葛根素注射液浓度
葛根素（Puerarin）广泛应用于缺血性心脑血管疾病的治疗。

随着临
床的广泛应用，发现该药有溶血反应、过敏反应和肝、肾损害等严重
不良反应［1～10］。

在国家药品不良反应监测中心病例报告数据库中，相关葛根素注射剂的严重不良反应报告以急性血管内溶血为主。

葛根
素注射剂导致急性血管内溶血具有发病急、进展快、病情危重的特点［11，12］。

中国政府药品主管部门（药品食品监督管理局）已多次
发出增强管理的通告，注意葛根素注射给药引起溶血的风险评价，并
增强临床监控。

在我们前期研究中发现，葛根素注射液在高浓度时，
24条Beagle犬红细胞的溶血概率为70％左右。

本研究通过体外溶血
实验，探讨葛根素注射液对红细胞膜脆性的影响及葛根素注射液浓度
对红细胞溶血率的关系。

现报道如下。

1器材
1.1受试药物葛根素注射液，购自广州大日生物科技有限公司，批号01050801，规格：含50mg/mlPuerarin。

1.2动物白化豚鼠，雌雄各半，体重250～400g，由广州中医药大学
实验动物中心提供，合格证号：2003A002。

饲养环境：室温25～27℃，相对湿度60%～78%。

Beagle犬24只（体重6～8kg，雌雄各半），由
广东省医药工业研究所Beagle犬养殖场提供，合格证号：医动字0014298。

饲养环境：室温25～27℃，相对湿度70%～80%。

物药业有限公司生产；注射用水，批号：200508011，广州铁路中心医
院生产；22XLJ-II型离心沉淀机，上海医用仪器厂；SPX－150B生化
培养箱，上海康华生化仪器制造厂。

2方法［13］
2.1热诱导法考察葛根素注射液对红细胞膜稳定性的影响考察葛根素
注射液对beagle犬RBC的影响：将6种浓度葛根素注射液（氯化钠注
射液稀释）分别与0.05ml50%的beagle犬RBC悬液装于洁净试管中，
混合，摇匀，置50℃生化培养箱保温30min，同时设阴性(氯化钠注射液)及阳性(注射用水)对照管。

育毕,置冰浴冷却，2000r/min离心
10min，吸取上清液,紫外分光光度计比色，于540nm下测吸光度,计算RBC溶血率。

溶血率（%）＝（样品管的吸光度－阴性对照管的吸光度）/（阳性对照管－阴性对照管的吸光度）×100%。

计算平均溶血率，结
果见表1及图1。

2.2葛根素注射液对红细胞的溶血作用
2.2.1葛根素注射液对Beagle犬红细胞的溶血作用取狗血10ml，用
牙签持续挑去纤维蛋白原，成脱纤血，用NS稀释，摇匀，离心，弃上
清液。

