培养基及其制备方法1、营养肉汤培养基胨10g肉浸液1000ml氯化钠5g取胨与氯化钠,加入肉浸液内,微温溶解后,调节pH为弱碱性,煮沸,滤清,调节pH 值使灭菌后为7.2±0.2,分装,115℃灭菌30分钟。
2、营养琼脂培养基照上述营养肉汤培养基的处方及制法,加入15~20g琼脂,调节pH值使灭菌后为7.2±0.2,分装,115℃灭菌30分钟。
3、虎红琼脂培养基胨5g虎红(四氯四碘荧光素)0.0133g葡萄糖10g (或0.133%虎红溶液10ml)磷酸二氢钾(KH2PO4) 1g琼脂15~20g硫酸镁(MgSO4.7H2O) 0.5g水1000ml除葡萄糖、虎红外,取上述成分,混合,加热溶化后,滤过,加入葡萄糖、虎红,分装,115℃灭菌30分钟。
4 、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)胨10g琼脂15~20g酵母浸出粉5g水1000ml葡萄糖20g除葡萄糖外,取上述成分,混合,加热融化后,滤过,加入葡萄糖,分装,115℃灭菌15分钟。
5 、胆盐乳糖培养基(BL)胨20g牛胆盐 1.3g乳糖5g (或去氧胆酸钠0.25g)氯化钠5g水100ml磷酸氢二钾(K2HPO4) 4.0g磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.3g除乳糖、牛胆盐外,取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.4±0.2,煮沸,滤清,加入乳糖、牛胆盐,分装,115℃灭菌30分钟。
6 、曙红美亚甲蓝琼脂培养基(EMB)营养琼脂培养基100ml2%曙红溶液2ml20%乳糖溶液5ml0.5%亚甲蓝溶液 1.3~1.6ml取营养琼脂培养基,加热融化后,冷至60℃,按无菌操作加入灭菌的其它三种溶液,摇匀,倾注平皿。
7 、麦康凯琼脂培养基(MaCC)胨20g1%中性红溶液 2.5ml乳糖10g琼脂15~20g牛胆盐5g水1000ml氯化钠5g除乳糖、1%中性红溶液、牛胆盐及琼脂外、取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH 值使灭菌后为7.2±0.2,加入琼脂,加热融化后,再加入其余各成分,摇匀,分装,115℃灭菌30分钟,冷至约60℃,倾注平皿。
8 、三糖铁琼脂培养基(TSI)胨20g 硫酸亚铁0.2g牛肉浸出粉5g 硫代硫酸钠0.2g乳糖10g 0.2%酚红溶液12.5ml蔗糖10g 琼脂12~15g葡萄糖1g 水1000ml氯化钠5g除三糖、0.2%酚红溶液、琼脂外,取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,加入琼脂,加热融化后,滤过,再加入其余成分,摇匀,分装,115℃灭菌30分钟,制成高底层(2~3cm)短斜面。
9 、四硫磺酸钠亮绿增菌液(TTB)胨5g 硫代硫酸钠30g牛胆盐1g 水1000ml碳酸钙10g取上述成分,混合,微温使溶解,121℃灭菌20分钟。
临用前,取上述培养基,每10ml 中加入碘溶液(取碘6g与碘化钾5g,溶于20ml水中)0.2ml和0.1%亮绿溶液0.1ml ,混匀。
10 、沙门氏、志贺氏菌属琼脂培养基(SS)胨5g 硫代硫酸钠8.5g牛肉浸出粉5g1%中性红溶液 2.5ml乳糖10g0.1%亮绿溶液0.33ml牛胆盐8.5g琼脂20g枸橼酚钠8.5g 水1000ml枸橼酸铁铵1g除糖、指示剂、琼脂外,取上述成分混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.2 ±0.1,滤过,加入琼脂,加热融化后,121℃灭菌20分钟,再加入其余成分,摇匀,冷至约60℃,倾注平皿。
11、十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基胨10g 牛肉浸出粉3g氯化钠5g 琼脂15~20g十六烷三甲基溴化铵0.3g 水1000ml除琼脂外,取上述成分混合,微温使溶解,调节pH值使灭菌后为7.5±0.1,加入琼脂,加热熔化后,分装,121℃灭菌20分钟,冷至约60℃,倾注平皿。
12、亚碲酸盐肉汤培养基临用前,取灭菌的营养肉汤培养基,每100ml中加入新配制的1%亚碲酸钠(钾)溶液0.2ml,混匀,即得。
13、卵黄高盐琼脂培养基胨6g 10%氯化钠卵黄液100ml牛肉浸出粉1.8g 琼脂23g氯化钠30g 水650ml除10%氯化钠卵黄液外,取上述成分混合,微温使溶解,调节pH值使灭菌后为7.6±0.1。
121℃灭菌20分钟,待冷至约60℃,以无菌操作加入10%氯化钠卵黄液,充分摇匀,倾注平皿。
10%氯化钠卵黄液的制备取新鲜鸡蛋一个,以无菌操作取出卵黄,放入10%灭菌氯化钠溶液100ml中,充分振摇,即得。
14、甘露醇高盐琼脂培养基胨10g 1%酚红溶液 2.5ml牛肉浸出粉1g 琼脂15~20g甘露醇10g 水1000ml氯化钠75g除甘露醇、1%酚红溶液及琼脂外,取上述成分混合,微温使溶解,调节pH值使灭菌后为7.4±0.2,加入琼脂,加热融化后,滤过,分装,115℃灭菌30分钟,冷至约60℃,倾注平皿。
