安徽农业科学,Journal ofAnhui A一.蹦.2009,37(10:4493,4498责任编辑金琼琼责任校对夏蓉 黄芪多糖的提取工艺及含量测定研究

李万才 (滨州职业学院生物工程系。山东滨州256603

摘要[目的]研究黄芪根中多糖的含量,[方法]采用分光光度法测定膜英黄芪中多糖的含量,以葡萄糖为对照品.以苯酚一浓硫酸为 显色荆.在波长486m处测定样品溶液的吸光度。【结果]标准曲线为A=51.654C+0.0372.r=0.999

8,脚。为1.28%.BSD2为 1.50%。[结论]该方法操作简单,灵敏度高。

关键词黄芪根;多糖含量;分光光度法

中图分类号s567.23+9文献标识码A 文章编号0517—661l(200910—04493—01

Research on Extraction Process and Content Determination of Astragalus

Polysaccharides

LI Wan-cai(Department of Biological Engineering,Binzhou Vocational

College,Binzhou,Shandong 256603

Abstract Objective]111P study re.arches the poly鲴echaride content in the

Astragalus root.f Method Using spectrophotometry determines polysaceharide content in

Astragalus membranaceus.taking slucose酗compari.,“m,taking phenol・concentrated

sulfuric acid黯developer and determining the absorbency of sample∞lution

underA=486nln.『Resultl 111P standard curve is A=51.654C+0.0372。r=0.9998. 冗sD.js 1.28%and RSD,is 1.5%(n=5.I Conclusion 111is method is simple,sensitive and

accurate.

Key words Astragalus root:Polysaccharides content;Spectrophotometry

黄芪(Radix Astragalus是豆科植物,膜荚黄芪[Astraga— lus

membranaceus(Fisch.Bge.]的干燥根含有多糖、木质素 类、黄酮类化合物、香豆苯

醚类、生物碱类、皂苷类、甾体类、 氨基酸、微量元素等众多的生物活性物质¨。J,具有补气同 表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌之功能博J。膜荚黄芪多糖不仅 是机体的重要组成部分。还具有提高机体免疫能力、抗菌、抗 病毒、抗衰老、抗肿瘤、抗突变、降血脂、降血糖、防辐射以及 改善动物生产性能等功能,同时由于它自身对细胞毒性极 小,对正常细胞影响很小,因此将多糖作为药物对于治疗多 种免疫缺损疾病和自身免疫疾病有显著的效果。笔者采用 可见分光光度法对膜荚黄芪根中多糖的含量进行了测定,旨 在为膜荚黄芪的产品开发提供理论依据。

l材料与方法

1.1样品来源膜荚黄芪于lO月份采自山东,采后洗净、 晾干,60℃烘干,粉碎后过60目筛备用。

1.2仪器与试剂SX722分光光度计(上海精密仪器仪表 有限公司,8453E型紫外分光光度仪(美国Agilent,超声仪 (SK8210HP,水浴锅,酒精计,漏斗,分液漏斗。无水葡萄 糖,苯酚分析纯,浓硫酸,95%乙醇,氯仿,正丁醇,活性碳。 1.3多糖的提取与精制一一训 称取膜英黄芪根粉100g,加 水适量,超声提取3次,30nlin/次,过滤,合并滤液,浓缩,加 95%乙醇至含醇量为80%,静置过夜(4℃,过滤,分离出沉 淀,加适量水溶解,加95%乙醇至含醇量为80%,再静置过 夜(4℃,过滤。分离出沉淀,加水溶解,除蛋白(氯仿:正丁 醇=4:l,共除20次后,加活性炭脱色,抽滤,加95%乙醇至 含醇量为80%,静置过夜(4℃,过滤,分离出沉淀,冷冻干 燥得多糖0.5051g,密封备用。

1.4溶液的制备

1.4.1葡萄糖标准溶液。精密称取105℃干燥至恒重的葡 萄糖0.1g,置100rng容量瓶中,加蒸馏水至刻度,再精密吸 取10IIll于另一容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀备用。得O.1