沉淀的红细胞再用NS反复洗涤2～3次，至离心后上清液无色。

将所得红细胞按其体积用NS配成2％悬液（当天使用，使用时摇匀）。

取试管6支，标号。

①～④号管分别加入5％的葛根素注射液0.1，
0.2，0.4，0.8ml，加NS稀释至2.5ml，涡旋15s使其充分溶解。

各管葛根素终浓度分别为：1，2，4，8mg/ml。

5号加2.5ml的NS（做阴性
对照管）；上述5管与2％的红细胞悬液2.5ml混合，摇匀。

6号管加
入2％的红细胞悬液2.5ml，离心，除去NS，加注射用水溶解至5ml，
摇匀，作为阳性对照管。

将各管置于37℃恒温箱孵育6h。

然后观察各
管的溶血水准及血细胞的凝集；取上清液，离心，用紫外分光光度计
于波长540nm下测定吸光度（OD值）。

按公式：溶血率（％）＝（样
品管OD值－阴性对照管OD值）/（阳性对照管OD值－阴性对照管OD 值）×100%，计算各管的溶血率。

此实验用不同Beagle犬细胞重复4次，求4次结果的平均值。

结果见表2及图2。

2.2.2葛根素对豚鼠红细胞的溶血作用取健康豚鼠6只，心脏采血
3ml，用肝素抗凝。

1500r/min离心10min，除去血清，用NS稀释，摇匀，离心，弃上清液。

沉淀的红细胞再用NS反复洗涤2～3次，至离
心后上清液无色。

所得红细胞按其体积用NS配成50％悬液（当天使用，使用时摇匀）。

每例动物血样取试管8支做实验，标号。

1～6号管分
别加入5％的葛根素注射液0.025，0.05，0.1，0.15，0.20，0.25ml，加NS稀释至2.45ml，涡旋15s使其充分溶解。

各管葛根素终浓度分别
为：0.5，1，2，3，4，5mg/ml。

7，8号分别加NS、注射用水2.45ml
作阴性及阳性对照管。

上述8管均加入豚鼠50%红细胞悬液0.05ml并
混匀，置入37℃恒温箱孵育6h，然后观察各管的溶血水准及血细胞的
凝集；取上清液，离心，于540nm下测定吸光度（OD值）。

按公式：
溶血率（％）＝（样品管OD值－阴性对照管OD值）/（阳性对照管OD 值－阴性对照管OD值）×100%，计算豚鼠红细胞加入不同浓度葛根素
试液孵育后的平均溶血率。

结果见表3及图3。

3结果
3.1高温下葛根素注射液对红细胞膜稳定性的影响结果见表1及图1。

表1高温下不同浓度的葛根素注射液对Beagle犬红细胞的溶血作用（略）
图1高温不同浓度葛根素注射液对Beagle犬红细胞溶血率的影响（略）
结果显示：热诱导下，不同浓度的葛根素注射液均能加速红细胞的破损，随着浓度的增大红细胞的溶血率显著增大，相关系数r=0.9597。

提示高温条件下葛根素注射液可降低红细胞膜的稳定性，导致溶血率
增大。

3.2葛根素注射液对不同动物红细胞的溶血作用结果见表2～3及图
2～3。

表2不同浓度的葛根素注射液对Beagle犬红细胞的溶血作用（略）
图2不同浓度的葛根素注射液对Beagle犬红细胞的溶血作用（略）
表3不同浓度的葛根素注射液对豚鼠红细胞的溶血作用（略）
图3不同浓度的葛根素注射液对豚鼠红细胞的溶血作用（略）
葛根素注射液均未引起Beagle犬红细胞和豚鼠红细胞出现凝集现象，但一定浓度下可引起明显溶血。

以上结果显示：葛根素对Beagle犬红
细胞和豚鼠红细胞的溶血作用结果相同，溶血水准与葛根素浓度呈一
定的剂量相关性（相关系数r分别为0.9614和0.9227）。

当体外葛根素浓度>2mg/ml时，豚鼠红细胞的溶血率>5%，而Beagle犬红细胞溶血率达到24.5%，这可能与不同种属动物的红细胞对葛根素的敏感性不一相关。

随着浓度的增大，Beagle犬、豚鼠红细胞溶血率均可达到50%
以上，高浓度的葛根素试液对红细胞的溶血作用较为明显。

实验结果
提示，葛根素的溶血作用与药物的浓度密切相关，高浓度时易引起溶血；临床用药应注意葛根素注射液使用剂量及监测血药浓度不宜过高。

4讨论
葛根素注射液系按照化学药物标准生产、管理的中药注射液，物质基
础明确，可控成分在99%以上，生产工艺成熟，产品质量稳定，是中药西制的成功范例。

但近来发现，葛根素注射液可引起急性血管内溶血，大大限制了它的临床应用。

针对葛根素注射液的不良反应，展开了大
量研究工作。

文献报道可能由辅料、免疫或制剂等原因引发溶血，但
未有确切的实验数据和理论能够阐明不良反应的机理，更谈不上行之
有效的预防和治疗葛根素不良反应的方法。

临床医生只好慎用或不应用。

所以，阐明葛根素注射液不良反应产生的机理，才有可能解决葛
根素注。

葛根素注射液浓度。