长寿花组织培养研究进展　河南农业职业学院　贺爱利　黄海帆　摘要：综述了近年来我国长寿花的组织培养研究情况，对长寿花外植体的选择、外植体取材时间、外植体的处理、基本培养基、培养　基生长调节物质、培养条件与长寿花组培的关系等进行了综述分析，提出了长寿花组培苗玻璃化的问题。　关键词：长寿花；组织培养；研究现状　长寿花（Ｋａｌａｎｃｈｏｅ　ｂｌｏｓ　／ｄ／ａｒｉａ　ｃ　ｔｏｍ　Ｔｈｕｍｂ）为景天科伽蓝菜属多年生　肉质草本植物。花色丰富，圆锥状聚　伞花序，每年Ｉ临近圣诞节开出鲜艳夺　目的花朵，花期长达４个多月。长寿花　较多采用无性繁殖的方法，除了扦插　外还采用组织培养的方式来繁殖。　一、国内外长寿花的组培研究的　开端　据谭文澄等研究，有记载国外最　早进行长寿花组培实验，获得小植株　的是Ｓｍｉｔｈ（１９７９）等，国内最早的是卢思　聪、李海燕（１９８６），外植体是叶、茎　顶、茎等。　二、外植体的选择与处理　（一）基因型　目前，国内长寿花的组培主要集　中于红色品种Ｒａｋｏ、橙黄色品种　Ｐｅｔｅｒｏ、白花长寿花和龙爪长寿花等少　数几个品种及同属植物褐斑伽蓝的研　究。陈超比较不同品种长寿花胚状体　发生发育过程发现，不同基因型的长　寿花品种，在胚性愈伤组织的分化中　存在着差异，红色品种１４ｄ便有大量胚　状体长出，胚性愈伤组织颜色首先由　淡黄变褐随即诱导出胚状体；而橙黄　色品种则分化较慢，胚性愈伤组织颜　色由淡黄变绿随之诱导出胚状体。　（二）外植体取材部位及时间　各研究者对长寿花不同器官的取　材及利用方法也不相同，一般认为茎　尖和带腋芽茎段材料很容易直接诱导　出芽。苏慧用幼嫩的叶、叶柄和不带　节的茎段诱导愈伤组织，发现以叶作　外植体出愈率明显高于茎段和叶柄，　认为用叶作外植体效果最好。带有完　全叶柄的叶片可诱导出不定芽，不带　有完全叶柄的叶片多有致密的淡绿色　河南农业２０１２年第７期（下）　的愈伤组织生成。但长寿花嫩叶暗培　养后，可诱导出体细胞胚并可出芽。　张瑞姿发现外植体的叶龄影响再生频　率，新展开幼叶外植体再生频率高于　完全展开的老叶外植体，新生幼叶外　植体再生频率为７１％。李凤兰认为长寿　花花期较长，而且每小盆可抽生１５～３０　个花序，这为取得足够的外植体提供　了充分条件，同时，以未开放的花序　作为外植体，取材方便，并且不伤母　体。采用花序进行组织培养，能大大　提高长寿花繁殖系数。　（三）外植体的处理　在长寿花组织培养过程中，一般将　外植体放人稀的洗衣粉水中漂洗３～５ｍｉｎ，　流水漂洗３０ｍｉｎ左右，在超净工作台中　用７０％一７５％酒精消毒３０ｓ，再放入　０．１％一０．２％的ＨｇＣ１２（升汞）中灭菌。　多数学者对外植体灭菌时，使用０．１％　的ＨｇＣＩ＇ｚ￣菌５～８ｍｉｎ。然后用无菌水冲　洗８～１０次，再用无菌滤纸吸干，方可　接种。而茎段由于组织较老，用０．２％　的ＨｇＣｌ＇２￣菌２０ｍｉｎ效果最佳，无污染且　外植体成活率在３０％以上。　（四）外植体的极性　在长寿花叶盘的离体培养中，叶　盘在培养基上的放置方式对再生有影　响。叶面朝上放置有利于愈伤组织诱　导和再生，愈伤组织诱导率可达８５％，　再生频率达８１．６％。叶背向上放置叶盘　正面接触培养基，叶盘在植物生长调　节物质的作用下也发生膨大增厚现象，　但叶盘边缘褐化现象严重，愈伤组组　织诱导率仅仅只有５．９％，在继代培养　过程中愈伤组织颗粒逐渐玻璃化，最终　没有得到再生苗。　三、长寿花组培的基本成分　（一）基本培养基　长寿花的离体培养研究者大多数　都采用ＭＳ（Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ＆Ｓｋｏｏｇ，１９６２）固体　培养基。琼脂作固化剂的用量在６一　ｌＯｇ／Ｌ，碳源是蔗糖，使用浓度在２％～　３％。附加不同种类及配比的生长调节　物质。