
椒材料进行遗传多样性分析，聚类结果显示，辣椒果实
类型一致的种质资源基本都聚在一起，即它们之间的
亲缘关系较近Ｉｓ］，这与周晶的研究结果一致。白占兵等
人从１５０对辣椒ＳＳＲ引物中筛选出多态性较好的引
物１ １６对，初步建立了基于ＳＳＲ分子标记技术的辣椒
种子纯度鉴定体系。中国农科院蔬菜花卉研究所辣椒 育种课题组Ｈｕａｎｇ等利用生物信息学的方法新开发
出辣椒的ＳＳＲ引物４００多对［ｑ。
由于ＳＳＲ技术可揭示完整遗传信息，呈现共显性
遗传、结果稳定可靠、重复性好、简便易行，且数量极为
⑩ 丰富，分布于整个基因组；多态性高，等位位点多，因此
信息含量极为丰富；这些优点使其成为理想的分子标
记并取代ＲＦＬＰ而成为被广泛应用的第二代ＤＮＡ分
子标记。其不足在于引物开发较复杂，引物的设计需要
建立、筛选基因组文库和克隆测序等一系列实验，较费
时费力。
２．４ ＳＲＡＰ标记的应用及评价
ＳＲＡＰ（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ－ｒｅｌａｔｅｄ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ） ２００１年由加州大学蔬菜作物系Ｌｉ与Ｑｕｉｒｏｓ博士开
发。杜晓华用ＳＲＡＰ和ＳＳＲ标记技术分析１０份尖椒自
交系的遗传差异，结果显示ＳＲＡＰ技术有较高的位点
和多态性检测能力，分别是ＳＳＲ的１０倍和５倍ｌ７】。张
素勤等用表型和ＳＲＡＰ分析对贵州主栽辣椒品种进行 研究以探讨其亲缘关系和多样性分布。聚类结果表明，
地理分布相近的基本被聚在一起１８１。许先松等人采用
形态学标记与ＳＲＡＰ技术，分别对４９和７２份辣椒资
源的遗传多样性及亲缘关系进行分析。结果表明，形态 学标记与ＳＲＡＰ分子标记结果有较大的出入，证实
ＳＲＡＰ作为分子标记的结果不受环境影响，所揭示的
种质资源遗传多样性更为丰富 。
ＳＲＡＰ标记多态性高、简便、稳定，在基因组中分
布均匀、中等产率、引物通用，且其正向引物可以与反
向引物两两配对组合，它对开放阅读框进行扩增，可应
用于不同作物的遗传图谱构建、图位克隆、基因组和基 因定位等。该技术在分子标记辅助育种中是最有可能
被大规模进行实际应用的一种技术，在遗传育种有着
广泛的应用前景。
２．５ ＡＦＬＰ技术的应用及评价
ＡＦＬＰ（Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｆｒｇｍｅｎｉｌｅｎｔ ｌ￣ｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）是
一种通过对ＤＮＡ限制性片段的选择性扩增来检测多 态性的一种ＤＮＡ指纹技术。１９９３年由荷兰Ｚａｂｅａｕ等
人发展起来，并获欧洲专利局专利。
宋晓丽用ＡＦＬＰ分子标记与表型性状对辣椒１２ 个品种聚类分析结果显示，两种分析结果达到显著性
正相关Ｉ坷。刘科伟等建立了经优化的适合于辣椒的
ＡＦＬＰ分子标记技术体系。贺洁等人对２２份朝天椒材
料利用ＡＦＬＰ技术进行遗传多样性分析。结果显示，９
对ＡＦＬＰ引物扩增出９７条为多态性条带，２２份材料被 聚成三大类【“ｌ。
该技术可靠性高且灵敏，不需要Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、不
需要预知ＤＮＡ的序列信息，多态性很少、待测样品较
少时能达到理想效果。但对酶切用的ＤＮＡ模板质量要
求高，工作量大，操作难度较高，步骤复杂，费用高，加
上该技术已申请专利，使其广泛应用受到限制。
２．６ ＩＳＳＲ标记的应用评价
ＩＳＳＲ（ｉｎｔｅｒ ｓｉｍｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅｐｅ（下转第３２页）
现代园艺 ２０１３年第７期
黄桷兰及其栽培技术
杨崇蓉－
（１四川省成都市蒲江县农村发展局 杨崇莲ｚ
６１１６３０；２成都市蒲江县建设局）
摘要：黄桷兰俗称白兰花，是人民群众极其喜爱的一种观赏性植物。在城市园林建设中，黄桷兰扮演着越来越重要的角色，被广 泛地运用于庭院和行道种植。本文介绍了黄桷兰的生态特性、繁殖方法和栽培管理技术，以期为生产实践提供技术参考。 关．－【词：黄桷兰；生态特征；繁殖方法；栽培技术
１ 黄桷兰生态特征
黄桷兰喜阳光充足，暖热多湿气候，以及通风环
境，不耐低温。根肉质，＇ｌｆｌ￣Ｊｇ。疏松肥沃、排水良好的
砂壤及壤土能促进它的生长和发育。花期从６～１ １月， 长达１７０天左右，每年的６ ７月份为其盛花期。 ２ 黄桷兰繁殖方法
黄桷兰的繁殖方法有多种，最常用的嫁接法为切
