天然产物研究与开发Ｖｏｌ１４Ｎｏ３ＮＡＴＵＲＡＬＰＲＯＤＵＣＴＲＦ§ＥＡＲＣＨＡＮＤＤＥＶＥＵ）ＰＭＥＮＴ３９

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生物碱成分常用显色剂及一种检测内酰胺的特效方法康文艺２余正文１杨小生１郝小江２＋（１，贵州省、中国科学院天然产物化学重点实验室贵阳５５０００２；２．中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室昆明６５０２０４）

摘要薄层层析（ＴＬＣ），碘化铋钾和改良碘化钾试剂常作为生物碱成分（天然和合成让台物）的显色剂。本文对它们进行综述、分析，以期对生物碱成分的薄层层析提供参考。同时提供一种检测卜内酰胺的特效方法。关键词薄层层析；硖化铋钾；显色剂；７－内酰胺

薄层层析（ＴＬＣ）作为一种简便、有效的成分（天然和合成化合物）分析方法和手段已被公认，结合一般显色剂和特殊显色剂，成分的定性、定量就得以有效进行，因此显色剂的作用就更显突出。生物碱成分的常用显色剂为碘化铋钾及改良碘化铋钾试剂。通过改变配制显色剂的酸种类、辅助试剂类型和有机溶剂的配人，形成了各具特色的显色剂。１常用碘化铋钾显色剂１１Ｄｒａｇｅｎｄｏｒｆｆ’ｓｒｅａｇｅｎｔ（Ｂｒｅｇｏｆｆ－Ｄｅｌｗｉｃｈｅ）准备液：（Ｉ）８ｇ碱式硝酸铋溶于２０ｍｌ２５％硝酸中；（Ⅱ）２０ｇ碘化钾溶于１ｍｌ２５％的盐酸和５ｒｎｌ水的混合物中。储备液：（Ⅲ）Ｉ与Ⅱ混合，加水至溶液显橙红色（约９５ｍ１）；将溶液过滤后用水稀释至１００ｍｌ。喷洒液：２ｍｌ储备液加２０ｍｌ水、６ｍｌ的盐酸５ｍｌ和６ｍｌ氢氧化钠。如果氢氧化铋不溶解，加６ｒｎｌ的盐酸至溶液澄清。储备液可长期保存；喷洒液在低温处可保存１０ｄ。１．２Ｄｒａｇｅｎｄｏｒｆｆ’Ｓｒｅａｇｅｎｔ（Ｍｕｎｉｅｒ）准备液（Ｉ）１．７ｇ硝酸铋钾溶于１００ｒｎｌ２０％酒石酸中；（ＩＩ）１６ｇ碘化钾溶于４０“水中。储备液：Ｉ与Ⅱ混合。喷洒液：５０ｍｌ储备液加１００ｇ酒石酸加５００ｍｌ收稿１３期：２００２－０１．１６修回日期：２００１．０４．０４＊通讯联系人（Ｇ。Ⅲ３娜ｄ１嘻ａｕｔｈｃｆ）水。１．３１）ｒａｇｅｎｄｏｒｆｆ’Ｓｒｅａｇｅｎｔ（Ｍｕｎｉｅｒａｎｄｍａｃｈｅｂ－ｏｅｕｆ）准备液（Ｉ）２．５ｇ碱式硝酸铋溶于２０ｍｌ水２０％乙酸的混合物中；（１Ｉ）４ｇ碘化钾溶于１０ｍ１水中。储备液：Ｉ与Ⅱ混合，可保存六个月。喷洒液：５ｍｌ储备液加１０ｍｌ乙酸，用水稀释至１００ｍｌ。１４Ｄｒａｇｅｎｄｏｒｆｆ’Ｓ

ｒｅａｇｅｎｔ（Ｒｏｂｌｅｓ】

准备液：５ｇ碘化钾、１２．５ｍｌ水和３ｆｒｄ

４划盐

酸混合，加入１ｇ硝酸铋煮沸，冷却后加入１２．５ｍｌ水；储备液：加入碘化钾和柠檬酸各５ｇ于准备液中，并用７５ｍｌ０．１ｔｏｏ！的盐酸稀释。１．５Ｄｒａｇｅｎｄｏｒｆｆ’Ｓｒｅａｇｅｎｔ（Ｔｈｉｅｓａｎｄｒｅｕｔｅｒ）

