江西农业学报２０１４，２６（３）：１６～１７ Ａｃｔａ Ａｇｒｉｃｕｈｕｒａｅ Ｊｉａｎｇｘｉ
宁玉草莓茎尖组培快繁技术研究
夏瑾，赵密珍，孟宪凤
（江苏省农业科学院园艺研究所，江苏南京２１００１４）
摘要：以宁玉草莓匍匐茎为外植体，进行消毒灭菌、茎尖分化、继代增殖和生根培养基筛选研究，结果表明：最佳消毒 方法为７５％乙醇４０ Ｓ＋０．１％升汞６—８ ｍｉｎ；草莓茎尖分化培养基：ＭＳ＋６一ＢＡ ０．５ ｍｓ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ ｍｓ／Ｌ；继代增殖培养 基：ＭＳ＋６一ＢＡ ０．５ ｍｓ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ ｍｓ／Ｌ，其增殖系数为９；生根培养基：１／２ＭＳ＋ＮＡＡ ０．０５ ｍｓ／Ｌ，生根率可达９６．６％。 关键词：宁玉草莓；组织培养；快繁技术 中图分类号：￥６６８．４文献标志码：Ａ文章编号：１００１—８５８１（２０１４）０３—００１６—０２
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｓｔｅｍ－—ｔｉｐ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｒａｐｉｄ Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｏｆ Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ“Ｎｉｎｇｙｕ’’
ＸＩＡ Ｊｉｎ，ＺＨＡＯ Ｍｉ—ｚｈｅｎ，ＭＥＮＧ Ｘｉａｎ—ｆｅｎｇ （Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｊｉａｎｇｓｕ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００１４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｓｔｏｌｏｎｓ ｏｆ ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ ｖａｒｉｅｔｙ“Ｎｉｎｇｙｕ”ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ．Ａｆｔｅｒ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ。ｗｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｔｈｅ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉａ ｆｏｒ ｓｔｅｍ—ｔｉｐ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ｓｕｂｃｕｈｕｒａｌ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｏｏｔｉｎｇ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｕｓｉｎｇ ７５％ｅｔｈａｎｏｌ ｆｏｒ ４０ Ｓ ｐｌｕｓ ０．１％ＨｇＣ１，ｆｏｒ ６～８ ｍｉｎ：出ｅ ｂｅｓｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ ＭＳ＋０．５ ｍｇ／ Ｌ ６一ＢＡ＋Ｏ．１ ｍｓ／Ｌ ＮＡＡ；ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｓｕｂｃｕｌｔｕｒａｌ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｗａｓ ＭＳ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ６一ＢＡ＋０．１ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ，ａｎｄ ｉｔｓ ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｗａｓ ９；ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｒｏｏｔｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ １／２ＭＳ＋０．０５ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ．ａｎｄ ｔｈｅ ｒｏｏｔｉｎｇ ｒａｔｅ ｒｅａｃｈｅｄ ９６．６％． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：“Ｎｉｎｇｙｕ”ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ；Ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ；Ｒａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ
近年来，我国草莓栽培面积逐年扩大，效益显著，
在生产中草莓育苗通常采用匍匐茎无性繁殖，该方法 繁殖系数低、速度慢，产量低，已不能满足规模化生产
的需求。采用组织培养可以实现快繁，满足规模化生
产的需求。
宁玉是江苏省农业科学院园艺研究所２００５年以 抗白粉病、耐低温能力比丰香强，且果实品质优的幸香
为母本，以优良草莓品种章姬为父本杂交获得的草莓 新品种…，该品种株型适中，果实成熟早；果形美观，风
味香甜，产量高，较耐贮运，商品性好；植株抗病虫能力 和适应性强，已在江苏、安徽、浙江、上海、湖南、江西、
贵州、福建、山东、黑龙江等省区栽培应用。目前，有关 组培快繁技术研究已有很多报道 ，但尚未建立宁
玉草莓种苗的快繁技术体系，这势必会影响其推广。 因此，本试验通过对宁玉草莓茎尖灭菌方式和茎尖分
化、继代增殖、生根等培养基等进行筛选研究，建立宁
玉草莓茎尖组培快繁技术体系，为其进一步研究和推
广应用奠定基础。
１材料与方法
１．１材料匍匐茎茎尖采白江苏省农业科学院园艺 研究所宁玉草莓大棚生产苗，采集时间为４月份。 １．２茎尖消毒方法从植株上剪取新长出来的匍匐
茎，带回实验室进行消毒处理，取１．５ ｃｍ左右的茎尖
用流水冲洗１ ｈ左右，先用７５％乙醇消毒４０ Ｓ，接着无
菌水冲洗２遍，然后按照以下处理分别进行消毒：处理
１：７５％乙醇４０ Ｓ＋０．１％升汞６ ｍｉｎ；处理２：７５％乙醇 ４０ Ｓ＋０．１％升汞８ ｍｉｎ；处理３：７５％乙醇４０ ｓ＋０．１％
升汞１０ ｍｉｎ；处理４：７５％乙醇４０ Ｓ＋１０％次氯酸钠１０
ｍｉｎ；处理５：７５％乙醇４０ Ｓ＋１０％次氯酸钠１５ ｍｉｎ；处
理６：７５％乙醇４０ Ｓ＋１０％次氯酸钠２０ ｍｉｎ；处理７：
７５％乙醇４０ Ｓ＋１０％双氧水５ ｍｉｎ；处理８：７５％乙醇４０
Ｓ＋１０％双氧水１０ ｍｉｎ；处理９：７５％乙醇４０ ｓ＋１０％双
氧水１５ ｍｉｎ，最后，每个处理消毒后用无菌水冲洗４～５ 遍，用灭过菌的镊子把茎尖接种到初代培养基里，每个
处理接种２１个茎尖，重复３次。接种１０ ｄ后调查茎尖
污染率和存活率，筛选出最适消毒方式。
１．３茎尖分化培养基剥取灭菌后宁玉匍匐茎茎尖，
切取茎尖生长点０．３～０．５ ｍｍ，接种到添加不同浓度
的６一ＢＡ和ＮＡＡ的ＭＳ基本培养基中，共９个处理：处
理１：６一ＢＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０ ｍｇ／Ｌ；处理２：６一ＢＡ
０．２ ｍｓ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ；处理３：６一ＢＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ＋
ＮＡＡ ０．２ ｍｓ／Ｌ；处理４：６一ＢＡ ０．５ ｍｓ／Ｌ＋ＮＡＡ ０ ｍｇ／
收稿日期：２０１３—０９—２６ 基金项目：农业科技成果转化资金项目（２０１２ＧＢ２Ｃ１００１５９）。 作者简介：夏瑾（１９８８一），女，江苏姜堰人，主要从事草莓组培及快繁研究。
３期 夏瑾等：宁玉草莓茎尖组培快繁技术研究 １７
Ｌ；处理５：６一ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｉ．＋ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ；处理６：６
一ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｉ￣＋ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ；处理７：６一ＢＡ １．０
ｍｇ／Ｉ￣＋ＮＡＡ ０ ｍｅ／１．；处理８：６一ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｉ．＋ＮＡＡ
０．１ ｍｇ／Ｌ；处理９：６一ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｉ￣＋ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｉ￣，
再加入蔗糖３０ ｇ／Ｌ、琼脂６．５ ｇ／Ｔ，，ｐＨ值为６．０，每个处
理接种茎尖２５个，２０ ｄ后统计茎尖萌芽率和苗的生长
状况。
１．４继代增殖培养基以ＭＳ为基本培养基，加不同
浓度的６一ＢＡ和ＮＡＡ，共９个处理：处理１：６一ＢＡ ０．２
