江苏农业科学２０１２年第４ＪＤ卷第２期 一３７一
袁云香．硅对杜仲愈伤组织诱导及增殖培养的影响［Ｊ］．江苏农业科学，２０１２，４ｏ（２）：３７—３８
硅对杜仲愈伤组织诱导及增殖培养的影响
袁云香
（渭南师范学院环境与生命科学系，陕西渭南７１４０００）
摘要：以杜仲幼茎为外植体，进行杜仲愈伤组织诱导、增殖试验。在已经筛选出的最适再分化培养基中，添加不
同浓度的硅进行分化培养试验，以确定诱导、增殖培养基中的最佳硅浓度。结果表明：适度增加硅浓度，可明显提高杜
仲愈伤组织的诱导和增殖，并能改善愈伤组织的生长状态，增加愈伤组织增殖生长量；硅的最佳添加浓度为８０ ｍｇ／Ｌ。
关键词：杜仲；硅；愈伤组织；增殖
中图分类号：Ｓ５６７．１ ９０．４３ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２—１３０２（２０１２）０２—００３７—０２
杜仲是名贵的中药材，近年来大量研究表明，其次生代谢
产物也具有多种药用功能。由于杜仲常规育种方法耗时长、 工作量大且效率低，难以满足生产发展的需要，因此，组织培
养方法成为目前获取杜仲资源的主要手段…。本研究对杜
仲愈伤组织进行诱导及增殖培养，通过在培养基中添加不同
浓度的硅进行筛选试验，以确定最适于杜仲愈伤组织诱导、增 殖的硅浓度。
１材料与方法
１．１试验材料
渭南师范学院校园栽培的一年生杜仲嫩枝条。
１．２试验方法 １．２．１ 杜仲愈伤组织的诱导剪取一年生杜仲嫩枝条，放入
烧杯中，加入适量洗衣粉，在自来水下冲洗２ ｈ左右，再用蒸
馏水冲洗５ｒａｉｎ，置于超净工作台内，先用７５％乙醇处理３０ Ｓ，
收稿日期：２０１１—０４—１１ 基金项目：国家自然科学基金（编号：３１０００４１０）；陕西省教育厅２００９ 年度科学研究计划（编号：０９ＪＫ４３４）；渭南师范学院研究生科研基 金（编号：０９ＹＫＺ００２）。 作者简介：袁云香（１９８Ｏ一），硕士，讲师，研究方向为植物分子遗传 学。Ｅ—ｍａｉｌ：ｙｕａｎｙｕｎｘｉａｎｇ２００６＠１２６．ｃｏｒｎ。 再用０．１％ＨｇＣｌ：处理１２ ｍｉｎ，最后用无菌水冲洗５～６次，将
幼嫩茎段切成长约１～１．５ ｃｍ小段作为外植体，接种于诱导
培养基ＭＳ＋６一ＢＡ １ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ＋０．７％琼脂＋ ３％蔗糖脯氨酸５００ ｍｇ／Ｌ＋水解酪蛋白３００ ｍｇ／Ｌ＋ｌ％ＰＶＰ
上（图１），２４～２６℃条件下暗培养，诱导愈伤组织形成（图
２），３周后统计诱导率，并观察愈伤组织生长状态。
１．２．２杜仲愈伤组织的增殖茎段在培养基上诱导２１ ｄ
后，将愈伤组织小心切下，继代于增殖培养基ＭＳ＋６一ＢＡ
０．５ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ＋０．７％琼脂＋３％蔗糖＋脯氨酸
５００ ｍｇ／Ｌ＋水解酪蛋白３００ ｍｇ／Ｌ上（图３），培养基中添加硅
浓度分别为０、２０、４０、６Ｏ、８０、１００、１２０、１４０、１６０、２００ ｍｍｏ］／Ｌ。 转接的为质地相当的淡黄绿、较疏松、有光泽、生长旺盛的愈伤
组织块，每瓶接种４块，（２２±１）℃、光照度１ ５００～２ ０００ ｌｘ
条件下光照１３ ｈ／ｄ，２０ ｄ后统计愈伤组织生长情况，以愈伤组
