附三：复习思考题

1.什么叫生物制片，它分几大类？

生物制片：就是要经过特殊手段，将所观察的材料制成体积小而又透明的薄片，使其能在显微镜下直接观察和研究。

它分切片法和非切片法两大类。

2.什么叫切片法？简述其主要过程。

切片法：就是要将新鲜的材料经过特殊的处理，用刀片切成薄片的过程。

基本过程：固定→冲洗→脱水→透明→包埋→切片→染色→分化→封片。

⒊什么叫非切片法？它有哪些方法？简述其主要过程。

非切片法：就要用物理或化学的方法，将生物体组织分离成单个细胞或薄片，或将整个生物体进行整体封藏。

非切片法包括：整体制片法、离析法、压片法、涂片法、透明法。

基本过程：固定→冲洗→整体染色→分化与退染→脱水→透明→压片。

⒋什么叫固定，固定的目的是什么？

固定：就是将所要观察的新鲜材料，从动植物体取下后立即投入某类的化学药液中，借助化学药品的作用使细胞组织的形态结构保存下来不使其改变形态和变质的一种手续。

固定的目的和作用在于：①防止组织自溶和腐败；②使细胞内的各种内含物沉淀保存下来，使其保持了与生活时相近似的形态和结构；③将各种细胞和组织成分的析光率作不同程度的改变，增强组织的析光指数，使各种染色成份更容易辨认；且有的固定剂还有助染的作用，从而使细胞的各部位更易于染色。④固定剂还兼有硬化的作用，使柔软的组织硬化而不易变形，有利于操作。

⒌简述单纯固定液乙醇、醋酸的特点。

①乙醇(alcohol) C2H5OH，通称酒精。特点：杀死快、渗透力强、可使材料变硬；可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白；是还原剂。

②醋酸(acetic acid) CH3COOH，又称乙酸。穿透力极强，有软化作用，能固定核蛋白和胞质。一般可以使细胞膨胀和收缩。

⒍透明常用的透明剂有哪些？它的主要目的是什么？

常用的透明剂有：二甲苯、甲苯、苯、氯仿、香柏油和丁香油。

透明的主要目的：包埋前的材料通过透明剂的透明，使之便于透蜡包埋；染色后的透明，目的是增加透明度，不仅可以便于观察，而且可以溶解封藏剂，使 2 封片均匀紧密。

⒎什么叫石蜡切片法？它有哪些优点和缺点？

石蜡切片法：用石蜡包埋组织块，再进行切片和染色的制片方法。

优点：操作比较容易，能够切成较薄的（2~10um）连续切片。

缺点：脱水与浸蜡后组织易收缩，坚硬易碎和易变脆的材料以及较大的材料块不适合制作石蜡切片。

⒏石蜡切片时石蜡带出现弯曲不直，原因有哪些？如何补救？

原因：蜡块形状不规则、蜡块边缘不平行并与刀刃不平行、刀钝、刀角偏大等。

补救：可修整切蜡块使上下平行且成倒梯形，刀钝需磨或移动刀口至锐利处。

⒐石蜡切片时切片分离，不能连成带状，原因有哪些？如何补救？

原因：可能是室温过低、石蜡过硬、蜡边过小或不平所致。

补救：针对具体原因，室温过低时，提高室温，可在切片机旁加点酒精灯；或加快切片速度；若是蜡块问题，可重新包埋。

⒑石蜡切片时材料发生裂隙破碎或脱落，可能的原因及补救方法有哪些？

原因：组织浸蜡不足、浸蜡温度过高、在透明剂中时间过久已发脆，此时无法补救。

⒕通过石蜡切片实验，你认为关键操作点有哪些？

1、取材与固定；2、冲洗；3、脱水；4、保存；5、染色；6、透明；7、封藏。

⒖试说明光圈的作用。

第一，与快门一起构成曝光组合，控制光线进入相机时的强弱第。二，与焦距和摄距一起控制景深长短。光圈越大，景深越浅。光圈越小，景深越深。第三，控制镜头的相差。

⒗用闪光灯拍摄时，有时会产生“红眼病”，试分析其产生的原因及解决的方法。

原因：造成“红眼病”的原因是由于当人长时间地呆在较黑暗的环境中，瞳孔为适应视觉需要而放大，眼睛充血，这时如果闪光灯的位置与得眼睛一般高低，被摄者又是正面对着镜头，瞳孔与灯处于同一直线，那么，在拍摄时，当闪光灯的闪光透过瞳孔照在眼底时，密密麻麻的微细血管在灯光照映下显现出鲜艳的红色反射回来，在眼睛上形成“红点”的自然现象，就是所谓的“红眼”。

