摇广东省自然科学基金资助项目（编号：园远员园缘员员缘），广州市科技计划项目（编号：圆园园远在猿原耘缘园缘员原猿，圆园园怨在员原耘圆猿员）摇▲在读博士研究生摇△通信作者。罗仁，教授，主任医师，博士研究生导师，电话：园圆园原远员远源员远苑员，耘原皂葬蚤造：造怎燥则藻灶源员远苑员岳赠葬澡燥燥援糟燥皂援糟灶；赵晓山，副主任医师，电话：园圆园原远员远源员远苑员，耘原皂葬蚤造：扎澡葬燥曾泽圆园园源岳赠葬澡燥燥援糟燥皂援糟灶疲劳型亚健康小鼠模型的研制刘艳艳员▲，程静茹员，余克强员，谭为员，欧阳明子员，陈淑娟圆，黄建华猿，罗仁员△，赵晓山员△员南方医科大学南方医院中医科（广州缘员园缘员缘）；广州军区广州总医院圆肾内科，猿呼吸内科（广州缘员园园员园）摇摇【摘要】摇目的摇研制疲劳型亚健康小鼠模型。方法摇疲劳型亚健康小鼠模型制备：强迫小鼠水中站立愿澡辕凿，分别观察连续造模缘、怨、员圆、员远凿时小鼠行为学表现，以力竭游泳时间反映其疲劳程度，结合血浆生化、血常规及病理组织学检查等，确定造成疲劳型亚健康的最佳时间。疲劳型亚健康小鼠模型的评价：对上述创建的疲劳型亚健康小鼠模型进行评价，观察模型小鼠的疲劳持续时间。结果摇疲劳型亚健康小鼠模型制备：模型各组游泳时间与对照组比较显著下降（孕越园郾园园园）。与对照组小鼠比较，造模员远凿组月哉晕、粤蕴栽、粤杂栽、栽郧改变明显（孕约园郾园缘）；其余血生化、血常规及病理学检查未见明显异常。疲劳型亚健康小鼠模型的评价：模型小鼠力竭游泳时间明显下降；去除造模因素，休息恢复苑凿后其力竭游泳时间有增长，与对照组比较差异有统计学意义（孕约园郾园缘）；至恢复员源凿后，小鼠力竭游泳时间与对照组比较差异无统计学意义（孕跃园郾园缘）。结论摇采用强迫小鼠水中站立愿澡辕凿，连续怨凿，成功制备疲劳型亚健康小鼠模型。该模型的稳定性、重复性较好，为疲劳型亚健康病理机制的研究及相关药物的筛选提供技术平台。【关键词】摇疲劳型亚健康；动物模型；小鼠悦燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶燥枣枣葬贼蚤早怎藻原贼赠责藻泽怎遭原澡藻葬造贼澡皂燥怎泽藻皂燥凿藻造援摇蕴陨哉再葬灶原赠葬灶☆，悦匀耘晕郧允蚤灶早原则怎，再哉运藻原择蚤葬灶早，栽粤晕宰藻蚤，韵哉再粤晕郧酝蚤灶早原扎蚤，悦匀耘晕杂澡怎原躁怎葬灶，匀哉粤晕郧允蚤葬灶原澡怎葬，蕴哉韵砸藻灶，在匀粤韵载蚤葬燥原泽澡葬灶援☆阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣栽则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造悦澡蚤灶藻泽藻酝藻凿蚤糟蚤灶藻，晕葬灶枣葬灶早匀燥泽责蚤贼葬造，杂燥怎贼澡藻则灶酝藻凿蚤糟葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠，郧怎葬灶早扎澡燥怎缘员园缘员缘，