临床肿瘤学杂志２００９年５月第ｌ４卷第５期Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｏｎｃｏｌｏｇｖ，Ｍａｙ．２００９，Ｖｏ１．１４，Ｎｏ．５　·４３９·　Ａｎｇ一１、Ａｎｇ一２和Ｔｉｅ一２表达与肝癌血管生成的关系　２００２４０上海　复旦大学附属肿瘤医院闵行分院肿瘤内科　何胜利，高　勇，刘道永　，沈婕　【摘要】　目的：检测血管生成素１（Ａｎｇ一１）、血管生成素２（Ａｎｇ－２）及其共同受体Ｔｉｅ－２在肝癌中的表达及与肝癌血管　生成的关系。方法：采用免疫组化（ｓＰ法）对５３例肝癌标本、３０例癌旁组织及１０例正常肝组织中Ａｎｇ一１、Ａｎｇ．２、Ｔｉｅ－２及ＣＤ３１　标记的微血管密度（ＭＶＤ）进行检测，分析它们与肝癌血管生成的关系。结果：Ａｎｇ－２及Ｔｉｅ一２在肝癌组织中的阳性表达率分别　为６７．９％、７５．５％，明显高于癌旁组织４３．３％、４２．３％和正常肝组织２０．０％、２０．０％（Ｐ＜０．０５）；Ａｎｇ－１在肝癌组织、癌旁组织　及正常肝组织中的阳性表达率无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；ＣＤ３１标记的ＭＶＤ与Ａｎｇ一２、Ｔｉｅ一２表达密切相关。ＣＤ３１标记的ＭＶＤ　与Ａｎｇ一２、Ｔｉｅ一２在肝癌组织中表达呈正相关（Ｐ＜０．０５）。结论：Ａｎｇ一１、Ａｎｇ－２和Ｔｉｅ－２的表达在调节肝癌的血管生成中可能起　重要作用。　【关键词】血管生成素；Ｔｉｅ一２；肝癌；　中图分类号：Ｒ７３５．７　文献标识码：Ａ　血管生成　文章编号：１００９—０４６０（２００９）０５～０４３９—０４　Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｏｆ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ａｎｇ·１．Ａｎｇ－２　ａｎｄ　Ｔｉｅ－２　ａｎｄ　ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｉｎ　ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ＨＥ　Ｓｈｅｎｇ—ｌｉ，ＧＡＯ　Ｙｏｎｇ，ＬＩＵ　Ｄａｏ－ｙｏｎｇ，ＳＨＥＮ　Ｊｉｅ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　Ｍｉｎｈａｎｇ　Ｂｒａｎｃｈ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２００２４０，Ｃｈｉｎａ　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｇｉｏｐｏｉｎｔｉｎ　１（Ａｎｇ一１）ａｎｄ　ｉｔｓ　ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ，ａｎｇｉｏｐｏｉｎｔｉｎ　２（Ａｎｇ－２）ａｎｄ　Ｔｉｅ一２　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｉｎ　ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＨＣＣ）ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｔｕｍｏｒ　ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｎｇ一１／２　ａｎｄ　Ｔｉｅ－２　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｉｎ　ｔｅｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｌｉｖｅｒ　ｔｉｓｓｕｅｓ，３０　ｐｅｒｉ—ｃａｎｃｅｒ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ａｎｄ　５３　ＨＣＣ　ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ．Ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏ·　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｗａｓ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ａｎｇ一１／２　ａｎｄ　Ｔｉｅ一２　ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　Ａｎｇ－２　ａｎｄ　Ｔｉｅ一２　ｉｎ　ＨＣＣＳ　ｗｅｒｅ　６７．