解决方法： 3 ①不要让被摄者长时间地处于深暗的环境中。在室内一般都可以尽量把照明灯都打开，如果环境中确实不存在较明亮的光源，可以想法再拍摄之前的短暂时间让被摄者的眼睛经受一下强光的刺激。

②适当调整闪光灯的照射角度，或高或低，或偏或斜，注意不要让灯与被摄者的双眼处于同一水平线上。

③使用无法改变方向的内置闪光灯时，可以让被摄者的脸部转动一下，不要正面朝着照相机。或者被摄者的眼神呈仰视或俯视状，也能消除“红眼”之弊。

17．说明影响景深的三大因素。

影响景深大小的因素有三点：光圈的大小、摄距的远近及镜头焦距的长短。

其规律如下：（光圈的大小：光圈大、景深小；光圈小，景深大。摄距的远近：摄距远、景深大；摄距近，景深小。镜头的焦距：焦距长、景深小；焦距短，景深大。）

18．怎样运用景深拍摄下列要求的照片？

① 三个层次都清晰：即实----实-----实

使用小光圈，快门时间长，使用摄影架。

② 三个层次为：虚----实----虚

使用大光圈，中长焦镜头，调焦对准中间的物像。

③ 两个层次为：虚----实

使用大光圈，调焦对准后面的物像。

20．物镜有哪些种类？并写出每类物镜金属外壳上的英文标识。

按其消除色差程度不同，物镜可分为以下几种：

①半复消色差物镜(FL)；②平视场物镜(Plan)；③复消色差物镜(APO)；④消色差物镜（ACH）

21.什么叫显微摄影？

利用光学显微摄影装置或数码显微摄影装置来拍摄显微镜或解剖镜视野中所观察到的物像的细微结构真实的记录下来的技术。

23．显微摄影为什么特别强调提高影像的反差？如何提高反差？

因为适当提高反差能提高照片质量。

提高措施：

①标本新鲜、色彩鲜艳； 4 ②光学显微摄影需要较强的光线，但不宜过强；

③根据具体情况适当升降聚光器以调整其位置；

④视场光阑应比取景框稍大些，孔径光阑要调节在物镜数值孔径的60%~80%之间；

⑤根据有色物体对光的吸收特性来选择滤光片。

24.显微摄影时，为什么必须进行曝光补偿？怎样补偿？

原因：样品的明暗、视野中的分布状态以及视野背景的亮度，都会给自动曝光造成影响，形成不准确的曝光。

补偿方法：根据标本和背景情况，通过刻度盘的调节使曝光得以补偿，达到准确曝光。

25.影响光学显微摄影反差的因素有哪些？

标本、照明、聚光器位置、光阑、滤光片、相差、衍射等。

28.显微摄影时应掌握哪些关键步骤？

（1）按自动曝光控制器的“WINDING”卷片钮2-3次，观察胶片的计数器是否转动；（2）选用所使用的感光度；（3）选用所使用胶片的倒易率失效的补偿指数；（4）根据标本的分布密度情况，把“EXPOSUREADJ”曝光补偿刻度盘调整到适当的位置上；（5）对焦与调节孔径光阑，将标本对焦并调节聚光的孔径光阑，以取得合适的反差；（6）对焦转动调焦目镜上的去逛度调节环，使取景框中的双十字线达到最清晰的程度。

29.相差显微镜的原理是什么？

利用光的干涉原理，将位相差转换成振幅差的显微装置。把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。

30.荧光显微镜的原理是什么？

利用光化荧光的原理。是利用一定波长的微发光对样品进行激发，使之产生一定的波长的荧光，从而用于对样品结构或组分进行定性、定位、定量观察检测。

32.显微摄影时怎样进行光路合轴的调整？

拨出目镜，插入中心望远镜，用左手固定其外筒，一边眼看望远镜，一边用右手转动望远镜内筒使其升降，对准焦点后就能看到环状光栏的亮环和相板的黑环。此时可将望远镜固定，微微转动聚光器两侧的调节钮，使两者完全重合。如果亮环和黑环大小不一致，可升降聚光器便之一致，如果升降聚光器仍不能 5 矫正亮环和黑环一致的话，那就是载、盖玻片过厚的缘故。换用不同物镜要同时更换相对应的环状光栏，并重新合轴。合轴完成后，换回目镜。