悦澡蚤灶葬悦燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早葬怎贼澡燥则：蕴哉韵砸藻灶，栽藻造：园园愿远原圆园原远员远源员远苑员，耘原皂葬蚤造：造怎燥则藻灶源员远苑员岳赠葬澡燥燥援糟燥皂援糟灶；在匀粤韵载蚤葬燥泽澡葬灶，栽藻造：园园愿远原圆园原远员远源员远苑员，耘原皂葬蚤造：扎澡葬燥曾泽圆园园源岳赠葬澡燥燥援糟燥皂援糟灶援摇摇【粤遭泽贼则葬糟贼】摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻摇栽燥藻泽贼葬遭造蚤泽澡葬灶凿藻增葬造怎葬贼藻贼澡藻枣葬贼蚤早怎藻原贼赠责藻泽怎遭原澡藻葬造贼澡皂燥怎泽藻皂燥凿藻造援酝藻贼澡燥凿泽摇耘曾责藻则蚤鄄皂藻灶贼员：酝蚤糟藻蚤灶皂燥凿藻造早则燥怎责泽憎藻则藻枣燥则糟藻凿贼燥泽贼葬灶凿蚤灶憎葬贼藻则愿澡燥怎则泽责藻则凿葬赠藻葬糟澡枣燥则缘，怨，员圆葬灶凿员远凿葬赠泽援栽澡藻责藻则枣燥则皂鄄葬灶糟藻泽燥枣皂蚤糟藻遭藻澡葬增蚤燥则泽，凿藻早则藻藻燥枣枣葬贼蚤早怎藻，责葬贼澡燥造燥早蚤糟葬造泽蚤早灶泽蚤灶贼蚤泽泽怎藻，遭造燥燥凿遭蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠则藻泽怎造贼泽葬灶凿燥贼澡藻则蚤灶凿蚤糟葬贼燥则泽憎藻则藻葬灶葬造赠扎藻凿贼燥凿藻贼藻则皂蚤灶藻贼澡藻燥责贼蚤皂葬造贼蚤皂藻枣燥则贼澡蚤泽枣葬贼蚤早怎藻原贼赠责藻泽怎遭原澡藻葬造贼澡皂燥凿藻造援耘曾责藻则蚤皂藻灶贼圆：耘增葬造怎葬贼蚤燥灶燥枣贼澡藻皂燥凿藻造憎葬泽责藻则枣燥则皂藻凿憎蚤贼澡贼澡藻贼藻泽贼燥枣苑豫憎藻蚤早澡贼原造燥葬凿藻凿枣燥则糟藻凿泽憎蚤皂援砸藻泽怎造贼泽摇耘曾责藻则蚤皂藻灶贼员：陨灶糟燥皂责葬则蚤泽燥灶憎蚤贼澡糟燥灶贼则燥造早则燥怎责，贼澡藻藻曾澡葬怎泽贼蚤增藻泽憎蚤皂皂蚤灶早贼蚤皂藻憎葬泽泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠泽澡燥则贼藻灶藻凿蚤灶葬造造皂燥凿藻造早则燥怎责泽（孕越园郾园园园）援杂蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼葬造贼藻则葬贼蚤燥灶泽燥枣月哉晕，粤蕴栽，粤杂栽葬灶凿栽郧憎藻则藻燥灶造赠燥遭泽藻则增藻凿蚤灶皂燥凿藻造员远凿早则燥怎责（孕约园郾园缘），灶燥泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼糟澡葬灶早藻憎葬泽则藻增藻葬造藻凿蚤灶贼澡藻燥贼澡藻则皂燥凿藻造早则燥怎责泽援耘曾责藻则蚤皂藻灶贼圆：栽澡藻藻曾澡葬怎泽贼蚤增藻泽憎蚤皂皂蚤灶早贼蚤皂藻憎葬泽泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠则藻凿怎糟藻凿蚤灶皂燥凿藻造皂蚤糟藻援粤造贼澡燥怎早澡贼澡藻枣葬贼蚤早怎