ｍｇ／Ｉ￣＋ＮＡＡ ０ ｍｇ／Ｉ￣；处理２：６一ＢＡ ０．２ ｍｇ／Ｉ￣＋ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｉ￣；处理３：６一ＢＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ；
处理４：６一ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０ ｍｇ／Ｌ；处理５：６一ＢＡ
０．５ ｍｇ／Ｉ￣＋ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ；处理６：６一ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｉ￣＋
ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｉ￣；处理７：６一ＢＡ １．０ ｍｇ／ｒ，＋ＮＡＡ ０ ｍｇ／
Ｌ；处理８：６一ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ；处理９：６
一ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｉ￣＋ＮＡＡ０．２ ｍｇ／Ｌ。初代１个月后，选取
长势一致的健壮宁玉草莓组培苗，接入以上ｐＨ值为
６．０的继代增殖培养基中，每２５ ｄ继代１次。
１．５生根培养基宁玉草莓苗快繁到９月底时，选取
长势一致的健壮宁玉草莓组培苗，接人生根培养基中，
共４个处理：处理１：１／２ＭＳ；处理２：１／４ＭＳ；处理３：１／
２ＭＳ＋ＮＡＡ ０．０２ ｍｇ／Ｌ；处理４：１／２ＭＳ＋ＮＡＡ ０．０５ ｍｇ／
Ｌ，每个处理转接６瓶，每瓶５株，培养２５ ｄ后调查草莓
苗的生根率和平均生根数等。
１．６炼苗移栽打开生根试管苗保鲜膜，在室内放上
１～２ ｄ，然后取出洗净培养基，移栽到配制好的基质里
（泥炭：珍珠岩：蛭石＝４：１：１），保持湿度９０％左右，适
当遮阴，保持通风，增加光照，３周后调查出苗的成
活率。
２结果与分析
２．１不同消毒剂的消毒效果选用升汞、次氯酸钠、 双氧水３种表面消毒剂分别对草莓茎尖进行消毒，结
果表明，升汞消毒６和８ ｒａｉｎ的效果明显比其他２种消
毒剂好；升汞１０ ｒａｉｎ和次氯酸钠１０、１５和２０ ｒａｉｎ对外
植体的伤害比较大，褐化多，双氧水消毒剂对外植体消
毒不彻底，污染比较严重（表１）。
表１ 不同消毒剂对草莓茎尖的消毒效果 个
２．２不同激素６一ＢＡ和ＮＡＡ浓度配比对茎尖分化 的影响由表２可知，在添加６一ＢＡ的基本培养基中，
ＮＡＡ加与不加都可以出芽，在较高６一ＢＡ浓度（０．５—
１．０ ｍｇ／Ｌ）的情况下，ＮＡＡ浓度为０．１ ｍｇ／Ｌ的萌芽率
高于０．２ ｍｇ／Ｌ，高浓度ＮＡＡ不利于宁玉茎尖的分化； 培养基中加６一ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｉ￣＋ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ，茎尖萌
芽率最高为９６％，其次为６一ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｉ．培养基，萌芽率达９２％。从苗萌芽后的生长情况
来看，６一ＢＡ加到１．０ ｍｇ／Ｌ时有玻璃化苗，叶片畸形。
因此，认为６一ＢＡ０．５ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ培养基为
宁玉的最适分化培养基。
表２不同激素６一ＢＡ和ＮＡＡ浓度配比
对茎尖分化的影响
２．３不同激素６一ＢＡ和ＮＡＡ浓度配比对继代增殖
的影响由表３可知，培养基中６一ＢＡ浓度为０．２ ｍｇ／
Ｌ的增殖系数为３．５～４．０，６一ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ的增殖系
数为７．５—９．０，６一ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ的增殖系数为８．０～
８．５，出现少量玻璃化苗；６一ＢＡ有利于芽的增殖，但高
浓度６一ＢＡ会导致玻璃化苗的出现；培养基中有无
ＮＡＡ对芽增殖影响不大，但ＮＡＡ可促进生根。培养基
ＭＳ＋６一ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ为最适继代培
养基。 表３不同激素浓度配比对继代增殖的影响
２．４不同培养基对草莓生根的培养 选取长势一致
的健壮宁玉草莓组培苗，接种到生根培养基中进行对
比，２５ ｄ后调查生根率，结果表明，这４个处理的生根
率都达到９０％以上，其中以１／２ＭＳ＋ＮＡＡ ０．０５ ｍｇ／Ｌ
为最好，生根率达到９６．６％，而且根粗壮，单株平均生
根６．９条（表４）。 （下转第２１页）