33/26.显微摄影时如何进行孔径光阑和视场光阑的调节？

①视场光阑的调节使用：

1.视场光阑位于镜座之中，其作用： 一是根据物镜的倍率给予不同直径的光束面积，二是在显微摄影时起着增减影像反差的作用。2.当光扩大到一定程度，照射到标本上的光即会有反射与不规则的散射，造成影像反差的损失。3.当视场光阑收缩到取景框边缘外的时候，摄影图像的反差就会改进。4.如果视场光阑收缩得过于接近取景框，图像的四角将被切去。因此，视场光阑应比取景框稍大些。

②孔径光阑的调节：

安装在聚光镜中的光阑叫孔径光阑。它的作用是使图像的分辨率、反差和焦深处在最佳状态。大多数的标本，如想得到高质量的照片，孔径光阑要调节在物镜数值孔径的60%～80%之间。

35/27.谈谈取得好的显微摄影照片的关键因素是什么？

想要拍摄一张好的显微摄影图片，最主要的还是取决于显微镜以及摄影设备的成像质量，在这些硬件设备一定的条件下，要拍摄一张满意的显微摄影图像，应该注意以下几点：

（1）调整好显微镜（聚光器和光源灯的调中；视场光阑对中调节；正确使用光阑）。（2）调焦：应使用高速预览模式进行调焦。（3）制作清晰的标本片，其中组织切片应厚薄适度，染色片不应有多余的染料。（4）选择性能优良干净的载玻片和盖玻片。（5）使用高性能的物镜（最好用复消色差的平场物镜）和聚光器。（6）调节好孔径光阑。（7）拍摄时应准确地聚焦和选择合理的曝光时间。（8）适当控制背景噪声。（9）合理选择设备参数。（10）正确的冲印方法。

36．什么叫CCD? 数码图片的常用格式有哪些？

CCD(Charge Coupled Device)，即“电荷耦合器件”，是一种感光半导体芯片，用于捕捉图形，广泛运用于扫描仪、复印机以及无胶片相机等设备。

常用格式：TIFF、JPEG、BMP、TGA、RAW。

37．与传统显微摄影相比，数码摄影有哪些优点？

无需胶卷拍摄，不用冲洗和暗房设备，数码摄影是采用CCD进行“感光”，采用存储器储存图像，通过打印机打印出照片。

优点：拍到的画像及时可见；可立即删除掉拍摄失败的照片；画像不会劣化； 6 用电脑等存储、加工简单。

缺点：耗电；比银盐相机画质略差；价格相对较贵；会出现近似色。

38．数码照片的基本调节主要包括哪些？

可以任意改变整体或局部的亮度调节、对比度调节、饱和度调节、色相调节；此外还可以将影像重新分割、重组、修改、更换背景、调整颜色；也可以随意插入各种文稿。

39．生物图像电子素材的获取途径有哪些？电子素材有何基本要求？

获取途径：①数码相机采集图片；②扫描仪采集图片；③软件制作图片；④其他来源，可以通过视频设备捕捉来自摄像机的图像，也可从网站上下载图片作为电子素材。

对电子图片素材的要求：作为图版的电子图像应当符合或满足科技期刊对其格式、图版尺寸和分辨率等方面的要求，方能用于图版的制作。

40.简述生物图版的基本要求。

（1）选择代表性的有突出特征的图片。（2）统一图片的格式和分辨率，一般分辨率不低于300×300像素/平方英寸。（3）注明标尺或放大倍数。（4）按照一定顺序科学排列，并进行编号。（5）将不同的图像组合在一个图版中时，可以采用紧贴、留缝或照片照片间加线条框的方法。（6）添加图版标注，如用箭头或线条指出关键部位以及进行文字注释等。

41.简述生物电子图版的制作过程和方法。

（1）图版文档的建立（确定文档名称、尺寸、分辨率、模式和背景）；（2）选择图片素材；（3）编辑图片素材（统一图像的分辨率、色调、对比度、亮度等，对图片进行适当的修饰）；（4）协调整体布局、编排图版（彩排图版，裁剪图片，编排图版）。

⒒染料有哪两大类？各举2-3例。

①天然染料：地衣红、洋红、苏木精

②人工染料：硷性染料，例：番红、结晶紫、染细胞核；

中性染料，例: 固绿、曙红

⒓什么叫压碎法？

将材料放在载玻片上，盖上盖玻片，然后轻压盖玻片，使材料压散成为适于显微镜观察的薄层。

⒔什么叫解离法？