准备液：２．６ｇ碱式碳酸铋加７．５ｇ碘化钠（用

浓硫酸干燥２４ｈ）与２５ｔｎｌ乙酸共沸几分钟，静置一夜后滤掉乙酸钠。储备液：取该溶液，用８０ｍｌ乙酸乙酯稀释。喷洒液：２０ｍ１储备液加２０ｍｌ乙酸和１２０ｍｌ乙酸乙酯后，再加１０ｒｎｌ水。１６Ｄｒａｇｅｎｄｏｒｆｆ’Ｓｒｅａｇｅｍ（ＴｈｉｅｓａｎｄＲｅｕｔｅｒ．Ｖａｇｕｊｆａｌｖｉｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ】准备液：与１．５相同。喷洒液：２０ｍｔ准备液加５０ｍｌ乙酸后，再加１２０ｍｌ乙酸乙酯，使用时，用喷洒液喷后再用１０％的硫酸喷洒。

　万方数据天然产物研究与开发ｖ【）Ｉ１４Ｎ札３

１．７Ｄｒａｇｅｎｄｏｒｆｆ’ｓ

ｒｅａｇｅｎｔ（Ｔｒａｂｅｒｔ）

准备液：１．３ｇ碳酸铋加人１２ｒ１１ｌ沸水中溶解后，加１５ｇ碘化钾；然后加人３．８ｍ１２

ｔｏｏｌ硫酸混

匀后滤去硫酸钾，并用１００ｍｌ水稀释备用。储备液：再准备液中加人０．１ｇ硫酸氢钠后浓

缩。喷洒液：４ｍｌ储备液加３０ｍ１甲醇，再加入２０ｎ“乙醚，过滤后加入０．３ｍｌ乙酸和２ｍｌ水。该溶液避光条件下可保存一周。１．８Ｄｒａｇｅｎｄｏｒｆｆ’ｓ

ｒｅａｇｅｎｔ（Ｓｏｄｉｕｍｎｉｔｒｉｔｅ）

准备液：（Ｉ）Ｉ与１．２相同；（ＩＩ）１０％亚硝酸钠溶液。喷洒液：相继用Ｉ和Ⅱ喷射。２碘化铋钾显色剂的改良及评价２．１ＴｈｉｅｓａｎｄＲｅｕｔｈｅｒ用乙酸．乙酸乙酯取代水溶液。由于乙酸乙酯易挥发，喷射后斑点扩散减小，但却降低了反应的灵敏度。２２Ｖａｇｕｊｆａｌｖｉ改进了ＴｈｉｅｓａｎｄＲｅｕｔｈｅｒ的方法，即在喷洒Ｄｒａｇｅｎｄｏｒｆｆ’ｓｒｅａｇｅｎｔ后再喷０．１ｔｏｏｌ硫酸，在纸色谱中灵敏度增加约ｌＯ倍。后来他又将此法用于薄层色谱，并用１０％硫酸取代了０１ｍｏｔ硫酸，反应的灵敏度进一步提高。２３Ｒｏｂｌｅ再次改变溶剂体系，用盐酸取代乙酸。因乙酸的高ｐＨ值，易使斑点褪色；同时用０１ｍｏｌ盐酸代替水作稀释剂，使溶液不易浑浊。２．４Ｔｒａｂｅｒｔ将Ｄｒａｇｅｎｄｏｒｆｆ’ｓｒｅａｇｅｎｔ溶于乙醚．甲醇体系中，并再乙醚体系中进行纸色谱，反应灵敏度增加。２．５Ｆｉｋｅ；Ｐｕｅｅｈｅｔａｌ和Ｍｅｌｅａｎ等改进了Ｍｕｎｉｅｒ和Ｍａｅｈｌｂｏｕｅｆ的方法，即在喷洒了Ｍｕｎｅｒ＼ｕｎｉｅｒａｎｄＭａｅｈｅｂｏｕｂｏｕｅｆ’ｓｍｏｄｉｆｉｅａｔｉｏｎｏｆＤｒａｇｅｎｄｏｒｆｆ’ｓｒｅａｇｅｎｔ后。再喷１０％的亚硝酸钠溶液，改变了斑点的背景，斑点的颜色也由黄色褪为白色，便于观察。