15、蛋白胨水培养基胰蛋白胨10g 水1000ml氯化钠5g取上述成分混合,加热融化,调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,分装于小试管中,121℃灭菌20分钟。
16、磷酸盐葡萄糖胨水培养基胨7g 葡萄糖5g磷酸氢二钾(K2HPO4) 3.8g 水1000ml取上述成分混合,微温使溶解,调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,分装于小试管中,121℃灭菌15分钟。
17、枸橼酸盐培养基氯化钠5g 枸橼酸钠(无水)2g硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g 溴麝香草酚蓝指示液20ml磷酸氢二钾(K2HPO4) 0.8g 琼脂15~20g磷酸二氢铵(NH4H2PO4) 1g 水1000ml除溴麝香草酚蓝和琼脂外,取上述成分,混微温使溶解,调节pH值使灭菌后为6.9±0.1,加入琼脂,加热融化,加入指示剂混匀。
分装于小试管中,121℃灭菌15分钟,置成斜面。
注:所用琼脂应不含游离糖,用前用水浸泡冲洗。
18、糖、醇发酵培养基基础液胨10g 0.5%酸性复红指示剂10ml糖、醇0.5%(或溴麝香草酚蓝指示液6ml )氯化钠5g 水1000ml取胨和氯化钠加入水中,微温使溶解,调节pH值使灭菌后为7.4,加入指示剂混匀,分装每瓶100ml,121℃灭菌15分钟。
配制葡萄糖发酵管时,于100ml基础液中加入0.5g葡萄糖,分装于含杜氏管(Durham)的小试管中。
121℃灭菌15分钟,配制其它糖醇发酵管时,将各种糖醇分别配成10%溶液,与基础液同时于121℃灭菌15分钟。
以无菌操作将5ml糖醇溶液加入100ml基础液内,分装于灭菌小试管中。
注:糖醇溶液亦可采用薄膜过滤法除菌。
19、5%乳糖发酵管胨0.2g 乳糖5g氯化钠0.3g 溴麝香草酚蓝指示液0.6ml磷酸氢二钠0.2g 水1000ml除乳糖和指示剂外,取上述成分,混合,微温使溶解,调节pH值使灭菌后为7.4,加入乳糖及指示剂,混匀,分装于含杜氏管的灭菌小试管中,115℃灭菌15分钟。
20、尿素琼脂培养基胨1g 葡萄糖1g氯化钠5g 20%尿素溶液1000ml磷酸二氢钾(KH2PO4) 2g 琼脂20g0.2%酚红溶液6ml 水1000ml除尿素和琼脂外,取上述成分,混合,调节pH值使灭菌后为7.2±0.1,加入琼脂,加热溶化并分装于锥形瓶,121℃灭菌20分钟。
冷至50~55℃,加入经薄膜过滤除菌的尿素溶液,混匀。
尿素的最终浓度为2%,分装于灭菌试管中,置成斜面。
21、氰化钾培养基胨3g 磷酸氢二钠(Na2HPO4) 5.64g氯化钠5g 氰化钾试液磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.225g 水1000ml除氰化钾试液外,取上述成分,混合,调节pH值使灭菌后为7.5±0.1,121℃灭菌20分钟,冷却后,每100ml培养基中加入氰化钾试液1.5ml,分装于12×100mm灭菌试管内,每管4ml,立即用灭菌橡皮塞塞紧,置4℃保存。
同时,以不加氰化钾试液的培养基作为对照培养基,分装于灭菌试管中。
22、赖氨酸脱羧酶试验培养基胨5g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1ml酵母浸出粉3g L-赖氨酸(DL-赖氨酸) 0.5(1g)/100ml葡萄糖1g 水1000ml除赖氨酸外,取上述成分,混合,加热溶解后分装,每瓶100ml。
加入L-赖氨酸0.5g(DL-赖氨酸1g)调节pH值使灭菌后为6.8,同时以不加赖氨酸培养基作为对照。
分装于灭菌的小试管内,每管1ml并滴加一层液体石蜡,121℃灭菌10分钟。
23、绿脓菌素(pyocyanin)测定用培养基(PDP琼脂)胨20g 甘油10ml氯化镁(无水)1.4g 琼脂18~20g硫酸钾(无水)10g 水1000ml取胨、氯化镁和硫酸钾加入水中,微温使深解。
调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,加入甘油及琼脂,加热溶解,121℃灭菌20分钟,置成斜面。
24、明胶培养基胨5g 明胶120g牛肉浸出粉3g 水1000ml取上述成分加入水中,浸泡约20分钟,随时搅拌,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,分装于小试管中,115℃灭菌20分钟。
25、硝酸盐胨水培养基胨10g 亚硝酸钠0.5g酵母浸出粉3g 水1000ml硝酸钾2g取胨及酵母浸出粉加入水中,微温使溶解,调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,加入硝酸钾和亚硝酸钠溶解,混匀。
分装于含杜氏管的小试管中,115℃灭菌20分钟。
26、胆盐硫乳琼脂培养基(DHL)胨20g 枸橼酸钠1g牛肉浸出粉3g 枸橼酸铁铵1g乳糖10g 1%中性红溶液3ml蔗糖10g 琼脂18~20g去氧胆酸钠1g 水1000ml硫代硫酸钠 2.3g除糖、1%中性红溶液及琼脂外,取上述成分混合,微温使溶解,调节pH值使灭菌后为7.2±0.1,加入琼脂,加热融化后,再加入其余成分,摇匀,冷至约60℃,倾注平皿。