９％ａｎｄ　７５．５％，ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ａｎｄ　ｐｅｒｉ—ｃａｎｃｅｒ　ｔｉｓｓｕｅｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ　ｗａｓ　ａ　ｐｏｓｉ—　ｔｉｖｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｍｉｃｒｏ—ｖｅｓｓｅｌ　ｄｅｎｓｉｔｙ（ＭＶＤ）ａｎｄ　Ｔｈｅ　ｓｔｒｏｎｇ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｉｅ－２　ａｎｄ　Ａｎｇ一２（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｓｅ　ｄａ—　ｔａｓ　ｓｈｏｗ　ｔｈａｔ　Ａｎｇ一１／２　ａｎｄ　Ｔｉｅ一２　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｐｌａｙ　ａｎ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｉｎ　ＨＣＣ．　【Ｋｅｙ　Ｗｏｒｄｓ】　Ａｎｇｉｏｐｏｉｎｔｉｎ；Ｔｉｅ－２；Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＨＣＣ）；　Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　血管生成素（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ，Ａｎｇ）在机体和肿瘤　血管生成中发挥着重要的作用。其中Ａｎｇ－１、Ａｎｇ－２　两个配体与它们共同的受体Ｔｉｅ－２与血管生成密切　有关。肝癌是典型的富血管性的肿瘤，其生长和转　移都依赖血管生成调节因子的调控。血管生成不仅　为肿瘤细胞的生长提供了营养，并为肿瘤的浸润和　转移提供了通路。本研究旨在探讨Ａｎｇ－１、Ａｎｇ－２及　Ｔｉｅ．２表达和肝癌组织中血管生成关系。　１资料与方法　１．１一般资料选取我院２００４～２００７年及外院外　科手术切除标本共５３例，男性４０例，女性１３例；３０　１　２３３０００安徽蚌埠医学院附属医院肿瘤外科　例癌旁组织均为肿瘤周围未见肿瘤细胞浸润的组　织，男性１７例，女性１３例；正常肝组织１０例，男性８　例，女性２例。每例标本均经常规病理确诊为肝细　胞肝癌。　１．２方法所有的标本均经４％的中性甲醛固定，　常规脱水、透明、浸蜡和石蜡包埋，４　ｍ厚连续切　片，分别做ＨＥ和免疫组化染色。采用链酶亲和素．　生物素过氧化物酶（ＳＰ）进行免疫组织化学染色。　试剂Ａｎｇ．１、Ａｎｇ－２、Ｔｉｅ一２和ＣＤ３１抗体及免疫组化　试剂盒均购于ＳＡＮＴＡ　ＣＲＵＺ公司，免疫组化采用ｓＰ　法，兔抗人ＣＤ３１抗体（Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ公司产品）。Ａｎｇ一　１、Ａｎｇ－２、Ｔｉｅ－２及ＣＤ３１的工作浓度均为１：１００。

　440临床肿瘤学杂志2009年5月第14卷第5期ChineseClinicalOncologyMay2009V0114No5Ang1Ang2和Tie2表达阳性者在细胞膜和(或)胞质见棕黄色颗粒沉积为准染色强度根据显色细胞百分比：显色肿瘤细胞占计数细胞<25％为()；>25％为(+)微血管密度(microvesseldensityMVD)计数方法采用Sonja等介绍的方法¨J先在低倍(×100)镜下全面观察整个视野选择CD31染色阳性内皮细胞最多微血管形成最丰富的区域然后转至高倍镜下(X400)计数3个视野的微血管数标准为：任何染色为棕黄色的内皮细胞或内皮细胞簇都记为独立的血管厚壁血管及直径较大者(>8个红细胞直径)不计数每张切片上都随机选择10个不同高倍视野计数MVD取其平均值13统计学分析用SPSS110统计软件处理应用X。检验两样本间相关性分析用Spearman秩相关检验P<005为有统计学意义2结果21Ang1表达53例肝癌组织中Ang1呈阳性表达17例阳性表达率321％；30例癌旁组织中Ang1呈强阳性表达9例阳性表达率300％；10例正常肝组织中Ang1呈阳性表达4例阳性表达率40O％Ang1表达与肝癌组织癌旁组织及正常肝组织之间无显著性差异(∥37P>005)见图122Ang2表达53例肝癌组织中Ang2呈阳性表达36例阳性表达率679％；30例癌旁组织中Ang2呈阳性表达13例阳性表达率433％；10例正常肝组织中Ang2呈阳性表达2例阳性表达率20O％Ang2表达与肝癌组织癌旁组织及正常肝组织之间的差异有统计学意义(X。