该法的灵敏度为０．０１－－０１ｒ（微克），该显色剂目前被许多实验室广泛采用。综观上述方法，各有特点。采用有机溶剂体系斑点不易扩散，便于观察，但灵敏度低；而在水体系中，斑点易于扩散，但灵敏度高；无论如何，浓硫酸、盐酸、亚硝酸钠三种试剂相继引入，对碘化铋钾显色剂的改进起到了重要的作用。３碘化铋钾显色剂的优缺点碘化铋钾试剂作为一种简便、快速、有效的生物碱显色剂，在生物碱成分的薄层层析中扮演着ｉ毽要的角色，为生物碱成分的预示、分离和纯化提供ｒ重要的线索和依据，另外，碘化铋钾还可％作为某些化合物（蛋白质、胨、内毒胺、胆碱）的沉淀剂。碘化铋钾显色剂对于某些非生物成分也能显色，即所谓的假阳性反应。如：吡喃酮中的醉椒素、聚氧乙烯、丙烯醛、内酯类成分及某些具有三键或羟基的三萜及甾体的衍生物。碘化铋钾显色剂对于碱性较强的生物碱成分显色灵敏，碱性较弱的生物碱成分显色灵敏度较差。对于直链酰胺、内酰胺、肽类化台物不显阳性反应。

４丫．内酰胺的检测方法在开展｝内酰胺类化合物的研究中，发现：碘、５％硫酸、磷钼酸等显色剂对此类化合物的显色效果、灵敏度以及特征性均不理想。经反复试验和对大量化合物的检验，确立了卜内酰胺或Ｎ一取代７一内酰胺同系物的检测方法；将被检测样品溶解并列其进行硅胶薄层层析（ＴＬＣ）后，喷洒５％硫酸乙醇溶液，然后用电吹风加热使硅胶板的溶剂前沿痕迹出现，迅速喷洒Ｄｒａｇｅｎｄｏｒｆｆ显色剂，黄色至亮黄色斑点为本类化合物的特征阳性反应；单独使用其中的任何一种试剂均无效。本方法对７一内酰胺或Ｎ．取代７一内酰胺有特效，检测灵敏度为０．０１～０．１ｒ（微克），对其它含氮化台物如直链酰胺、其它内酰胺、小分子肽类化合物显阳性反应。

参考文献ｌ曹治权层析显色手册中国商业出版社，ｔ９８６，１２５２徐任生等．中草药有效成分提取与分离．上海科学技术出版社，１９８９，２６２３ＡＢａｅｒｈｅｉｍＳｖｅｎｄｓｅｎ甜ａ／．ｃｈｍｍａｔｏｇｒａｐｈｙｏｆａｌｋａｌｏｉｄｓＥｌｓｅｖｉｅｒｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇｃｏｍｐａｎｙ，１．９８３

４肖崇厚等．中药化学．上海科学技术出版社，１９９３，７０～８ｌ（下转第４４页ｌ

　万方数据天然产物研究与开发ＳＴＵＤＩＥＳ０ＮＴＨＥⅣＩｏＲＰＨＯＬＯＧＹＣＨＡＲＡＣＴＥＲＳＡＮＤＣＨＥＭＩＣＡＬｃｏＭＰ０ｓＩＴＩｏＮＯＦ［ＡＢＥＬ＾积】９ｃＨｕｓＭＡＮｆＨｏＴ（Ｌ．）］ＳＥＥＤＳ

