在HPLC中的应用
降低三氟乙酸用量，改善质谱分析
在反相色谱分离多肽和蛋白质的实验中，使用三氟乙酸 （TFA）
作为离子对试剂是常见的手段。流动相中的三氟乙酸通过与疏水 键合相和
残留的极性表面以多种模式相互作用，来改善峰形、克 服峰展宽和拖尾问
题。三氟乙酸与多肽上的正电荷及极性基团相 结合以减少极性保留，并把
多肽带回到疏水的反相表面。以同样 的方式，三氟乙酸屏蔽了固定相上残
留的极性表面。三氟乙酸的 行为可以理解为它滞留在反相固定相的表面，
同时与多肽及柱床 作用，这已在 Vydac Advances for Spring, 1997中
得到了报导 。
三氟乙酸优于其他离子修饰剂的原因是它容易挥发，可以方 便地从
制备样品中除去。另一方面，三氟乙酸的紫外最大吸收峰 低于200nm，对
多肽在低波长处的检测干扰很小。
改变三氟乙酸的浓度，可以细微地调整多肽在反相色谱上的 选择性。
这一影响对于优化分离条件、增大复杂色谱分析（如多 肽的指纹图谱）的
信息量是非常有益的。
三氟乙酸添加在流动相中的浓度一般为 0.1%，在这个浓度
下，大部分的反相色谱柱都可以产生良好的峰形，当三氟乙酸浓 度大大低
于这个水平时，峰的展宽和拖尾就变得十分明显。
LC/MS液质联用

在过去的十年中，反相色谱与电喷雾质谱联用已成为多肽和 蛋白质
的分子量测定和结构分析的重要工具。然而，含有三氟乙
酸的流动相对离子的产生具有抑制作用，一定程度上降低了液质 联用技术
的灵敏性和分析可靠性。这种抑制作用可以通过柱后加 成技术部分地克服，
但将使色谱系统极大地复杂化。将流动相中 三氟乙酸的浓度降低 10倍
可以消除这种抑制作用，但同时也会
造成色谱分析质量的降低。
Vydac公司开发了三种液质联用专用反相色谱柱，在使用较 低浓度的
三氟乙酸时，仍可以得到对称性好、柱效高的多肽和蛋 白质色谱峰。这些
柱子基于 Vydac公司品质卓越的高纯硅胶
（300A ）及C18和C4键合相，并通过专利的硅胶处理技术大 大减轻了
对TFA的依赖。
二种可选的C18反相填料--多元键合型和单体键合型，具 有细微的
选择性差异。在复杂样品，如蛋白质消化物的分离时， 这种差异有助于优
化分离效果或提供二套特征峰的位置。对于某 些样品，特别是蛋白质消化
物在 Vydac液质联用专用反相色谱柱
上的分离，在流动相中仅添加乙酸而不使用三氟乙酸就能够获得 出色的分
离效果。关于在单体键合 C18液质联用色谱柱上的分离
及以乙酸作为流动相改性剂来分离蛋白质和多肽的更多信息，请 参阅
Vydac公司的2000/2001年度的产品目录的相关内容。