接和腹接。一般以紫玉兰作砧木进行切接和腹接，易操 作并可批量生产。
２．１苗圃地的选择
（上接第１６页）ａｔ）是Ｚｉｅｔｋｅｉｗｉｔｃｚ等于１９９４年在ＳＳＲ
基础上发展起来的一种标记。 陈学军等用ＲＡＰＤ、ＩＳＳＲ分子标记及２８个表型性
状数据对辣椒属５个栽培种的１３份材料进行了分析，
结果显示，与ＲＡＰＤ相比ＩＳＳＲ标记检测到的遗传离散
度、有效等位基因数和遗传分化系数等参数都较大，说
明ＩＳＳＲ有更高的多态性检测效率，且适合亲缘关系较 近的种群间遗传多样性分析旧。
ＩＳＳＲ标记在保留ＳＳＲ检测技术优点的同时，克服
了其开发困难的不足。在亲缘关系分析、遗传多样性研
究、基因定位等方面得到较多应用。其引物种特异性不 强，可在不同的物种间通用；ＩＳＳＲ可获得几倍于ＲＡＰＤ
的信息量，精确度可与ＲＦＬＰ相媲美，检测也更方便，
是较有发展前途的分子标记。
２．６其它方法
ＳＣＡＲ标记（ｓｅｑｕｅｎｃｅ—ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｒｅｇｉｏｎ）
，ＳＣＡＲ标记由于所用引物较长及引物序列与模板 ＤＮＡ完全互补，因此，可在严谨条件下进行扩增，结果
稳定性好，可重复性强。它们在分子标记辅助育种方面
发挥重大作用
ＳＴＳ标记（ｓｅｑｕｅｎｃｅ—ｔａｇｇｅｄ ｓｉｔｅ），是指长度
２００～５００ｂｐ的序列已知的单拷贝序列，可用ＳＴＳ位点
两端的一对长约２０ｂｐ的特异引物进行专一性扩增。由 于ＳＴＳ在基因组中出现一次，在染色体上位置固定，所
以可作为界定基因组中染色体片段位置的位标。ＳＴＳ 在人类基因组计划、水稻基因组计划的遗传图绘制中
发挥较大作用。
３ 讨论
不同标记方法尤其是分子标记与表型标记间相结
合的研究方式逐渐成为研究者的共识，其研究结果相
互印证增强了说服力，并为普通辣椒育种者提供直观
便捷且科学的依据。 国 在分子标记技术的发展中，由于ＳＮＰｓ ｆ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕ—
ｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ，单核苷酸多态性）检测与分析技 术的飞速发展，特别是与ＤＮＡ微阵列和芯片技术相结
合，使其迅速成为最有前途的第三代分子标记。基于
ＳＮＰ发展起来的分子标记技术，除ＳＣＡＲ外还包括
ｃＡＰｓ标记、ｄＣＡＰＳ标记等，这些技术已在辣椒的遗传
图谱、遗传定位和辅助育种得以应用。利用该技术对辣
椒种质资源展开更科学严谨的研究是国内辣椒种质资
源的发展趋势。 （收稿：２０１３—０４—１０） 参考文蚨： …１雷进生．观赏辣椒种质资源遗传多样性研究［Ｄ】．华中农业大学， ２ｏｏ５． 【２】马艳青，刘志敏，邹学校．辣椒种质资源的ＲＡＰＤ分析Ⅱ】．湖南农业 大学学报（自然科学版），２００３，２９（２）：１２０—１２３． 【３】陈学军，陈劲枫，耿红，等．辣椒属５个栽培种部分种质亲缘关系的 ＲＡＰＤ分析Ⅱ】．园艺学报，２００６，３３（４）：７５１—７５６． 【４】蒋向辉，余朝文，谷合勇．湖南９个地方观赏辣椒品种形态标记与 ＲＡＰＤ标记的比较研究【乃．江苏农业科学，２００７（６）：１１９—１２２． 【５］５周晶，沈火林，杨文才，等．辣椒遗传多样性的ＳＳＲ分析卟华北农 学报，２００９，２４（增刊１）：６２—６７． 【６】白占兵，李雪峰，戴雄泽彳０用ＳＳＲ．分子标记建立辣椒纯度鉴定体 系 辣椒杂志，２０１０（１）：３２－３４． 【７］杜晓华，王得元，巩振辉．基于Ｒ．ＳＡＰ和ＳＳＲ．的辣椒优良自交系间 遗传距离的估计与比较［Ｉ】．西北农林科技大学学报（自然科学版）， ２００７，３５（７）：９７－１０２． ［８】张素勤，耿广东，周贤婷，等．贵州辣椒种质资源的表型和ＳＫＡＰ分 析ⅡＪ＿山地农业生物学报，２００８，２７（３）：２２８—２３２． ［９］许先松，刘志钦，林晓丹，等．基于形态及ＳＲＡＰ标记的辣椒资源遗 传多样性及亲缘关系比较Ⅱ】．福建农林大学学报（自然科学版）， ２０１１，４０（１）：４８—５３． 【１０】宋小丽．亲缘关系密切的１２个辣椒品种的ＡＦＬＰ鉴定【Ｄ】．浙江 大学，２００８． 【１１】贺洁，苏亚蕊，张大乐，等．朝天椒遗传多样性的ＡＦＬＰ标记分析 【１２】ｏ】．河南大学学报（自然科学版），２０１０，４０（３）：２７８－２８２． 【１２】陈学军，程志芳，陈劲枫，等．辣椒种质遗传多样性的１ＬＡＰＤ和Ｉｓ— ＳＲ及其表型数据分析［Ｊｌ晒北植物学报，２００７，２７（４）：６６２—６７０． 作者简介：鲁绪才（１９８３－），男，河南濮阳人，助教，硕士，从事蔬菜及 大田作物栽培方面的研究。