化学发光免疫技术与时间分辨技术的异同点
概念
化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA),是将具有高灵敏度的化学发
光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪
酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨
荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。
时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）是以镧系元素标记抗原或抗体，并与时间分辨测定技术结
合而建立起来的一种新型非放射性微量免疫分析技术，它根据镧系元素螯合物的发光特点，
用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特
异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。
原理

化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分
析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体,
当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测量仪器测
量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记
在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。鲁米诺
(1umino1)、异鲁米诺(isolumino1)及其衍生物、吖啶酯(acIidinim ester)衍生物、辣根过氧
化物酶(horseradishperoxidase，HRP)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)是目前
CLIA中使用最多的四类标记物。
时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）基本原理
用三价稀土离子及其鳌合剂作为示踪物，代替荧光物质、同位素或酶，标
记蛋白质、激素、抗原、抗体、核酸探针等物质，当免疫反应体系发生后，根据稀土
离子螯合物的荧光光谱的特点，用时间分辨荧光分析仪测定免疫反应最后产物中荧光强度。
根据荧光强度或相对荧光强度比值，来判断反应体系中分析物的浓度，达到定量分析之目的。
应用

化学发光免疫分析技术
（CLIA）
各种激素、病毒抗原抗体、肿瘤标志物、感染性疾病、心脏标志物、治疗药物检测
等各种抗原、抗体和半抗原
时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）应用广泛
1. 多肽类：蛋白质、激素（甲状腺激素、甾体类激素）。
2.病原体抗原/抗体
3.病毒性肝炎标志物
4.肿瘤相关抗原
5.药物
6.核酸
优缺点
优点
化学发光免疫分析法
（CLIA）
➢ 单个样本检测速度快，适合做急诊；
➢ 灵敏度较高；
➢ 自动化程度高；

时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）
➢ 发射光和激发光有较大的STOKES位移——高特异性
➢ 长寿命荧光，降低其他物质的荧光干扰——高灵敏度
➢ 半衰期长达几十万年，试剂受干扰小——高稳定性
➢ 荧光寿命长，易于自动化
➢ 重复性好
➢ 标准曲线范围宽
➢ 结果可靠
与其它技术的相对优势：
（1）、是现有的免疫检测方法中灵敏度最高的
（2）、是现有的免疫检测方法中稳定性最好的
（3）、多标记检测是目前所有免疫检测技术中独一无二的

缺点

化学发光免疫分析法
（CLIA）
➢ 发光过程短
➢ 本底较高
➢ 仪器故障率较高
➢ 试剂稳定性差
➢ 检测精度不高
试剂价格高
时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）
➢ 测量方式复杂
➢ 仪器成本及维护费用高
➢ 环境及样品中同元素可导致本底干扰等

类型 原理及试剂 发光类型
化学发光免疫分析（CLIA） 用化学发光物质直接标记抗原或抗体组成 吖啶酯
（acrydinum esters）
时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）* 是用三价稀土离子及其螯合剂作为示踪物 铕（ Eu3+ ）、 铽（ Te3+ ）
及钐（ Sm3+ ）、 镝
（ De3+ ）

化学发光与时间分辨荧光方法学比较
化学发光 时间分辨荧光
发光效率
1% 95%
重复检测 不可重复 可无数次重复
本底噪声 干扰大 零本底
灵敏级数
10 -15 10
-18

标记物 大分子化合物 原子
标记位点 1个/抗体 可达20个/抗体
标准曲线 稳定2~4周 稳定达一年以上
多标记 无 有，最多可达四个标记
科研开发 无 有

化学发光免疫技术原理图
时间分辨免疫技术原理图
镧系元素的荧光光谱stokes位移示意图