Ｉ。ＩＮＷｅｎ－ｑｕｎｌ，ＣＨＥＮＺｈｏｎ９２，ＣＨＥＮＪｉｎ—ｌｉｎ９１，Ｗ【ＪＨｕｉ—ｐｉｎ９１，ＬＩＵＪｉａｎ—ｑｉｕｌ

（１ＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＣｏｌｌｅｇｅ，ＦｕｊｉａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００７，Ｃｈｉｎａ；

２ＤｅｐａｒｔｍｏｔｔｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｘｉａｍｅｎ

Ｕｎｉ＇ｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙｄｍｎｅｎ

３６１００５，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ【Ａｂｅｌｍａ，ｃｈｕｓｍａｎｉｔ∞ｔ（Ｌ，）］ｓｅｅｄｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｃｈａｔａｃｔｅｒｓｉｓｒｅｐｏｒｔｅｄｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｅｎｔｉｒｅｉｎｔｈｅ

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ｆｉｒｓｔＡｎｄｔｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｉｔｓｓｅｅｄｓｈａｖｅｂｅｅｎｓｔｕｄｉｅｄｅｉｔｈｅｒ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄ：ｔｈｅｒｅａｒｅｐｌｅｎｔｙｏｆ

ｆａｔｔｙａｃｉｄｓｉｎｔｈｅｓｅｅｄｏｉｌｗｈｉｃｈｉｓｎｅｃｅｓｓａｒｙ｛ｏｒｈｕｍａｎｂｏｄｙ．Ｔｈｅｍａｉｎｃｏｍｐｏｎｅｎｔｗｅｒｅ：１ｉｎｏｌｉｃａｃｉｄ（８２１７９％）．

ｏｌｅｉｃａｃｉｄ（９．１９５％），ｐａｌｍｉｔｉｃａｃｉｄ（４７５６％），ｓｔｅａｒｉｃａｃｉｄ（２．６８１％），ｌｉｎｏｌｅｎｉｃａｃｉｄ（０．３２８％）ｅｔｃ。ａｎｄｅｉｇｈｔｅｅｎ

ｋｉｎｄｓｏｆａｎｌｉｎｏａｃｉｄｓ，ｔｗｅｎｔｙｆｏｏｒｋｉｎｄｓｏｆｍｉｎｅｒａｌｅｌｅｍｅｎｔｓｆｒｏｍｔｈｅｓｅｅｄｗｅｒｅａｌｓｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｔｈｅ

ｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆ

ａｍｉｎｏａｃｉｄａｎｄｍｉｎｅｒａｌｅｌｅｍｅｎｔｓｉｎｔｈｅｓｅｅｄｓｗｅｒｅａｂｕｎｄｍｌｔａｎｄｔｈｅｒｅｗｅｒｅｐｌｅｎｔｙｏｆｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄｆａｔｔｙａｃｉｄｓｉｎ

ｉｔｓｓｅｅｄｄｌ，ａｎｄｉｔｓｃｏｎｔｅｎｔｒｅａｃｈｅｄ９１．１８５％．‘ｒｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈＯＷｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｅｅｄａｎｄｉｔｓｏｉｌｗｅｒｅｍｏｕｒｉｓｈｒｎｅｎｔａｎｄ

ｉｎｈｅａｌｔｈｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ．ａｎｄｏｆｐｏｔｅｎｔｉａｌｖａｌｕｅｉｎ

ｅｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎａｎｄｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ．

ＫｅｙｗｏｒｄｓｌＡｂｅｌｍｏｓｃｈｕｓｍａｎｉｈＯｔ（Ｉ。）］ｓｅｅｄ；ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆｓｅｅｄｓ；ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄｆａｔｔｙａｃｉｄｓ；ａｍｉｎｏ

ａｃｉｄｓ：ｍｉｎｅｒａｌｅｌｅｍｅｎｔｓ；ｃｏｎｔｅｎｔｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ

（上接第４０页）ＧＥＮＥＲＡＬＳＰＲＡＹＲＥＡＧＥＮＴＵＳＥＤＩＮＡＬＫＡＬｏＩＤＳＡＮＤＡ

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