重楼总皂苷对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用

发表时间：2014-07-16T15:50:57.187Z 来源：《中外健康文摘》2014年第16期供稿 作者： 吴殿斌 陶萍

[导读] 荷瘤小鼠模型血清IL-2值比正常组低，而重楼总皂苷组小鼠IL-2水平明显升高。

吴殿斌 陶萍（ 辽宁大连大学附属中山医院药剂科 辽宁大连 116001）

【摘要】目的 探讨重楼总皂苷对小鼠H22移植瘤的生长抑制作用。方法 将建立的H22荷瘤小鼠模型分为模型组，重楼总皂苷高、低剂量组和环磷酰胺组，总皂苷组连续给药10d，环磷酰胺组隔日给药。结果 与模型组相比，重楼总皂苷能显著抑制肿瘤生长，脾脏指数和胸

腺指数与模型组比较升高，血清TNF-α和IL-2的水平提高，血清T-AOC水平提高和血清MDA的水平降低。结论 重楼总皂苷对H22移植瘤具

有明显的抑制作用，其作用机制可能与提高小鼠免疫功能和增强抗氧化能力有关。

【关键词】重楼 H22 抗肿瘤

【中图分类号】R96 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2014）16-0007-02

【Abstract】Objectives The objective of this paper was to investigate the effects of extracting total flavonoids from Paris PolyphyllaSmith on the antitumor action in a sample of H22 tumor bearing mice.Methods The H22 tumor bearing mice were divided into 4 groups:control group, high dose and low dose of Paris Polyphylla Smith, and the Endoxan group. The 2 Groups were continuously adminatratedParis Polyphylla Smith on a daily basis for ten days, the Endoxan group was adminatrated drug every other day.Results Compare to thecontrol group, the extracting total flavonoids from Paris Polyphylla Smith has been proved to have great effects on anti tumor. serumTNF-a and IL-2 level have been improved, while serum T-AOC and MDA level have been decreased.Conclusions The extracting totalflavonoids from Paris Polyphylla Smith has signifant effects on controlling the development of H22 tumor, probably the antitumor effectswere as a result of enhancing the system immune function and antioxidant effects.

【Key words】total flavonoids from Paris Polyphylla Smith H22 antitumor

重楼，为百合科植物[1]。重楼主要有效成分是甾体皂苷，约占总化合物数目的80%，按苷元的不同主要有两类，一类为薯蓣皂苷元的糖苷，一类为偏诺皂苷元的糖苷[2]，此外还含有皂草苷A～D、蚤休皂苷A,B、七叶一枝花皂苷、重楼甾酮[3]。其他有效成分有植物蜕皮激

素[4]，植物甾醇，黄酮[5]等。药理研究发现其有效成分具有止血作用[6]，抗肿瘤作用[7]，抗菌作用，抗炎作用，大脑与肾脏的保护作用，

抗氧化作用，子宫收缩等作用。

1 材料与方法

1.1材料

昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄各半，由大连医科大学动物中心提供；肝癌（H22）细胞株由大连医科大学附属医院提供；重楼（大连百度医药公司）；环磷酰胺（江苏恒瑞医药股份有限公司）；小鼠白细胞介素2（IL-2）试剂盒、肿瘤坏死因子（TNF-α）试剂盒、总抗

氧化活力（T-AOC）测试盒和丙二醛（MDA）测试盒（南京建成生物技术研究所）。

1.2 方法

1.2.1 重楼总皂苷的制备

参考朱丽丽的方法[8]，以10倍量的70%乙醇浸泡过夜，88℃加热回流提取，提取时间4小时，提取三次，滤液合并回收乙醇，真空干燥得重楼总皂苷。

1.2.2 H22荷瘤小鼠模型的制备

在无菌条件下抽取接种7d后生长良好的H22荷瘤小鼠的腹水，观察细胞形态及细胞计数，肿瘤细胞数为97%以上方可使用，无菌生理盐水稀释密度为1.5 ×107个/mL，腹腔接种，0.3ml/只，制成实体瘤模型。

