氨基葡萄糖盐酸盐分析方法比较
摘 要：分别采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）、高效液相色谱-示差折
光检测法（HPLC-RID）和高效离子色谱-脉冲安培检测法（HPIC-PAD）检测氨基葡萄糖盐
酸盐，确定了几种方法的检测限和线性范围，考察了方法的精密度，测定了氨基葡萄糖盐酸
盐的加标回收率。结果显示，在三种方法中HPIC-PAD方法能测定到最低浓度的氨基葡萄糖
盐酸盐，且具有最高的精密度；HPLC-RID方法检测限最高，精密度最差。
关键词：高效液相色谱，高效离子色谱，蒸发光散射，示差折光，脉冲安培检测
前言：
氨基葡萄糖类物质具有重要的生理活性，Elson-Morgan法[1]是此类物质测定的经典方
法，由于其只能测定总的糖类而使其应用受到限制。多种色谱方法在糖类的分析中发挥着重
要作用，如气相色谱法[2]（GC）、凝胶色谱法[3]（GPC）、高效毛细管电泳法[4]（HPCE）、高
效液相色谱法[5,,,678]（HPLC）、高效离子色谱法[9,10]（HPIC）等。这些检测方法对不同糖类
化合物的检测分析各有不同的优势。最常用的糖类化合物的分析方法为高效液相色谱法，近
年来离子色谱技术在糖类化合物分析中的应用也越来越广泛。
本文对几种糖类物质测定方法在氨基葡萄糖盐酸盐分析中的应用进行了比较，为氨基葡
萄糖类物质分析的方法选择提供指导。
1、实验仪器和材料
1.1试剂和样品
乙腈（TEDIA，HPLC级），超纯水（Milli-Q），氨水（西陇化工，分析纯）
氨基葡萄糖盐酸盐标准样品（国家海洋局第三海洋研究所），氨基葡萄糖盐酸盐对照品
（中国药品生物制品检定所），硫酸氨基葡萄糖胶囊（由厦门蓝湾科技有限公司提供）
准确称取、精确定容的浓度为40.00mg/mL和1.00mg/mL的氨基葡萄糖盐酸盐标准储备
液。
1.2仪器和条件
电子天平（Sartorius BP211D），Milli-Q Biocel A10超纯水机（Millipore）
HPLC-ELSD法：Waters-Alliance 2695型高效液相色谱仪，Alltech ELSD800蒸发光散
射检测器，Waters Carbohydrate柱（250 mm×4.6 mm，4μm）；流动相为乙腈：水=70：30；
流速：1.0 mL/min；柱温：28oC；ELSD参数：载气流速为3.00L/min，蒸发管温度为80oC。
HPLC-RID法：高效液相色谱仪（Waters），K-2401 RI 检测器（诺尔KNAUER），氨基
柱Asahipak NH2P-50 4E；流动相（其中氨水浓度为0.05%）乙腈比水为80：20，流速为
1.2mL/min，柱温25oC。
HPIC-PAD法：ICS-3000型离子色谱仪（Dionex）：ED3000电化学检测器，Au工作电
极，Ti对电极，pH/ Ag/ AgCl复合参比电极，糖类分析柱CarboPac PA10（250mm×4mm）；
NaOH浓度为20mmol/L，流速：0.6mL/min，柱温和检测池温度均为30oC。
2、结果与讨论
2.1方法检测限实验
2.1.1 HPLC-ELSD法
精密量取氨基葡萄糖盐酸盐标准储备溶液（40.00mg/mL），稀释不同浓度进样，直到检
测获得的氨基葡萄糖盐酸盐主峰信号为检测器噪声水平的3倍为止，得氨基葡萄糖盐酸盐的
最低检测限为0.2 μg。
2.1.2 HPLC-RID方法
精密量取氨基葡萄糖盐酸盐标准储备溶液（40.00mg/mL），稀释不同浓度进样，直到检
测获得的氨基葡萄糖盐酸盐主峰信号为检测器噪音水平的3倍为止，得氨基葡萄糖盐酸盐最
低检测限为10.66μg。
2.1.3 HPAEC-PAD方法
精密量取氨基葡萄糖盐酸盐标准储备溶液（1.00mg/mL），稀释不同浓度进样，直到检