而邓群仙在长寿花离体繁殖中　发现，外植体在半固体培养基上形成　的丛生芽苗多，新梢生长速度快，同　时生根率高，根系发达，植株健壮。　外植体在半固体培养基上还能促进不　定根的诱导和伸长，将增殖和生根同　步进行，可简化离体繁殖的程序。　在生根培养时，大多数研究者使　用低浓度的ＭＳ培养基，其中不少使用　１／２ＭＳ或１／３ＭＳ的培养基。降低无机盐　浓度有利于生根，且根多而粗壮，发　根也快，加铁盐则更好。　（二）生长调节物质　１、诱导丛生芽的生长调节物质。在　长寿花组织中，ＢＡ浓度多在Ｄ２～２．０ｍｇ，Ｉ　生长素有ＮＡＡ、ＩＢＡ、２，４一Ｄ多种，以　ＮＡＡ的应用效果最好。中等浓度的　ＮＡＡ（０．２５　ｍｇ／Ｌ）可促进芽的生长，浓度　较高或较低反而抑制生长。林秀莲发　现添加外源植物生长调节物质ＧＡ对腋　芽萌动和抽长有明显的促进作用，一　般使用浓度为２ｍｇ／Ｌ；￣右。　用茎尖及带腋芽茎段外植体诱导　丛生芽时，崔广荣认为当ＮＡＡ浓度为　０，１～０．２ｍｇ／Ｌ、ＢＡ浓度为０．２～０．４ｍ以　时，随着ＢＡ浓度的升高，芽的增殖系　数显著增加；ＢＡ浓度为０．４　０．８ｍｇ／Ｌ　时，随着ＢＡ浓度的升高，芽的增殖系　数却逐渐下降。最佳植物生长调节物　质组合是ＢＡ０．４ｍｇ／Ｌ、ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ。而　吴丽芳的研究是，ＮＡＡ０．４ｍｇ／Ｌ、ＢＡ在　０．５～ｌｍｇＣＬ时茎段产生的不定芽最好。　当ＢＡ为２ｍｇ／

Ｌ时：不定芽出现明显的变　农业科学　ＮｏＮＧ　ＹＥ　ＫＥ　ｘＵＥ　异，茎秆变扁，叶片莲座状。　用叶片外植体诱导丛生芽时，ＢＡ　与生长素（ＮＡＡ或ＩＢＡ）￣当配比可显著提　高叶片的再生频率，低浓度ＢＡ（１．Ｏｍｇ／Ｌ）　更适宜诱导长寿花叶片再生。ＮＡＡ更　适合长寿花不定芽的诱导分化。张瑞　姿认为，ＢＡ浓度ｆ１．５ｍｇ／Ｌ）较高有利于　叶片产生愈伤组织，当将ＢＡ浓度降至　０－３～０．５ｍｇ／Ｌ时，可从愈伤组织上再分　化出不定丛芽。长寿花嫩叶外植体直　接出芽需要生长素和细胞分裂素的平　衡使用，单独使用生长素或细胞分裂　素均不能诱导其直接出芽。　２、诱导根的生长调节物质。ＮＡＡ　的添加对于根的发生具有促进作用，　但是ＮＡＡ过多，使根过度生长，反而　影响了根的质量，这对以后的成苗　不利。崔广荣则认为ＩＢＡ０．５ｍ　ＮＡＡ　０．５ｍｇ／Ｌ的组合最有利于不定根的形成。　３、诱导愈伤组织的生长调节物　质。陈超用长寿花的幼叶诱导出的愈　伤组织在外观上可分为淡黄色、黄褐　色、黄绿色、暗黄表面带黑、白色等　几种。细胞学观察结果显示，淡黄色　愈伤组织细胞呈圆形且形状规则，可　正常分化，此种愈伤组织即为胚性愈　伤组织。认为２，４一Ｄ浓度过高或过低均　不利于胚性愈伤组织的诱导。在胚性　愈伤的诱导中添加一定浓度的ＢＡ是必　要的。陈玉梁认为长寿花叶盘再生培　养基以ＭＳ＋ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ效　果最佳，在ＭＳ＋ＫＴ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ　培养基上叶盘边缘全部褐化，最终不　能分化成苗。　四、长寿花试管苗的培养条件　邓群仙将长寿花接种于ｐＨ５．８的固　体培养基上，植株后期生长速度慢，　叶色偏黄，而在ｐＨ５．５的半固体培养基　上新梢生长良好，增殖系数高，同时　生根诱导效应好，有利于将增殖和生　根同步进行。长寿花试管苗培养需要　１０—１４ｈ／ｄ的光照。嫩叶外植体在诱导　培养基上暗培养，或先暗培养３ｄ后再进　行光照培养，才有利于形成愈伤组织，　并可萌发长出丛芽。试管苗适宜ＲＨ为　７５％。　