织相对生长量为指标，确定继代培养基最适硅浓度。愈伤组
织增殖每３周继代１次，每个试验重复３次。
相对生长量＝（培养后重一培养前重）／培养前重
２结果与分析
２．１ 不同浓度硅对杜仲愈伤组织诱导的影响 幼嫩茎段在诱导培养基上培养５ ｄ开始膨大，１周左右能
（上接第３６页） 染率明显高于春季外植体污染率，可能是冬季取材的茎段较
老熟，表面粗糙且蜡质较厚，内生菌消毒不彻底导致的结果。 但从整个试验结果来看，春季腋芽萌发率高于冬季腋芽的萌
发率，表明春季取材较适合木薯ＧＲ９１１腋芽萌发的诱导。
本试验从不同的消毒剂、外植体的选择、ＧＡ 和维生素Ｃ
浸泡处理外植体等方面对木薯ＧＲ９１１腋芽萌发的影响进行
系统研究，取得了良好的效果。
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江苏农业科学２０１２年第４０卷第２期
图２杜仲愈伤组织诱导 图３杜仲愈伤组织增殖
在茎接触培养基的一端开始看到愈伤组织；培养过程中茎段
不断膨大，２周左右茎段基部开始完全愈伤组织化，质地较疏
松、颜色淡黄绿、有光泽、生长旺盛。如图４所示，随着硅浓度
的提高，杜仲愈伤组织诱导率呈现先升高后降低的趋势。其
中以硅浓度为１２０ ｍｍｏｌ／Ｌ诱导率最高，可以达到１００．Ｏ％。
２．２不同浓度硅对杜仲愈伤组织增殖的影响 图５表明，适当增加增殖培养基中硅浓度，对杜仲愈伤组
织的相对生长量的提高有明显促进作用，并且愈伤组织生长
状态也有所改善，变得结构更疏松、富有光泽呈奶油色，生长
旺盛，生长量大。其中以添加８０ ｍｍｏｌ／Ｌ的硅时，相对生长量
最高，达７．８。但当硅浓度增大到１００～２００ ｍｍｏｌ／Ｌ时，杜仲
愈伤组织的相对生长量没有增加而有所下降。
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硅浓度（ｍｍｏｌ／Ｌ） 图４ 不同浓度硅对杜仲愈伤组织诱导率的影响
硅浓度（ｒｅｔｏｏｌ／Ｌ） 图５ 不同浓度硅对杜仲愈伤组织增殖的影响
３结论与讨论
硅是地壳和土壤中含量第二丰富的元素，被认为是植物 生长发育的准必需元素。绝大多数的植物组织中都含有硅。
不同植物种类之问硅含量差异很大。随着人们对硅素营养的
深入研究，它对于植物的作用逐渐被人们所认识。大量研究 表明，硅可以通过沉积在质外体来提高植物对病害、虫害和倒 伏的抵抗力 』，保护植物免受各种生物和非生物逆境危害。
硅能促进植物生长发育，提高作物对非生物胁迫和生物胁迫
的抗性 。袁云香等在培养基中加入适量硅，发现适量的 硅可以提高水稻愈伤组织的再生植株频率 。本试验结果
表明：在培养基中适度增加硅，能够有效地提高愈伤组织胚性
状态，同时诱导率及增殖生长量也明显提高，但浓度过大则影
响诱导及增殖。这可能是由于硅处理能提高植株体内过氧化
物酶和多酚氧化酶活性，这两种酶被认为在植物的抗病中起
重要的作用，它们通过将酚类化合物聚合形成坚固的屏障并
形成木质素，或通过在酚类物质的前体小分子形成木质素过
程中诱发产生的植保素而增强植物对病原菌的抵抗能力 。
酚类物质是杜仲愈伤组织褐化的主要原因，减少酚类物质能 改善愈伤组织质地及提高分化率。但硅提高杜仲愈伤组织分
化率及生根率的具体机制目前还不清楚，有待于进一步
的研究。
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