917P<005)见图223Tie2和CD31表达Tie2在肝癌组织中阳性率为755％(40／53)明显高于癌旁组织423％(13／30)和正常肝组织200％(2／10)其差异均有统计学意义(P<005)；所有肝癌组织中微血管计数根据CD31阳性表达血管进行计数CD31在癌组织表达明显尤其在肝癌组织的边缘部分呈高表达在癌旁组织和正常肝组织呈弱阳性表达见图3图424Ang2Tie2与MVD的关系CD31标记的MVD在36例Ang2阳性表达肝癌组织中表达为28例MVD计数为126±019CD31标记的MVD在图1Ang1在肝癌组织中的阳性表达(SP×200)

图2Ang2在肝癌组织中的阳性表达(SP×200)

图3Tie2在肝癌组织中的阳性表达(SP×200)

图4CD31单抗标记的肝癌MVD(SPX400)｝缶床肿瘤学杂志２００９年５月第１４卷第５期Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ。Ｍａｙ．２００９，Ｖｏ１．１４，Ｎｏ．５　·４４１·　１７例Ａｎｇ－２阴性表达肝癌组织中表达为８例，ＭＶＤ　计数为０．５２±０．０７，Ｓｐｅａｒｍａｎ秩相关分析结果，　Ａｎｇ－２表达与ＭＶＤ呈正相关（ｒ：０．７３８，Ｐ＜　０．０５）；ＣＤ３１标记的ＭＶＤ在４Ｏ例Ｔｉｅ－２阳性表达　肝癌组织中表达为３１例，ＭＶＤ计数为１．３７±　０．２４，ＣＤ３１标记的ＭＶＤ在１３例Ｔｉｅ．２阴性表达肝　癌组织中阳性表达仅为５例，ＭＶＤ计数为０．６４±　０．１３，Ｓｐｅａｒｍａｎ秩相关分析结果，Ｔｉｅ一２表达与ＭＶＤ　呈正相关（，＝０．４９７，Ｐ＜０．０５）。　３讨论　肿瘤组织是由肿瘤细胞和血管两部分有机构　成，肿瘤细胞可促进血管生成，而血管生成又促进肿　瘤发展，并为肿瘤转移提供必须的路径。Ａｎｇ在机　体和肿瘤血管生成中发挥着重要的作用，目前已发　现Ａｎｇ一１、Ａｎｇ－２、Ａｎｇ一３及Ａｎｇ－４四种配体　。生理　条件下，Ａｎｇ／Ｔｉｅ．２系统这一不同于ＶＥＧＦ的血管　调节途径，Ａｎｇ主要在胚胎发育期表达，对于胚胎　的塑型和稳定胚胎的血管生长起到关键的作用。　Ａｎｇ－１、Ａｎｇ－２及其共同受体Ｔｉｅ－２在女性怀孕期的　胎盘组织中呈高表达，对促进血管生成具有重要作　用Ｅ　３　Ｊ。Ａｎｇ在肿瘤的血管新生中作用明显，尤其是　Ａｎｇ一２的特异表达于肿瘤组织的血管重建区参与肿　瘤血管的新生，并影响肿瘤的生长和转移　Ｊ。在肺　癌组织中，Ａｎｇ－２及Ｔｉｅ－２基因也存在过度表达，表　明二者对肺癌肿瘤血管新生也可能起着调节　作用　。　在本研究中，肝癌组织Ａｎｇ－２表达明显增强，尤　其在进展期富血管的肝癌组织中。同时发现，Ａｎｇ一２　表达在癌组织的边缘部分尤为明显，这可能与Ａｎｇ一　２在诱导肿瘤血管形成中起着重要的作用。而Ａｎｇ一　１在正常肝组织中呈高表达，其与Ｔｉｅ一２受体维持正　常的血管稳定性。Ｅｔｏｓｈ等　研究表明ＶＥＧＦ存在　时，Ａｎｇ－２可拮抗Ａｎｇ．１促血管结构稳定，消除血管　基底膜和管周细胞对血管形成限制，并增加内皮细　胞对ＶＥＧＦ的敏感性，有利于血管的出芽、生长。　在ＶＥＧＦ缺乏时，Ａｎｇ．２抑制Ａｎｇ．１则有利于肿瘤　的生长和新生血管形成　Ｊ。此外，缺氧诱导因子一１ａ　（ＨＩＦ一１仪）可促进肿瘤细胞的ＶＥＧＦ、Ａｎｇ一２以内皮　细胞Ｔｉｅ－２等基因表达　。因此，Ａｎｇ一２信号传导通　路被认为与ＨＩＦ一１、ＶＥＧＦ一起参与调节肿瘤血管　新生。　Ｔｉｅ．２表达分布与Ａｎｇ．２一致，在肿瘤的边缘部　分表达尤为明显。同样，在正常肝组织和癌旁组织　血管内皮细胞上也见Ｔｉｅ．２表达，这可能是作为　Ａｎｇ－２的受体并与Ａｎｇ－２一起对血管的塑型起着重　要的作用　Ｊ。正常的肝组织中，Ｔｉｅ－２作为Ａｎｇ．１、　Ａｎｇ－２一起调节内皮细胞与周围间质细胞的相互作　用而发挥维持血管稳定、促进新生血管成熟化的作　用。Ｔｉｅ－２受体在激酶磷酸化情况下，促进血管长度　的增加和毛细血管前端散在的移动性内皮细胞的增　加，促进血管的生成及增生。Ａｈｍａｄ等¨。。研究发　现，Ａｎｇ一１促进血管成熟并维持血管的结构的机制　可能是通过提高血管内皮细胞的存活力，抑制凋亡，　减少血管的通透性和退化的发生。而Ａｎｇ－２与Ｔｉｅ一　２受体结合后并不引起受体磷酸化，从而竞争性阻　断Ｔｉｅ．２的效应¨　。本研究表明，Ｔｉｅ．