1.2.3 动物分组及处理

接种后第2天将小鼠随即分为模型组，重楼总皂苷高、低剂量组和环磷酰胺组，每组10只，重楼总皂苷高、低剂量组分别灌胃给药

100mg/kg、50mg/kg，每日一次。环磷酰胺组按20mg/kg剂量隔日腹腔注射一次，模型组以等量生理盐水灌胃，另取10只正常的小鼠设为正常组，每天生理盐水灌胃，各组小鼠均给药10天。最后一次给药后24h，处死。

1.2.4 H22荷瘤小鼠的抑瘤率和免疫器官指数

颈椎脱臼处死小鼠后剥离瘤块，取脾脏、胸腺并称质量。按下列公式计算抑瘤率和脏器指数。

抑瘤率= (阴性对照组平均瘤质量-实验组平均瘤质量) /阴性对照组平均瘤质量×100%。

脏器指数 = 相应脏器质量(mg) /小鼠体重(g)。

1.2.5血清中TNF-α和IL-2含量的测定

实验组和对照组小鼠在处死前眼球取血，3000r/min离心20min，收集血清，按试剂盒说明书测定各组血清中TNF-α和IL-2的含量。

1.2.6比色法检测血清T-AOC和MDA 水平

按测试盒中说明书检测各组血清中T-AOC和 MDA水平。

1.2.7 统计分析

所有数据采用SPSS11.0统计软件进行统计处理，实验数据用x-±s表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，方差齐，组间两两比较采用LSD法;方差不齐的采用秩和检验。P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 重楼总皂苷对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响

重楼总皂苷高、低剂量组小鼠肝癌H22移植瘤的生长明显受到抑制，与模型组相比，环磷酰胺组和重楼总皂苷高、低剂量组荷瘤小鼠瘤质量显著减轻，重楼总皂苷各剂量组抑瘤率低于环磷酰胺组，分别为51.20%和34.34%。结果见表1。

表1 重楼总皂苷对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响（x-±s）

组别 剂量mg/(kg?d) 平均瘤重（g） 抑瘤率（%）

模型组 - 1.66±0.38 - CTX组 20 0.58±0.21** 65.06

重楼总皂苷高剂量组 100 0.81±0.18** 51.20

重楼总皂苷低剂量组 50 1.09±0.27* 34.34

注: 与模型组对比* P ＜0.05，**P ＜0.01。

2.2 重楼总皂苷对荷瘤小鼠免疫器官指数的影响

重楼总皂苷高、低剂量组小鼠脾脏指数和胸腺指数与模型组比较差异显著，且明显高于环磷酰胺组，环磷酰胺组小鼠胸腺指数和脾脏指数均低于模型组。结果见表2。

表2 重楼总皂苷对荷瘤小鼠胸腺指数与脾脏指数比较（x-±s）

组别 剂量mg/(kg?d) 脾脏指数(mg/g) 胸腺指数(mg/g)

正常组 - 2.94±0.65 2.54±0.59

模型组 - 3.59±0.75 1.97±0.83

CTX组 20 2.42±0.87 1.61±0.53

重楼总皂苷高剂量组 100 6.61±0.66** 2.83±0.79

重楼总皂苷低剂量组 50 4.75±0.72** 2.31±0.49

注: 与模型组对比**P＜0.01。

2.3 重楼总皂苷对荷瘤小鼠血清TNF-α和IL-2水平的影响

重楼总皂苷各剂量组与模型组比较TNF-α和IL-2含量增高，且具有显著性差异，与环磷酰胺组相比，重楼总皂苷组荷瘤小鼠血清中

TNF-α和IL-2的含量也增高。结果见表3。

表3 重楼总皂苷对荷瘤小鼠血清TNF-α和IL-2水平的影响（x-±s）

组别 剂量mg/(kg?d) TNF-α( ng/L) IL-2 ( ng/L)

