・１４・ 中国民族民间医药 Ｃｈｉｎｅｓｅ ｊｏｕｍａｌ ｏｆ ｅｔｈｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｙ 药物研究
Ｔｈｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｓｔｕｄｙ
番石榴叶调节小鼠血糖血脂作用的研究 张玉英 陈艳芬 杨超燕 李书渊 唐春萍 陶曙红 曾昭智 １．广东药学院基础学院，２．广东药学院中药学院，３．广东药学院实验动物中心，广东广州５１０００６
【摘要】 目的：研究番石榴叶对实验性糖尿病小鼠和高脂血症小鼠的影响。方法：采用链脲佐菌素复制糖尿病小鼠模型，观察 番石榴叶对小鼠空腹血糖和糖耐量的影响；采用脂肪乳剂灌胃建立高血脂小鼠模型，观察番石榴叶对小鼠血脂水平及肝脏指数的影响。 结果：番石榴叶高、低剂量（１０ｓ／ｋｇ、５ｓ／ｋｓ）均能明显降低糖尿病小鼠空腹血糖，改善其糖耐量，也能明显调节高脂血症小鼠的血脂 水平，高剂量还能降低高脂血症小鼠的肝脏指数。结论：番石榴叶有明显的降糖和调脂作用，为其临床应用和研究开发提供实验依据。 【关键词】 番石榴叶；血糖；血脂；小鼠 【中图分类号】Ｒ２８５．５ 【文献标志码】Ａ 【文章编号】１００７—８５１７（２０１４）叭一００１４—０３
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕａｊａｖａ ｌｅａｖｅｓ ｏｎ ｂｌｏｏｄ ｓｕｇａｒ ａｎｄ ｂｌｏｏｄ ｌｉｐｉｄ ｉｎ ｍｉｃｅ ＺＨＡＮＧ Ｙｕ—ｙｉｎｇ ，ＣＨＥＮ Ｙａｎ—ｆｅｎ ，ＹＡＮＧ Ｃｈａｏ—ｙａｎ ，ＬＩ Ｓｈｕ—ｙｕａｎ ，ＴＡＮＧ Ｃｈｕｎ—ｐｉｎｇ ， ＪＩＡＮＧ Ｔａｏ ，ＴＡＯ Ｓｈｕ—ｈｏｎｇ ，ＺＥＮＧ ｚｈａｏ－ｚｈｉ １．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ ｂａｓｉｃ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， ２．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， ３．Ａｎｉｍａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｃｅｎｔｅｒ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０００６，Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ｔ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕａｊａｖａ ｌｅａｖｅｓ ｏｎ ｂｌｏｏｄ ｓｕｇａｒ ａｎｄ ｂｌｏｏｄ ｌｉｐｉｄ ｉｎ ｍｉｃｅ．ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ｄｉａ－ ｂｅｔｅｓ ｍｉｃｅ ｍｏｄｅｌ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕａｊａｖａ ｌｅａｖｅｓ Ｏｉｌ ｆａｓｔ— ｉｎｇ ｂｌｏｏｄ ｇｌｕｃｏｓｅ，ｓｕｇａｒ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ａｎｄ ＡＵＣ；Ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉｃ ｍｉｃｅ ｍｏｄｅｌ ｂｙ ｇａｖａｇｅ ｗｉｔｈ ｆａｔ ｅｍｕｌｓｉｏｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕａｊａｖａ ｌｅａｖｅｓ ｏｎ ｂｌｏｏｄ ｌｉｐｉｄ ａｎｄ ｌｉｖｅｒ ｉｎｄｅｘ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｂｏｔｈ ｈｉｇｈ ｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ（１０ｇ／ｋｇ）ａｎｄ ｌｏｗ ｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ（５ｇ／ ｋｇ）ｏｆ ｇａｖａｇｅ ｃａｎ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｆａｓｔｉｎｇ ｂｌｏｏｄ ｇｌｕｃｏｓｅ，ｓｕｇａｒ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｉｃｅ ａｎｄ ｂｌｏｏｄ ｌｉｐｉｄ ｏｆ ｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉｃ ｍｉｃｅ；ｈｉｇｈ ｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ ｃａｎ ｒｅｄｕｃｅ ｌｉｖｅｒ ｉｎｄｅｘ ｏｆ ｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉｃ ｍｉｃｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕ￣ａｖａ ｌｅａｖｅｓ ｈａｖｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｔｏ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｂｌｏｏｄ ｓｕｇａｒ ａｎｄ ｂｌｏｏｄ ｌｉｐｉｄ ｏｆ ｍｉｃｅ Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕａｊａｖａ ｌｅａｖｅｓ，ｂｌｏｏｄ ｇｌｕｃｏｓｅ，ｂｌｏｏｄ ｌｉｐｉｄ，ｍｉｃｅ
番石榴（Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕａｊａｖａ Ｌ）是桃金娘科（Ｍｙ￣ａｃｅａｅ） 番石榴属植物，又叫芭乐、鸡屎果、喇叭果等，是我国南 方地区的常见水果，在广东、广西、海南、台湾等地都有 野生和人工栽培。《全国中草药汇编》记载：番石榴药用价 值高，可防治高血压、糖尿病。番石榴叶为番石榴的干燥 叶及带叶嫩枝。中医学认为：番石榴叶性平，味甘涩，入 脾、胃、大肠、肝经等，且具有生津止渴、除烦、止痒、 收敛止泻，消炎止血等功效…。现代研究表明，番石榴叶 的主要化学成分有黄酮类、鞣质类、三萜类等 ｊ，具有降 血糖 、抗氧化 、抗病毒 抗菌 等药理作用。本实验 通过建立小鼠糖尿病模型和高脂血症模型，分别观察番石 榴叶对血糖和血脂的影响，为本品的临床应用和中药防治 代谢综合征新药研究开发提供科学依据。 １材料与仪器 １．１实验动物雄性ＳＰＦ级昆明种小鼠，体重１８—２２ｇ／ 只，广东省医学实验动物中心提供，许可证号：ＳＣＸＫ （粤）２００８—０００２，适应性喂养３天后供试。 １．２药物与试剂 番石榴叶流浸膏（１ｇ生药／ｍ１），由广 东药学院中药鉴定教研室李书渊教授提供；格列齐特片， 深圳海王药业有限公司，批号：２０１０１２０１；血脂康胶囊： 北京大维信生物科技有限公司，批号：２０１１０５１０。 基金项目：广东省中医药局课题（２０１３２１９５）。 通信作者：陈艳芬，Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｗｎａｉ＠１６３．ＣＯＢ 高血脂模型脂肪乳剂的制备：１０％胆固醇、２０％猪油、 ２％脱氧胆酸钠、１％丙硫氧嘧啶、５％吐温一８０、蒸馏水按 一定比例配制，用前３７℃水浴融化。葡萄糖检测试剂盒， 上海科欣生物技术研究所，批号：２０１１０７０１。血脂各指标 检测试剂盒为中生北控生物科技股份有限公司产品，总胆 固醇（ＴＣ）、甘油三酯（ＴＧ）、高密度脂蛋白（ＨＤＬ—Ｃ）、 低密度脂蛋白（ＬＤＬ—Ｃ）测定试剂盒批号分别为： １２１３２１，１１４９６１，１１０４３１，１１０４４１。 １．３实验仪器ｕＶ一１８００型紫外可见分光光度计，北京 瑞利分析仪器公司。 ２实验方法 ２．１对链脲佐菌素糖尿病小鼠血糖及糖耐量的影响 随机 选择１２只小鼠注射生理盐水作为正常对照组，其余小鼠按 １５０ｍｇ／ｋｇ腹腔注射０．１ｍｏＶＬ的链脲佐菌素（ＳＴＺ）溶液， ７２ｈ后（空腹１２ｈ），乙醚麻醉小鼠，经眼底静脉丛取血， 离心取上清，检测血糖值。选择空腹血糖≥１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ的 小鼠４８只为糖尿病模型小鼠，随机分成４组：模型组，格 列齐特片阳性对照组（３２ｍｇ／ｋｇ），番石榴叶高剂量组 （１０ｇ／ｋｇ）、番石榴叶低剂量组（５ｇ／ｋｇ），每组１２只。正常 对照组及模型组予以等体积的蒸馏水（２０ｍｌ／ｋｇ），其余各 组分别灌胃给药，每天１次，持续１４天。末次给药后禁食 药物研究 Ｔｈｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｓｔｕｄｙ 中国民族民间医药
