２１ ０ ０年第 ９期 （ 总第 １４期 ） ６
文献综述
文 献综 述
猪伪狂 犬病诊 断检测方法 的研 究进展及应用
邢俊玲 高付城 （ 山东省武城县畜牧水产局 ２３０ ） ５３０
中图分类号 ：￥ ５ ． ８８ ８ ２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０ ７ ３２ １）９０ ９ ．２ ０ ７１３ （０ ００ ．０ １０
常规Ｐ Ｒ Ｃ 法进 行 了改进 ，提高Ｐ Ｒ的效率 ，使Ｐ Ｒ技术更 Ｃ Ｃ
趋 于 实 用 化 ，根 据 ｇ 基 设 计 一对 引物 ，选 用 高 速 离 心 Ｄ 和 短 时 间 Ｉ ０Ｃ 浴 释 放 模 板 ，将 试 验 缩 短 到 ４ 内 完 成 Ｏ ＂水 ｈ
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。
２ ０ 年 ， 陈 本 龙 等 根 据 ｇ 基 因 设 计 引 物 ，成 功 建 立 ０９ Ｄ
得 到 了广 泛应用 。 目前 ，主 要根据病 毒 生存 必须 的糖蛋 白基因和 毒力基 因为模 板设计 引物 ，检测 的基因 片段主 要有ｇ 、ｇ Ｂ Ｄ、ｇ Ｇ和ｇ 等，其 中ｇ 基 因是该病毒 的主要中 Ｅ Ｄ 和抗 原基因 。如 Ｅ ｈｖ￣ｉ Ｍ ｃｅ ｅ ａ Ｇ等 以Ｐ Ｖ Ｄ 基 因为模 板 Ｒｇ
３ 核酸探针检测技 术
探 针技 术 由于 其具 有特异 性 良好、敏 感程度 高 的优
红染色 后观察 呈现 非化脓性 脑炎变 化 ，其他 大体剖检 特
征 不 明 显 。在 神 经 细 胞 、胶 质 细 胞 和 毛 细 血 管 内皮 细 胞 可 检 出Ａ型 核 内包 涵 体 。
了检 测 Ｐ ｖ的 Ｐ Ｒ体 系 【。 Ｒ Ｃ ４ ． 鉴 另 Ｐ Ｒ Ｋａ 等 根 据 ｇ 、 Ｔ ２ Ｃ ｔ ｚ Ｅ Ｋ基 因 设 计 的 套 式Ｐ Ｒ Ｃ 能 将 Ｐ Ｖ野 毒 株 和 不 同 疫 苗株 有 效 地 鉴 别 开 Ｉ。刘 丽娜 等 Ｒ ６ 】 设 计 了与 Ｐ Ｖ的 ｇ Ｒ Ｂ、ｇ Ｄ、ｇ 基 因 的３ 引 物 ，建 立 了能 有 Ｅ 对
２ 病原学诊断技术
此 种 方 法 也被 称 为 诊 断Ｐ Ｖ的黄 金 标 准 。病 毒 分 离 时 Ｒ
效区分野毒株和基因缺失疫苗毒的多重Ｐ Ｒ Ｃ 诊断方法，敏 感性试 验结 果表 明 ，多重Ｐ Ｒ可 以检测到 １６ ｇ Ｃ ０ ｐ ￣基 因缺 失疫苗毒或７ ６ｇＰ Ｖ野毒 的核酸模板量【。 ５ ｐ Ｒ １
最 高 的 组 织 为 三 叉 神 经 节 ， 几 乎 为 １０ 。 石 建 平 等 对 ０ ％［
１ 临床诊断和病理组织学检 测
成 年 猪 无 明显 症 状 ， 母 猪 流 产 或 产 死 胎 ，仔 猪 表 现 神 经 症 状 ，肌 肉震 颤 ， 严 重 时 四 肢 划 水 样 运 动 ，体 温 升 高 达４ ～ ２ １４ ￣ Ｃ。取 样 本 的脑 和 脊 髓 做 组织 切 片 ， 苏 木 素 ． 伊