正常组 95.78±7.56 221.42±4.88

模型组 59.88±6.37 130.72±5.11

CTX组 20 72.27±7.52 146.21±6.42

重楼总皂苷高剂量组 100 88.98±6.24* 180.53±6.68**

重楼总皂苷低剂量组 50 78.44±6.89* 153.14±4.54*

注: 与模型组对比* P ＜0. 05，**P ＜0. 01。

2.4 重楼总皂苷对荷瘤小鼠血清抗氧化指标的影响

与正常组比较，模型组小鼠MDA水平显著升高，T-AOC水平降低。与模型组比较，重楼总皂苷各剂量组血清MDA水平显著降低，血清

T-AOC水平显著升高。重楼总皂苷各剂量组小鼠血清T-AOC水平也高于环磷酰胺组。结果见表4。

表4 重楼总皂苷对荷瘤小鼠血清抗氧化指标的影响（x-±s）

组别 剂量mg/(kg?d) T-AOC (U/mL) MDA(nmol/mg)

正常组 14.21±1.32 6.96±0.22

模型组 12.78±1.22 15.26±0.42

CTX组 20 10.93±1.41 8.05±0.76

重楼总皂苷高剂量组 100 21.15±1.33* 8.85±0.68*

重楼总皂苷低剂量组 50 17.45±1.46* 9.67±0.95*

注: 与模型组对比* P ＜0.05，**P ＜0.01。

3 讨论

本实验通过H22肝癌荷瘤小鼠模型来考察重楼总皂苷的抗肿瘤作用。实验结果表明，重楼总皂苷对小鼠H22肝癌瘤生长具有一定的抑制作用，其高剂量的抑瘤率为51.20%，低剂量的抑瘤率为34.34%，其抑瘤作用没有环磷酰胺强，但是与环磷酰胺组比较却能提高小鼠脾脏

指数和胸腺指数，增强小鼠的免疫功能。

在实验中，荷瘤小鼠模型血清IL-2值比正常组低，而重楼总皂苷组小鼠IL-2水平明显升高，IL-2在调节免疫反应中起着重要作用[9]，该值降低是细胞免疫功能受损的重要标志。重楼总皂苷给药后荷瘤小鼠血清TNF-α水平也有提高，有研究表明增强机体免疫功能和抗肿瘤作

用与TNF-α的升高有关[10]。

在本实验中，重楼总皂苷给药后荷瘤小鼠血清MDA水平降低，T-AOC水平提高，血清总抗氧化能力有所提高，说明重楼总皂苷抗肿瘤作用可能还与抗氧化能力有关。

参考文献

[1]中华人民共和国药典 2010年一部，国家药典委员会 中国医药科技出版社.

[2] Chen C X, Zhou J. Studies on chemical constituents of Paris polyphylla var. yunnanensis [J]. Acta Bot Yunnan(云南植物研究),1981, 3(1): 89-93. [3] ingh S B, Raghunath S. Furostanol saponins fromParis polyphylla structures of polyphyllin G and H [J].Phytochemistry, 1982,21(8): 2079.

[4] Wang Q, Yu X S. Determination of ecdysterone in 19 species of the resource plants [J]. J China Pharm Univ(中国药科大学学报)，1990, 21(3): 229-231.

[5] Chen C X, Zhang Y T, Zhou J. The glycosides of aerial parts of Paris polyphylla var. yunnanensis [J]. Acta Bot Yunnan(云南植物研究), 1995, 17(4): 473-478.

[6]付亚莉，赵振虎，善亚君，等.重楼甾体总皂苷对血小板聚集的直接诱导作用及初步机制研究[J].军事医学科学院院刊，2007，31(5):416.

[7]刘广遐，王婷婷，胡文静，等.重楼醇提物对恶性胸腹水中原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用[J].实用老年医学，2008，22(2):101.

[8]朱丽丽.中药重楼中试提取工艺优选及抗肿瘤作用机制研究.天津医科大学硕士学位论文2006年.