２不仅表达血　管内皮细胞上，而且在肝癌组织中的血管平滑肌细　胞上，提示肝癌组织中，通过Ａｎｇ－２和Ｔｉｅ一２信号传　导通路，促进血管内皮细胞及平滑肌细胞增生、塑型　及毛细血管出芽，形成新的血管。　Ａｎｇ系统在肝癌的血管新生过程中起作重要作　用，Ａｎｇ－２和Ｔｉｅ一２信号通路可能作为肝癌血管新生　的启动和加强的重要靶位，并在肝癌的侵袭转移机　制有着重要的作用。因此，以后在针对肝癌的治疗　中，是否需要针对Ａｎｇ－２和Ｔｉｅ－２信号通路靶点有待　今后进一步研究。　参考文献　［１］Ｓｏｎｊａ　Ｌ，Ｈｅｎｕｉｎｇ　Ｃ，Ｕｔａ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌ　ｄｅｎｓｉｔｙ　ｂｙ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　ｉｎ　ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ　ｃａｎｃｅｒ：Ｃｏｔ－　ｒｅｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｈｉｓｔｎｌｏｇｉｃ　ｍｅｔｈｏｄｓ，ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｅｘｐｒｅｓ—　ｓｉｏｎ，ａｎｄ　ｌｙｍｐｈ　ｎｏｄｅ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，　２００７．１３：７６—８Ｏ．　［２］Ｓａｎｔｏｓ　ＲＡ，Ｓｉｍｏｅｓ　Ｅ，Ｓｉｌｖａ　ＡＣ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ一（１－７）ｉｓ　ａｎ　ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ　ｌｉｇａｎｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ—ｃｏｕｐｌｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｍａｓ［Ｊ］．　Ｐｒｏｃ　Ｎａｉｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，２００３，１００（１４）：８２５８—８２６３．　［３］Ｓｅｖａｌ　Ｙ，Ｓａｔｉ　Ｌ，Ｃｅｌｉｋ—Ｏｚｅｎｃｉ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎ—　ｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ一１，ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－２　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　Ｔｉｅ一１　ａｎｄ　Ｔｉｅ－２　ｉｎ　ｔｈｅ　ｖｅｒｙ　ｅａｒｌｙ　ｈｕｍａｎ　ｐｌａｃｅｎｔａ［Ｊ］．Ｐｌａｃｅｎｔａ，２００８，２９（９）：　８０９—８１５．　［４］Ｔｓｕｔｓｕｉ　Ｓ，Ｉｎａｎｅ　Ｈ，Ｙａｓｕｄａ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－２　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｉｎｖａｓｉｖｅ　ｄｕｃｔａｌ　ｃ￣ｅｉｎｏｍａ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｒｅａｓｔ：ｉｔｓ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｔｏ　ｔｈｅ　ＶＥＧＦ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌ　ｄｅｎｓｉｔｙ［Ｊ］．Ｂｒｅａｓｔ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ　Ｔｒｅａｔ，２００６，９８（３）：２６１—２６６．　［５］何胜利，董竞成，王中吉，等．促血管生成素ｌ、２及Ｔｉｅ－２受体　ｍＲＮＡ在肺腺癌中的表达［Ｊ］．中华结核和呼吸杂志，２００３，　２６：３１７—３１８．　［６］　Ｅｔｏｈ　Ｔ，Ｉｎｏｕｅ　Ｈ，Ｔａｎａｋ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－２　ｉｓ　ｒｅｌ

ａｔｅｄ　ｔｏ