测获得的氨基葡萄糖盐酸盐主峰信号为检测器噪音水平的3倍为止，得氨基葡萄糖盐酸盐最
低检测限为0.125ng 。
对比三种方法的结果可以看出，三种方法中HPIC-PAD方法能够检测最低浓度的氨基葡
萄糖盐酸盐，可用于极低浓度下的样品检测。HPLC-RID方法效果最差。
2.2标准曲线
2.2.1 HPLC-ELSD法
分别精密吸取氨基葡萄糖标准储备溶液（40.00mg/mL）稀释成0.24、0.40、0.60、0.80、
1.00、1.20mg/mL各不同浓度。过滤取10μL进样，以测得面积y对进样量x（μg）进行
线性回归，得线性回归方程为：y=2.0786×106x-1.3639×106，r2=0.9991。本方法在2.4～12.0
μg范围内，线性良好。
2.2.2 HPLC-RID方法
分别精密移取氨基葡萄糖盐酸盐储备液（40.00mg/mL）稀释成8.00、16.00、24.00、
32.00mg/mL各不同浓度。过滤取20μL进样，以测得面积y对进样量x（μg）进行线性回
归，得回归方程为y = 5800.9x – 48329， r2=0.9984。本方法在160.0～640.0 μg范围内，
线性良好。
2.2.3 HPAEC-PAD方法
取氨基葡萄糖盐酸盐标准储备液（1.00mg/mL）稀释成1.00、2.00、4.00、8.00、10.00、
12.00、15.00 μg/mL各不同浓度。过滤取25μL进样，以测得面积y对进样量x（ng）进
行线性回归，得到的回归方程为y = 0.3406x + 0.6255， r2 = 0.9999。本方法在25.0～375.0ng
范围内，线性良好。 中国色谱网www.sepu.net
对比三种方法的结果可以看出，HPIC-PAD方法有最高的相关系数（r），HPLC-RID方
法的相关系数最小。
2.3方法精密度实验
2.3.1 HPLC-ELSD法
在线性浓度范围内，精密吸取氨基葡萄糖盐酸盐溶液，进样量10μL，连续进样6次，
以峰面积考察进样精密度。实验结果显示峰面积的相对标准偏差为1.64%。
2.3.2 HPLC-RID方法
在线性浓度范围内，精密吸取氨基葡萄糖盐酸盐溶液，进样量20μL，连续进样6次，
以峰面积考察进样精密度。实验结果显示峰面积的相对标准偏差为2.89%。
2.3.3 HPAEC-PAD方法
在线性浓度范围内，精密吸取氨基葡萄糖盐酸盐溶液，进样量25μL，连续进样6次，
以峰面积考察进样精密度。实验结果显示峰面积的相对标准偏差为0.12%。
对比三种方法的结果可以看出，HPIC-PAD方法具有最高的精密度，HPLC-RID方法精
密度最低。
2.4方法回收率实验
2.4.1 HPLC-ELSD法
精密称取硫酸氨基葡萄糖样品71.60mg，定容到200mL容量瓶，按0%、60%、120%、
250%的比例添加D-氨基葡萄糖盐酸盐对照品，再进行定值测定，连续进样6次测定加标回
收率，平均回收率为96.8%，结果见
表 1 HPLC-ELSD法测定氨基葡萄糖盐酸盐加标回收率
2.4.2 HPIC-PAD方法
精密称取氨基葡萄糖对照品50.80mg，定容到50mL容量瓶，分别移取1mL溶液到4个
200mL容量瓶，按0%、80%、100%、120%的比例添加氨基葡萄糖盐酸盐标准样品，再进行定
值测定，连续进样6次测定加标回收率，平均回收率为101.5%，结果见表 2。
表 2 HPIC-PAD法测定氨基葡萄糖盐酸盐加标回收率
3、结论：
本文比较了氨基葡萄糖盐酸盐测定的HPLC-RID、HPLC-ELSD和HPIC-PAD方法，结
果表明，高效离子色谱法具有快速、简便的优点，精密度高，尤其在低浓度糖类化合物的检
测方面独具优势。
参考文献
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