藻凿藻早则藻藻葬遭葬贼藻凿葬枣贼藻则葬则藻泽贼燥枣苑凿葬赠泽枣则藻藻燥枣皂燥凿藻造蚤灶早枣葬糟贼燥则泽，泽憎蚤皂皂蚤灶早贼蚤皂藻憎葬泽泽贼蚤造造泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠泽澡燥则贼藻则贼澡葬灶灶燥则鄄皂葬造造藻增藻造（孕约园郾园缘）援匀燥憎藻增藻则，贼澡藻泽憎蚤皂皂蚤灶早贼蚤皂藻遭藻糟葬皂藻灶燥泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻糟燥皂责葬则藻凿憎蚤贼澡贼澡葬贼燥枣灶燥则皂葬造糟燥灶贼则燥造皂蚤糟藻憎蚤贼澡葬则藻糟燥增藻则赠燥枣员源凿葬赠泽（孕跃园郾园缘）援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶摇云燥则糟蚤灶早皂蚤糟藻贼燥泽贼葬灶凿蚤灶憎葬贼藻则愿澡燥怎则泽责藻则凿葬赠枣燥则怨凿葬赠泽糟葬灶泽怎糟糟藻泽泽枣怎造造赠藻泽贼葬遭造蚤泽澡贼澡蚤泽皂燥怎泽藻皂燥凿藻造燥枣枣葬贼蚤早怎藻原贼赠责藻泽怎遭原澡藻葬造贼澡，憎蚤贼澡泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼泽贼葬遭蚤造蚤贼赠葬灶凿则藻责则燥凿怎糟蚤遭蚤造蚤贼赠，责则燥增蚤鄄凿蚤灶早枣燥怎灶凿葬贼蚤燥灶枣燥则枣怎则贼澡藻则泽贼怎凿赠燥枣枣葬贼蚤早怎藻原贼赠责藻泽怎遭原澡藻葬造贼澡援【运藻赠憎燥则凿泽】摇枣葬贼蚤早怎藻原贼赠责藻泽怎遭原澡藻葬造贼澡；皂蚤糟藻；葬灶蚤皂葬造皂燥凿藻造摇摇亚健康是现阶段我国公共卫生的重要问题之一。流行病学调查［员原圆］显示，疲劳是亚健康最常见的临床表现之一，疲劳型亚健康是亚健康的主要类型［猿］。疲劳型亚健康是以长时间疲劳（即亚病理性疲劳或亚临床性疲劳）为中心表现的症状群，包括疲倦乏力、周身不适、失眠多梦等，但是上述表现不是由疾病引起来的。目前认为其发生与心理压力大、超负荷工作、生活方式不良等因素有关［源原缘］，但迄今尚未见有理想的疲劳型亚健康动物模型，这为深入研究带来困难。圆园园怨年员月至圆园员园年员月本研究在既往研究［远原苑］的基础上，拟采用强迫小鼠水中站立一定时间的造模方式建立动物模型并进行评价。员摇材料与方法员援员摇主要仪器与试剂摇小鼠饲养盒圆怨糟皂伊员愿糟皂伊员缘糟皂（苏州新区枫桥实验动物笼具厂）；恒温游泳箱（直径苑缘糟皂，高员园园糟皂）；韵造赠皂责葬泽粤哉愿园园全自动生化分析仪；耘责责藻灶凿燥则枣微量移液器；自制负重用铅坠、电子天平、秒表、温度计。甲醛（分析纯），汕头市光华化学厂；无水乙醇（分析纯），汕头市光华化学厂。员援圆摇实验动物与条件摇杂孕云级健康雄性运酝小鼠圆远园只（圆园园只用于实验员，远园只用于实验圆），体重员愿耀圆圆早，由广东省医学动物实验中心提供，动物质量许可·员圆·广东医学摇圆园员圆年员月第猿猿卷第员期摇郧怎葬灶早凿燥灶早酝藻凿蚤糟葬造允燥怎则灶葬造摇允葬灶援圆园员圆，灾燥造援猿猿，晕燥援员

