收稿日期:2000-08-07文章编号:1006-2858(2001)02-0091-045-单硝酸异山梨酯缓释胶囊的人体生物等效性代宗顺,刘奕明,侯淑贤(同济医科大学临床药理室,湖北武汉 430030)

摘要:采用GC法测定5-单硝酸异山梨酯血浆药物浓度,研究5-单硝酸异山梨酯缓释胶囊相对生物利用度和生物等效性。18名健康志愿者随机交叉单剂量口服试验药(T)与对照药(R)40mg,测得Cmax分别为(34813?14618)ng/mL和(34719?20214)ng/mL;Tmax分别为(417?118)h和(416?117)h;AUC(0-n)分别为(393312?142510)ng1h/mL和(369310?123915)ng1h/mL;相对生物利用度为(10616?1619)%。18名志愿者随机交叉多剂量口服T与R,测得达稳态的Cmax分别为(23019?7214)ng/mL和(19019?6619)ng/mL;Cmin分别为(4216?2315)ng/mL和(4714?2211)ng/mL;AUCSS分别为(293914?92211)ng1h/mL和(266714?83219)ng#h/mL;DF分别为116?014和113?013;相对生物利用度为(111102?21105)%。经生物等效性分析,两制剂在单剂量与多剂量条件下生物等效。关键词:5-单硝酸异山梨酯;缓释胶囊;生物利用度;气相色谱法中图分类号:R969.1 文献标识码:A

5-单硝酸异山梨酯(isosorbide-5-mononitrate,5-ISMN))是一种较新型硝酸酯类抗心绞痛药物,临床主要用于预防心绞痛,同时在对充血性心力衰竭和血管痉挛性心绞痛的治疗上日益广泛使用[1]。该试验旨在测定单剂量及多剂量口服武汉制药厂试制的5-ISMN缓释胶囊和德国麦克乐制药公司生产的5-ISMN缓释胶囊在人体内的相对生物利用度,观察两种制剂的生物等效性,以期为5-ISMN缓释胶囊药动学质量评价和临床用药提供依据。1 材料与方法111 药品与试剂5-单硝酸异山梨酯缓释胶囊(受试药)由武汉制药厂试制,每粒40mg,批号:990902;5-单硝酸异山梨酯缓释胶囊(对照药)由德国麦克乐制药公司生产,每粒40mg,批号:1924A7;内标物为硝酸异山梨酯(ISDN),由武汉制药厂提供。乙酸乙酯为分析纯,上海试剂一厂产品,用前重蒸,批号:99-07-02。112 受试者选择根据药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则[2],选取18名男性健康志愿者,经临床体检和实验室检查均无心、肝、肾、代谢异常等病史,身体状况良好。受试者在实验前两周至实验期间禁烟、酒和禁服其他任何药物,均签署知情同意书。113 给药方法与样品采集受试者按随机原则分成两组,采用两制剂双周期交叉试验设计,两周期交叉的间隔时间为1周。单剂量试验:18名受试者(年龄(2217?119)岁,体重(6016?417)kg)分别于清晨空腹口服试验药或对照药40mg,150mL温开水送服,4h后进统一标准餐,于服药前及后1、2、3、4、5、6、8、10、12、16、24、36h自肘静脉取血310mL,离心(3000r/min),取血浆置-29e保存待测。1周后交叉服药。多剂量试验:18名受试者(年龄(2114?110)岁,体重(6115?610)kg)于每日清晨分别空腹口服试验药或对照药40mg,150mL温开水送服,连续服药5d,于服药前及后第3、4d清晨服药前(血浓波谷)采血310mL,第5d清晨服药前及服药后1、2、4、6、8、12、24、36h采血310mL,离心,取血浆置-29e保存待测。1周后交叉服药,按相同程序进行试验。114 血浓测定方法测试条件:HP)1701毛细管色谱柱(0132mm1id@25m,膜厚0125m),柱温170e(或160e),进样室温度220e,检测器温度

第18卷 第2期2001年3月沈 阳 药 科 大 学 学 报JournalofShenyangPharmaceuticalUniversityVol118 No12Mar12001 p191250e,载气为高纯氮(991999%),脉冲不分流进样,反吹20mL/min,反吹时间015min,柱N2流速510mL/min,运行时间815min,5-ISMN保留时间615min,ISDN保留时间719min。血浆样品处理:取血浆样品015mL,加10ng/LISDN10LL,旋涡混匀,加乙酸乙酯315mL,振摇10min,离心(3500r/min@10min),取上层有机层3mL,40e水浴氮气吹干,残渣用100LL乙酸乙酯溶解,取1LL进样。方法学研究:配制终浓度为25、50、100、300、500ng/mL的含药血浆样品各3份,于每个样品中均加入10ng/LLISDN10LL,混匀,按前述方法处理并记录峰面积,以ISMN与ISDN峰面积比值的平均值(n=3)R对浓度C作直线回归,得方程为:R=816217@10-3C+010278,r=019971。结果表明,在25~500ng/mL浓度范围内,5-ISMN线性关系良好。该法最低检测浓度为25ng/mL。回收率与精密度试验结果见表1。Tab.1 Precisionandrecoveriesof5-ISMNinplasma(n=5)Concentrationadded(ng/mL)Recovery(%)Within-dayRSD(%)Between-dayRSD(%)259012101241810086123147195008215313211

