一、P AEs（邻苯二酸甲酯）降解菌的筛选
1.样品来源
南极样品，连云港海域水样泥样，最好为工业废水排污口附近海域水样。

2.特殊药品
PAEs是邻苯二甲酸与一些醇类形成的酯的统称。

其中DMP、DMI、DMT、MMI等较为常见[1]。

根据情况选择底物。

至少包含3种
同的底物[1, 2]。

3.培养基
基础无机盐（MSM）培养基（g/L）: K2PHO4 5.8, KH2PO4 4.5, (NH4)2SO4 2.0,MgCl2
0.16,CaCl2 0.02, Na2MoO4 0.0024, FeCl3 0.0018, MnCl2 0.0015 pH=7按照200mg/L加
入PAEs（邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲
酸二正辛酯各50mg/L。

如果药品种类有变化则按总量200mg/L平均加入。

）
4.降解菌株的驯化与分离纯化方法
4.1从4个样品中分别取0.5g于PAEs-MSM液体培养基中。

4.225℃下振荡培养7d。

4.3将有浑浊样品逐步转接至PAEs浓度分别240mg/L、280mg/L、320mg/的培养基
中培养，每次转接在25℃下培养7天。

4.4纯化时，用接种针蘸取少量菌液，在PAEs平板上分离纯化。

5.降解菌降解能力的测定
根据文献，一般使用HPLC法对PAEs的降解菌降解产物进行分析[3]。

但是如果菌株可以在PAEs为唯一碳氮源的PAEs-MSM培养基中生长，则可以认为
菌株具有降解PAEs的能力。

二、聚乙烯降解菌的筛选
1.样品来源
南极土样，连云港海域泥样、水样，最好为近海潮间带塑料堆积处泥样。

2.特殊药品
分子量为2000和5000的无任何添加物的纯聚乙烯粉末
3.材料预处理
将聚乙烯粉末放在无菌操作台紫外灯下紫外杀菌3h。

并用接种环挑取少量灭菌的粉
末分别接入牛肉膏蛋白胨培养基、马丁氏培养基和高氏一号培养基。

在37℃和28℃
下培养72h。

如粉末周围均没有发现菌落生长，则粉末已彻底灭菌。

4.培养基（g/L）
高氏一号培养基：可溶性淀粉20，KNO3 1，NaCl 0.5，K2HPO4 0.5，FeSO4
0.01，琼脂粉20，pH 7.2
马丁氏培养基：葡萄糖10，蛋白胨5，KH2PO41, MgSO40.5 1/3000孟加拉红
100mL，琼脂18 自然pH
牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3，蛋白胨10，NaCl 5，琼脂18，pH 7.2
无碳氮源琼脂固体培养基：K2HPO4 0.7，KH2PO4 0.7, MgSO4 0.7g, NH4NO3 1, NaCl
0.005, FeSO4 0.002, ZnSO4 0.002 MnSO4 0.001 琼脂18，自然pH
培养基A：3cm*3cm膜片一张，蛋白胨10，石蜡油0.1mL，K2HPO40.7，KH2PO4
0.7, MgSO4 0.7g, NH4NO3 1, NaCl 0.005, FeSO4 0.002, ZnSO4 0.002 MnSO4 0.001，
培养基B牛肉膏3，3cm*3cm膜片一张，石蜡油0.1mL蛋白胨10，琼脂18，
K2HPO4 0.7，KH2PO4 0.7, MgSO4 0.7g, NH4NO3 1, NaCl 0.005, FeSO4 0.002, ZnSO4
0.002 MnSO4 0.001
5.菌种筛选
5.1富集培养
取0.5g样品分别加入到50mL培养基A和培养基B中，每个培养基作3个重复，在30℃，180r/min培养70d。

在培养期间，每隔10d想原培养基加入新鲜的培
养液，保证每瓶培养基50mL。

70d后挑出生长较好的菌株。

5.2选择培养
用接种环挑取富集培养混合液在基础无碳源固体培养基上划线，每份培养基含有
0.1g聚乙烯粉末。

将平板置于37℃培养14d。

参考文献：
[1] J. Wang, in: Fujian Agriculture and Forestry University, 2015.
[2] D. Jin, in, Zhongnan University 2009.
[3] Z.H. Luo, Y.R. Wu, K.L. Pang, J.D. Gu, L.L. Vrijmoed, Environmental science and pollution research international, 18 (2011) 1653-1660.。