万方数据证号：杂悦载运（粤）圆园园愿原园园园圆。实验前小鼠适应性饲养员周，室温圆圆耀圆远益，相对湿度源园豫耀远园豫，明暗交替员圆澡。所有小鼠分盒饲养，缘只辕盒，自由饮水，饲普通饲料。实验开始前小鼠适应性游泳锻炼源凿，缘皂蚤灶辕凿，水深猿园糟皂，水温圆缘益。动物室保持安静，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。员援猿摇实验方法员援猿援员摇疲劳型亚健康小鼠模型制备（实验员）摇实验开始前员凿，对小鼠进行力竭游泳（负苑豫体重），记录游泳时间。实验前员凿禁食，称重，剔除力竭游泳时间及体重差异较大的小鼠，筛选出运酝小鼠员缘园只，随机分为员缘组，其中用于力竭游泳测试的有员园组：包括对照组及模型园、缘、怨、员圆、员远凿不同时间各缘组，另外用于测试血生化、血常规及病理学检查的有缘组：包括对照组、模型缘、怨、员圆、员远凿组。每组员园只，缘只辕盒。参照文献［愿］方法，结合预实验结果，对模型各组小鼠采用强迫水中站立愿澡辕凿的方式造模。具体方法：每天上午怨：园园，将模型各组小鼠放入水深为园郾愿糟皂的小鼠饲养盒内造模，当天下午员苑：园园，将其从水盒中拿出，正常饲养；对照组不作任何处理，按常规饲养方法饲养。员援猿援圆摇疲劳型亚健康小鼠模型的评价（实验圆）摇实验分组前处理同实验员。剔除力竭游泳时间及体重差异较大的小鼠，筛选出运酝小鼠源园只，随机分为源组：对照组、模型组及模型恢复苑、员源凿组。模型各组按预实验及实验员的结果，强迫小鼠水中站立愿澡辕凿，连续怨凿，制备疲劳型亚健康模型。造模结束后，对模型组及对照组进行力竭游泳（负苑豫体重），测定其疲劳程度。模型恢复各组造模结束后，中止造模因素，分别于造模结束后苑、员源凿进行负重力竭游泳，观察其恢复情况。员援源摇观测指标员援源援员摇小鼠行为学观察摇主要观察实验过程中小鼠的精神状态、活动情况、饮食、二便以及鼻唇、耳、爪等色泽等外观行为变化。员援源援圆摇疲劳程度测定摇测定力竭游泳时间衡量小鼠疲劳程度。用苑豫自身重量的铅坠系于小鼠尾部后，将负重小鼠放入水温圆缘益的水桶中进行力竭游泳测试；力竭游泳标准为小鼠鼻尖沉入水下员园泽［怨］。员援源援猿摇实验室检查摇采用全自动生化分析仪检测小鼠血浆丙氨酸氨基转移酶（粤蕴栽）、门冬氨酸氨基转移酶（粤杂栽）、总蛋白（栽孕）、白蛋白（粤造遭）、球蛋白（郧）、白辕球比值（粤辕郧）、总胆红素（栽月陨蕴）、尿素氮（月哉晕）、血清肌酐（杂糟则）、尿酸（哉粤）、乳酸脱氢酶（蕴阅匀）、α原羟丁酸脱氢酶（匀月阅匀）、肌酸激酶（悦运）、三酰甘油（栽郧）、总胆固醇（栽糟澡）、血总胆汁酸（栽月粤）、钾（运）、钠（晕葬）、氯（悦造）、钙（悦葬）等。血常规分析仪检测血液常规项目。员援源援源摇病理学检查摇实验结束后取实验各组小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、肠等器官组织，固定于源豫多聚甲醛缓冲液中。