五、其他因素对长寿花组培的影响　李树和等（２００４）研究用蛭石、草　炭、珍珠岩、砂子、土壤等不同基质　配比对长寿花组培苗移栽成活的影响，　发现长寿花组培苗在几种基质中的成　活率都比较高，而且植株的长势也比　较接近，说明长寿花适合多种移栽基　质。但其中以１／３珍珠岩＋２，３蛭石的基　质最适合。　六、存在的问题　报道出现玻璃化苗的植物己达７０　多种。在长寿花的组织培养中也有这　种情况的出现，但未见如何解决问题　的报道。　参考文献：　【ｌ　文澄威策刚．观赏植物组织培养技术【Ｍ】．　北京：中国林业出版社，１９９７．　【２】陈超，王桂兰，田立民，等．长寿花胚性愈伤　组织的诱导及胚状体再生［Ｊ】．园艺学报，　２００４，３１（２）．　［３】苏慧，黄凤兰，尉红梅，等．长寿花快繁体系　的建立［Ｊ】．内蒙古农业科技，２ｏｏ５（２）．　［４］段鹏慧，李兴泽．重瓣长寿花叶片组织培养　及植株再生的研究［Ｊ】．中国农学通报，２０１０，　２６（０１）．　【５】孙利娜．长寿花嫩叶片的组织培养研究叨．　西部林业科学，２０１　ｌ，４ｏ（２）．　（责任编辑马志娟）　（上接第４３页）教师要有全面育人的　意识。教育的本质是培养人，是把学　生从一个自然人发展成为一个社会人。　在教学过程中，学生的各方面素质都　必须得到发展。德育是教育中的一个　重要组成部分，渗透到学生全面发展　的各个方面。　（三）确定结合点，有意识、有目　的地把德育渗透到教学中　现代教育理论指出，学生学习任　何新知识都必须依赖他们与客观环境　的相互作用。所以，思想教育的一条　策略是：在进行思想教育时，要为学　生提供一些真实的生活背景，让他们　到这些背景中去活动、去冲突、去体　验，逐渐形成正确的道德认知和良好　的行为模式，使他们在“亲近自然”、　“融人社会”和“认识自我”的真实生　活体验中获得良好的发展。　（四）德育应联系受教育者的现实　生活　加拿大教育家克里夫・贝克指出，　人生的基础价值是“生存、健康、幸　福、友谊、助人、自尊、被人尊重、　知识、自由、自我实现、意义感觉。”　这些价值往往具有“终极性”，体现着　人生的意向、愿望与目的。德育不仅　要关注学生政治方向、思想观念等意　识层面上的问题，也要关注学生身心　的健康发展；不仅要注重学生知识、　技能、思维的培养，也要尊重和重视　学生情感、意志、兴趣、需要、信念　等个性素质以及社会责任感与社会适　应能力的培养；不仅要为学生的健康　成长指明方向，而且要帮助学生开展　自我设计，从而使每个学生的个性都　能得到充分、自由和全面的发展。　（五）教师要以身作则　在德育中，教师是最具有道德典　范和说服力的人，其所言所行会给学　生带来深远的影响。孔子早在几千年　前就意识到教师应具有高尚的人格，　他主张“君子怀德”，即做教师的首先　要有高尚的人格魅力，才有资格去教　育学生，他提出“其身正，不令而行；　其身不正，虽令不从”，强调了身教的　重要性，认为教师要以自己合乎规范　的道德行为给学生做出榜样，这样教　师才能在学生心目中树立威信。强调　教师应该以身作则，为人师表，要以　自己的模范行为，即“正言”、“正　行”、“正教”去教育和影响学生，以　扶正世道人心。因此，从某种意义上　讲，教师是一本活的德育教材，教师　自身的师德师范，在所有的方法手段　中是最有效、最有影响力的。在教学　中。教师可通过自身流畅纯正的普通　话，丰富的知识，良好的个人素养，　字迹优美、重难点突出的板书，条理　清晰、逻辑性强的教学语言，富有创　造性、灵活性的教法感动学生，起到　潜移默化的效果。　随着时代的进步和社会开放程度　的不断提高，培养青少年具有良好的　公德是历史赋予广大教师神圣而光荣　的职责，我们要在平时的教学活动中　不断探索、总结经验，使每一个学生　的道德观在我们的影响下得以升华。　（责任编辑　赵淑芳）　河南农业２０１２年第７期（下）