色谱行为:空白血浆、含药血浆(加ISDN)、药后血浆(加ISDN)色谱图见图1,5-ISMN与ISDN分离良好,血浆中无干扰性成分存在,易准确定量。Fig.1 GCchromatogramsof5-ISMNA)Blankplasmasample;B)Plasmasamplemixedwith5-ISMNandinternalstandard;C)Volunteerplasmasample115 数据处理采用北京计算中心编制的3P97药代动力学计算程序处理血浓数据并进行参数计算。曲线下面积(AUC)按梯形法计算,峰浓度(Cmax)和峰时间(Tmax)均为实测值,t1/2用药时曲线末端相计算(t1/2=01693/ke)。多剂量试验的谷浓度(Cmin)从末次给药后连续测得的血浓数据直接得到(Cmin采用给药后24h数值),平均稳态血浓Cav=AUCSS/S(S为给药间隔),血浓波动度DF=(Cmax-Cmin)/Cav@100%。相对生物利用度(F)按公式:F=AUCT/AUCR@100%计算。116 生物等效性评价药代动力学参数AUC和Cmax,经对数转换后进行交叉试验的方差分析和双单侧t检验处理,Tmax采用非参数法检验,对两制剂作出生物等效性评价。

2 结果单剂量试验:18名健康志愿者单剂量口服5-ISMN缓释胶囊试验药与对照药后,平均血药浓度-时间曲线见图2,药代动力学参数见表2,以试验药和对照药的AUC(0-t)计算相对生物利用度(F)为(10616?1619)%。

Fig.2 Themeanplasmaconcentration-timecurveof5-ISMNafterasingleoraldoseoftwoformulations(n=18)o)Tested;p)Reference

92 沈 阳 药 科 大 学 学 报第18卷 多剂量试验:18名健康志愿者连续5d口服5-ISMN缓释胶囊试验药与对照药,第3d后其血药谷浓度值已基本持平,表明药物浓度已达稳态。达稳态后(末次给药后)的平均血药浓度-时间曲线见图3,药代动力学参数见表3。 生物等效性:单剂量与多剂量试验的药代动

力学参数AUC和Cmax,经对数转换后进行交叉试验的方差分析和双单侧t检验处理,AUC90%可信限分别为9912%~11211%和9815%~11417%,落在对照药80%~125%范围内,Cmax

90%可信限分别为9319%~11711%和11213%

~13211%,落在对照药70%~143%范围内,Tmax经非参数法检验(秩和检验)无显著性差异

Fig.3 Themeanplasmaconcentration-timecurveof5-ISMNafteramultipleoraldoseoftwoformulations(n=18)o)Tested;p)Reference(P>0105)。结果表明:试验药与对照药于单次和多次给药条件下生物等效。Tab.2 Pharmacokineticparametersof5-ISMNafterasingledose

ParametersTestformulationReferenceformulationT1/2Ke(h)1314?10191112?712

Cmax(ng/mL)34813?1461834719?20214

Tmax(h)417?118416?117MRT(h)1111?2151116?214AUC(0-t)(ng#h/mL)393312?142510369310?123915

AUC(0-])(ng#h/mL)511017?305417446013?202410

Tab.3 Pharmacokineticparametersof5-ISMNafteramultipledoseParametersTestformulationReferenceformulationCmax(ng/mL)23019?721419019?6619

Cmin(ng/mL)4216?23154714?2211

Tmax(h)514?217617?212

Cav(ng/mL)12215?381411111?3417DF116?014113?013AUCSS(ng#h/mL)293914?92211266714?83219

3 结论作者实验建立了GC测定5-ISMN血药浓度的方法,经方法学考察,25、100、500ng/mL的回收率均>80%,日内、日间RSD值均<15%,符合有关规范[2]的要求,且该法灵敏、可靠、重现性好,可用于5-ISMN相对生物利用度的研究。实验中,作者曾试用外标法定量,发现结果重现性差,故改用内标法,以减少进样量(1LL)小等客观因素带来的实验误差。血样处理时仅采用乙酸乙酯提取,比文献报道的采用正己烷B乙醚为1B4[1]、乙醚B乙酸乙酯为4B1[3]等方法较为简单。血浓数据经处理后,结果表明:单次与多次给药的

相对生物利用度分别为(10616?1619)%和(111102?21105)%,其生物利用度符合要求;各