作者简介李万才(1966一,男,山东滨州人.副教授,从事生物技术 研究。

收稿日期2009-01-04 ms/m1的葡萄糖标准溶液。

1.4.2苯酚溶液。称取苯酚100g,加0.10g锌片、0.05g NaHCO,。蒸馏,收集182℃馏分,称取该馏分5g,加蒸馏水 95Ⅱd。置棕色瓶中备用,得浓度为5%的苯酚溶液。

1.4.3膜英黄苠多糖溶液。精密称取干燥至恒重的膜荚黄 芪多糖0.1g,置100rng容量瓶中,加蒸馏水至刻度,再精密 吸取10nd于另一容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀备用,得 0.1mg/ml的膜荚黄芪多糖溶液。

1.5最大吸收波长的选择分别配制0.1r-,罾/IIlr的葡萄 糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、醛糖溶液,再分别精密吸取 l ml于具塞试管中。加苯酚试液l IIlI,摇匀,迅速加浓硫酸 5rrII,振摇2min后,于沸水浴中旋转加热15min,取出置冷 水中冷却至室温。以苯酚一浓硫酸溶液为空白,用紫外分光 光度仪在波长400~800Bin范围内,扫描光谱图,得上述糖 溶液的最大吸收波长分别为486,488,479,488、479nnl。以同 样的方法处理膜荚黄蓖多糖样品溶液,在波长486nnl处有 最大吸收。

2结果与分析

2.1葡萄糖标准曲线的绘制分别精密吸取O.1ms/m1的 标准溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0IIll于具塞试管中,再分别 加蒸馏水1.0、0.8、0.6,0.4、0.2,0ml,并给试管编号。然后 分别加苯酚试液l rnl,摇匀,迅速加浓硫酸5nll。振摇2min 后,于沸水浴中旋转加热15min,取出置冷水中冷却至室温, 以苯酚一浓硫酸溶液为空白,于波长486舳处测吸光度,得 回门方程A=51.654C+o.0372,r=o.9998(,l=5,说明线 性关系较好。

2.2换算因子(,的测定精密称取已干燥至恒重的膜荚 黄芪多糖4.048mg于100ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻 度,摇匀,得多糖供试品溶液。精密吸取该溶液2lIll,按 “2.1”方法,测定波长486illn处的吸光度为2.9322。由回归方 程计算供试品中葡萄糖的含量为0.056,W,/wa,按下式计算厶 {=w/c

式中,1,0为供试液中膜荚黄芪多糖的量(4.048rag,由公式 (下转第4498页

安徽农业科学

2009生

往受到限制。而新的生物指纹图谱是能够鉴别生物个体之 间差异的电泳图谱,多态性丰富且具有高度的个体特异性和 稳定性,非常适合进行品种的鉴定工作旧“。

传统的鉴定手段更多是从生物的形态、结构上进行的鉴 别,但生物的外形、结构在环境因素的影响下会发生一定程 度的改变,例如同种植物在不同的气候、土壤、水分、日照等 条件下,其形态、组织细胞都会有差异,因此有可能会造成错 误的鉴别结果,特别是疑难种、易混种,用传统方法较难鉴 别。而DNA分子作为遗传信息的直接载体,不受外界因素、 生物体发育阶段以及器官组织差异的影响,故以DNA分子 特征进行物种鉴别准确可靠Ⅲ】。RAPD技术正是依托DNA 分子特征进行物种鉴别的、新兴、科学的鉴别方法,该技术在 传统的鉴别技术基础上提升了一大步,对宁夏枸杞的鉴别起 到重要作用。 3结语

枸杞鉴别作为与人类的现实健康生活息息相关的一个 内容,在近年来的科研中日益提上日程,从传统鉴别手段的 日臻完善,到新兴鉴别手法的蓬勃发展,无论是传统的、抑或 是新兴的,其在现实的枸杞鉴别工作中都在继续发挥着各自 的作用。传统鉴别方法的优势是注重研究者的个人素质和 专业技能,而新兴的高科技鉴别手法无疑注重研究者科学的 手段和对精密的实验器材操作。基于不同的研究者素质,以 及枸杞鉴别方式的灵活和多样性,传统和新兴的鉴别方式都 以其不同的功能在日益发展的枸杞鉴别工作中发挥着各自 应有的作用。在期待新的鉴别方式不断更新的同时,传统的 鉴别方式同样是不可或缺的。因此,先进的分子生物学技术 与传统枸杞鉴别手段的有效结合,是宁夏枸杞鉴别方式的重 要途径Ⅲ】,两者的结合可在各自原有鉴别的基础上起到锦 上添花的作用。 参考文献

[1】周兴梅.枸杞子掺杂物的鉴别[J].时珍国医国药,2002.13(I:25.

[2]严宜昌,傅杰,陈平,等.宁夏枸杞产区调研及商品lillJ[J].湖北中医

+一+一+一+・+*—卜

(上接第4493页 得f:3.614(n=3。

2.3样品中多糖含量的测定精密称取样品l g于100

ml

杂志.2001。23(12:45.

[3]林秀平.枸杞子与几种混伪品的鉴别[J].湖北预防隈学杂志,2002,13

(6:40.

[4]阴健,郭力弓.中药现代研究与临床应用[M].北京:学苑出版社.1995. [5]张雪琴,魏加印.枸杞子鉴别[J].时珍国医国药,2000,11(1:52.

[6]张秀明,侯惠婵.四种枸杞子的鉴别及含量测定[J].中药材,2003,30

(3:282—283.

[7]牛艳,王明国,郑国琦,等.宁夏不同地域构杞子微量元素比较研究

[J].干旱地区农业研究,2005,23(2:100—103.

[8]周红英,张颖,李同德,等.不同产地枸杞子微量元素测定[J].微量元

素与腱康研究,21203.20(3:19-20.

[9]常璇,胡奇林用聚类分析方法对宁夏中宁县和平罗县枸杞中6种元

素综合指标的比较研究[J].宁夏大学学报,2006,27(3:248—251.

[10]孙素琴,张宣,秦竹,等.FHR直接鉴拐0植物生药材[J].光谱学与光谱

分析,1999,19(4:542.

[11]孙紊琴.郁监源,胡鑫尧.分子光谱法无损鉴别生药材的最新进展

[J].光谱学与光谱分析,1999,19(6:841.

[12]孙素琴,周群,王钊,等.傅里叶变换拉曼光谱法无损鉴别植物生药材

[J].分析化学,2000.28(2:211.

[13]孙素琴,周群,郁鉴源,等.分子振动光谱法与中药研究的最新进展

[J].炮善龇谱分析,2000,20(2:199.

[14]周群,孙素琴,杜德国,等.芦丁热稳定性的红外光谱法实时原位跟踪

[J].光谱学与光谱分析。2010,20(2:195.

[15]孙素琴,王米渠,梁曦云,等.枸杞子四种原性状的兀豫光谱法鉴别

[J】.光谱学与光谱分析,2001,21(6:187—189.

[16]金文英.程路遥连续小波变换HA—TR FIRE分析应用于中药枸杞

子与同属非正品鉴别的研究[J].浙江师范大学学报,2008。31(3:312

-315.

[17]周群,孙素琴,梁曦云.枸杞产地的红外指纹图谱与聚类分析法研究

[J].光谱学与光谱分析,2003。23(3:509—511.

[18]施玉珍,陈志春,林贤福.枸杞子的共焦显微拉曼光谱鉴别[J].光谱

实验室,2004,21(6:1212.

[19]严奉坤,许兴,魏玉海槲瑾因组DNA提取西嘴纹图谱分析[J].时

珍国医国药,2007,18(1:8一10.

[20]ZHANG K Y B,LEUNG H W,YEUNG H W,d a1.Differentiation of Lr-

eium