将 抗 体 （ 抗 原） 附 在 固 体 载 体 上 ， 随后 的 一 系 列 免 疫 学 或 吸 和 酶 促 生 化 反 应 都 在 此 固 相 载 体 上 进 行 的 免 疫 酶 测 定 实 验 。 酶 联 免 疫 吸 附 试 验 适 用 于 实 验 室 大 批 样 品 检 查 ， 产 地 检 疫 ，流 行 病 学调 查 和无 本 病 健康 猪 群 的建 立 ， 目 前 ， 国际 上 有 各 种 商 品 化Ｅ ＩＡ试 验 盒 出售 。 ＬＳ Ｍｏ ｔ（９ ８［ Ａ ｓａ（９ ７ｔ等 分 别 建 立 了 检 测 伪 ｕｎ １７ ） ， ｆ ｒ１８ ）】 ｈ ’
设 计 了一 对 引物 ，利 用 Ｐ Ｒ 对 １头 猪 的组 织 样 本 进 行 了 Ｃ 法 ９ 检 测 ，结 果 表 明有 １头 Ｐ Ｒ 应 阳 性 ，而 病 毒 分 离 只 得 到 ５ Ｃ 反
了３ Ｒ 株Ｐ Ｖ。周复 春等应 用Ｐ Ｒ 术进行 了Ｐ Ｖ的检测 ， Ｃ 技 Ｒ 并 对潜伏 的感染 部位也 进行 了相应 的研 究 。其 中检 出率
可 以采 集病猪 的组织 有 ：肾脏 、脑 、肝 、脾及 扁桃 体 ，
匀 浆 后 加 上 双 抗 ，接 种 到 敏 感 细 胞 ，直 至 出现 特 征 性 细
胞病变（ Ｐ ） Ｃ Ｅ 。这种方法的敏感性较差…。
５ 酶联免疫吸附试验（ＬＳ ） Ｅ ＩＡ
Ｅ ＩＡ是 目前 最为广泛 应用的一种免疫检测方法，也 ＬＳ 是被 国际贸易制定检测Ｐ ｖ的ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ法之一。它是以物理方法 Ｒ
毒 提 供 了 方 便 快 捷 的 新 技 术 ， 因 为 其 快 速 、 特 异 、 敏 感 ，且 安 全 可 靠 等 明显 优 势 ， 在 检 测 猪 伪 狂 犬 病 毒 方 面
近 年 来 ， 全 世 界 的 畜 类 受 到 传 染 的 病 毒 种 类 和 数 量 都 有 所 增 加 ， 其 中 猪 伪 狂 犬 病 毒 就 是 其 中一 种 。根 据 研 究 证 明 其 属 于 疱 疹 病 毒 科 ｃ疱 疹 病 毒 亚 科 猪 疱 疹 病 毒 Ｉ 【 ． 型 （ｕｄ Ｈ ｒｅｖｒＳ Ｉ Ｓ ｖＩ， 可 引 起 包 括 猪 在 内 的 多 种 Ｓ ｌ ｅｐ ｓｉ ， Ｈ ． ｕ ） 家 畜 和 野 生 动 物 共 患 一 种 急 性 传 染 病 。 该 病 对 养 猪 业 危 害 严 重 ， 主 要 引 起 的 临 床 症 状 有 ： 仔 猪 高 热 ， 中枢 神 经 病 状 及 较 高死 亡 率 ， 成 年 猪 则 长 期 潜 伏 感 染 ， 成 为 保 毒 宿 主 和 主 要 的 传 染 源 。世 界 上 ４ 多 个 国 家 均 有 本 病 的 报 ０ 道 发 生 ， 国 内 也 有 大 范 围 的 流 行 ， 对 全 世 界 的 养 猪 业 造 成 严 重 的 经 济 损 失 。 本 文 主 要 对 血 清 学 、分 子 生 物 学 诊 断 与检 测 方 法 ， 以及 鉴别 诊断 方 法 进 行 了综 述 。