常规石蜡包埋、切片，匀耘染色进行病理学检查。员援缘摇标本采集摇分别于造模园、缘、怨、员圆及员远凿后，对实验各组相应时间点生化组小鼠禁食，称重，眼眶取血，分别装入生化及血常规管。室温放置猿园皂蚤灶后，员缘园园则辕皂蚤灶离心员园皂蚤灶，上层血清移入耘孕管中，放入原圆园益中保存待测。员援远摇统计学方法摇采用杂孕杂杂员猿郾园统计软件，行析因设计方差分析和单因素方差分析。圆摇结果圆援员摇疲劳型亚健康小鼠模型的制备圆援员援员摇小鼠行为学观察摇实验猿凿，造模各组小鼠未见明显异常，仅尾部皮毛有轻度浸湿。实验缘凿，小鼠烦躁，易激惹，喜撕咬，体重下降尚不明显，尾部浸湿面积增加。实验怨凿，小鼠烦躁消失，精神倦怠，全身皮毛有浸湿现象，浸湿面积员辕猿耀圆辕猿，皮毛灰暗欠光泽，逃避反应降低。实验员圆凿时，精神不振，食量减少，体重下降，大部分小鼠全身浸湿；实验员远凿精神倦怠明显，活动减少，全身皮毛浸湿，欠光泽。对照组小鼠行为表现正常。圆援员援圆摇疲劳程度变化摇模型组小鼠力竭游泳时间随造模时间延长而明显减少，与对照组比较差异有统计学意义（孕约园郾园员），各模型小鼠明显疲劳。对照组各时间点力竭游泳时间比较差异无统计学意义（云越园郾圆园怨，孕越园郾怨圆猿）。见表员。表员摇各组力竭游泳时间比值随着时间延长对照组和模型组的比较珋曾依泽项目园凿缘凿怨凿员圆凿员远凿合计云值孕值对照组员援园园园依园援员远怨员援园圆愿依园援员愿猿员援园员员依园援员缘愿员援园源远依园援员远愿园援怨愿苑依园援员圆源员援园员缘依园援员缘远园援圆园怨园援怨圆猿模型组员援园园园依园援员猿愿▲园援缘怨源依园援员圆圆△▲园援源苑圆依园援员愿源△▲园援猿缘园依园援员员园△▲园援圆苑圆依园援园愿圆△园援缘猿愿依园援圆愿愿源苑援圆圆园园援园园园合计员援园园园依园援员缘园园援愿员员依园援圆远愿园援苑源圆依园援猿圆猿园援远怨愿依园援猿愿猿园援远圆怨依园援猿愿员园援苑苑远依园援猿猿圆员愿援缘猿愿园援园园园云值园援园园园原远援圆怨猿原苑援园圆圆原员园援怨怨圆原员缘援员苑远圆远猿援园远猿云越员怨援缘远圆孕值员援园园园园援园园园园援园园园园援园园园园援园园园园援园园园孕越园援园园园摇主效应，交互效应；△与园凿比较孕约园郾园员；▲与员远凿比较孕约园郾园员圆援员援猿摇血生化结果摇模型员远凿组月哉晕、粤蕴栽、粤杂栽水平升高，栽郧降低，与对照组比较差异有统计学意义（孕约园郾园缘）；模型员圆、怨、缘凿组生化指标未见明显变化，与对照组比较差异无统计学意义（孕跃园郾园缘），见表圆。圆援员援源摇血常规及病理组织切片结果摇模型组小鼠血液中白细胞总数（宰月悦）、淋巴细胞总数（蕴再）、中性粒细胞总数（郧砸）、单核细胞总数（酝韵）、红细胞总数（砸月悦）、血小板总数（孕造贼）、血红蛋白（匀遭）、红细胞平·圆圆·广东医学摇圆园员圆年员月第猿猿卷第员期摇郧怎葬灶早凿燥灶早酝藻凿蚤糟葬造允燥怎则灶葬造摇允葬灶援圆园员圆，灾燥造援猿猿，晕燥援员

万方数据