Ｃｈｉｎｅｓｅ ｊｏｕｍａｌ ｏｆ ｅｔｈｎｏｍｅｄｉｅｉｎｅ ａｎｄ ｅｔｈｎｏｐｈａｒｒｎａｅｙ ・１５・
１２ｈ，每只小鼠取少量血后，灌胃５％葡萄糖溶液（２０ｍｌ／ ｋｇ），然后分别于灌胃后的３０ｍｉｎ，６０ｍｉｎ，１２０ｍｉｎ四个时 间点眼底静脉丛取血，测血糖值，并计算血糖曲线下面积 （ＡＵＣ）。 ＡＵＣ计算方法：ｍｍｏ［．ｈ／Ｌ＝（Ａ＋Ｂ）×１５／６０＋（Ｂ ＋ｃ）×１５／６０＋（Ｃ＋Ｄ）×３０／６０（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ分另Ｕ为 ０、３０、６０、１２０ｒａｉｎ血糖值）。 ２．２对高脂血症小鼠血脂水平的影响取小鼠６０只，随 机分成５组：正常对照组、高脂血症模型组、血脂康胶囊 阳性对照组（０．４ｇ／ｋｇ）、番石榴叶高剂量组（１０ｇ／ｋｇ）、番 石榴叶低剂量组（５ ｋｇ）。除正常对照组外，其余各组每 天上午用脂肪乳剂灌胃（２０ｍｌ／ｋｇ），下午再分别以不同药 物灌胃，连续进行１４ｄ。末次灌胃后，禁食１２ｈ后眼底静脉 丛取血，离心分离血清，采用试剂盒分别检测ＴＣ、ＴＧ、 ＨＤＬ—Ｃ、ＬＤＬ—Ｃ水平。解剖取肝脏称重，计算小鼠肝脏 指数（肝脏指数＝肝重量／体重×１００）。 ２．３统计学处理所有数据以均数±标准差（ ±ｓ）表 示，采用ＳＰＳＳ １３．０统计软件分析处理，组间比较采用单 因素方差分析，以Ｐ＜０．０５表示差异有统计学意义。 ３结果 ３。１对糖尿病小鼠血糖和糖耐量的影响结果见表１。模 型组小鼠的空腹血糖与正常组比较显著升高（Ｐ＜０．０１）， 灌胃葡萄糖后，小鼠血糖先升高后逐步下降，但各时问点 血糖值与正常组比较差异仍具有统计学意义，提示糖尿病 模型造模成功。格列齐特组、番石榴叶高剂量组与模型组 相比空腹血糖显著降低（Ｐ＜０．０１），番石榴叶低剂量组也 明显降低（Ｐ＜０．０５）。给糖负荷后３０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ、９０ｍｉｎ， 番石榴叶高剂量组与模型组比较，均可显著降低小鼠血糖 （Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）；番石榴叶低剂量组只在３０ｍｉｎ时差 异具有统计学意义。通过计算各组ＡＵＣ发现，格列齐特 组、番石榴叶高剂量、低剂量组的ＡＵＣ均明显低于模型组 （Ｐ＜０．０１）。
表１ 番石榴叶对糖尿病小鼠空腹血糖和糖耐量的影响（ ±ｓ。ｎ＝１２）
与正常组比较，▲▲Ｐ＜Ｏ．Ｏ１；与模型组比较， Ｐ＜Ｏ．０５，一Ｐ＜Ｏ．Ｏ１ 表２番石榴叶对高脂血症小鼠ＴＣ、ＴＧ、ＨＤＬ—Ｃ和ＬＤＬ—Ｃ的影响（ ±ｓ，ｎ＝１２）
与正常组比较， Ｐ＜Ｏ．０５，一Ｐ＜Ｏ．Ｏ１；与模型组比较， Ｐ＜．０５， Ｐ＜０．０ｌ ３．２对高脂血症小鼠血脂水平和肝脏指数的影响从表２ 看出，模型组与正常对照组比较，ＴＣ、ＴＧ与ＬＤＬ—Ｃ明显 升高（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），ＨＤＬ—Ｃ明显降低（Ｐ＜ ０．０１），提示通过灌胃脂肪乳剂高血脂小鼠模型造模成功。 与模型对照组相比，番石榴叶高剂量组和血脂康组ＴＧ、ＴＣ 和ＬＤＣ—Ｃ水平明显下降，ＨＤＬ—Ｃ水平显著升高（Ｐ＜ ０．０５或Ｐ＜０．０１）。番石榴叶低剂量组ＴＧ和ＴＣ水平显著 降低（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．Ｏ１）。临床上高血脂是导致脂肪肝 的重要原因，表３结果显示，与正常对照组比较，模型组 的肝指数明显增高（Ｐ＜０．０５），提示该模型可导致肝脏重 量增加，而番石榴叶高剂量组、血脂康组与模型组比较， 肝指数明显下降（Ｐ＜０．０５），提示它们可能具有通过降低 血脂而发挥防治脂肪肝的作用。
表３番石榴叶对高脂血症小鼠肝指数一的影响（ ±ｓ。ｎ＝１２ Ｊ 与正常组比较，’Ｐ＜０．０５，一Ｐ＜０．０１与模型组比较， Ｐ ＜０．０５．△△Ｐ＜０．０ｌ