・１６４・　第２６卷第３期　河　北　医　科　大　学　学　报　Ｖｏ１．２６　Ｎｏ．３　２００５年５月　ＪＯＵＲＮＡＩ　ＯＦ　ＨＥＢＥＩ　ＭＥＤＩＣＡＬ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　Ｍａｙ　２００５　

・论　著・　

乙醇对雄性大鼠生殖毒性的研究　

赵松　，解丽君。，胡文媛。　（１．河北医科大学基础医学院病理学教研室，河北石家庄０５００１　７；２．河北省疾病预防控制中心药物研究室，　河北石家庄０５００２１；３．河北医科大学公共卫生学院劳动卫生学教研室，河北石家庄０５００１　７）　

【摘要】　目的观察长期摄入乙醇对雄性大鼠生殖内分泌功能的损伤及机制。方法４ｏ只健康雄性成年ＳＤ　大鼠随机分为４组，对照组和分别灌胃给予乙醇２．７、４．５、７．５　ｇ／（ｋｇ・ｄ），连续１３周，测定各组大鼠血清睾酮　（ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ，Ｔ）、黄体生成素（１ｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ　ｈｏｒｍｏｎｅ，Ｉ　Ｈ）、卵泡刺激素（ｆｏｌｌｉｃｌｅ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　ｈｏｒｍｏｎｅ，ＦＳＨ）含量，光　镜、电镜观察睾丸组织的形态学改变，同时测定睾丸线粒体中丙二醛（ｍａｌｏｎａｌｄｅｈｙｄｅ，ＭＤＡ）的产生量。结果各乙　醇组动物血清Ｔ和Ｉ　Ｈ水平较对照组明显降低（Ｐ＜ｏ．０１），仅高剂量组ＦＳＨ较对照组明显降低（Ｐ　ｄ０．０５）；光镜　下乙醇组动物睾丸生精细胞出现细胞变性，核固缩，曲细精管腔中脱落细胞增多；超微结构显示乙醇组睾丸生精上　皮结构破坏，支持细胞和各级生精细胞均有退化变性，且损伤程度与乙醇剂量明显相关，乙醇４．５、７．５　ｇ／ｋｇ组动　物睾丸线粒体中ＭＤＡ含量明显高于对照组（Ｐ　ｄ０．０５）。结论乙醇是一种睾丸毒物，既可以直接作用于睾丸，弓【　起生精细胞损伤和睾丸类固醇合成抑制，还使下丘脑一垂体轴生殖内分泌功能受损，脂质过氧化可能是乙醇性睾丸　损伤的一种机制。　【主题词】乙醇；睾丸；泌尿生殖系统／损伤；大鼠　【中图分类号１　Ｒ５９５．６　【文献标识码】　Ａ　【文章编号１　１００７—３２０５（２００５）０３—０１６４一Ｏ４　

ＥＦＦＥＣＴＳ　ｏＦ　ＣＨＲｏＮｌＣ　ＥＴＨＡＮｏＬ　ＣｏＮＳＵＭＰＴＩｏＮ　ｏＮ　ＭＡＬＥ　ＲＥＰＲｏＤＵＣＴＩＶＥ　ＳＹＳＴＥＭ　ｏＦ　ＲＡＴＳ　ＺＨＡＯ　Ｓｏｎｇ　，ＸＩＥ　Ｌｉ－ｉｕｎ。，ＨＵ　Ｗｅｎ－ｙｕａｎ　（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ　Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｂａｓｉｃ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈｅｂｅｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，　Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ　０５００１　７，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｈｅｂｅｉ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ　０５００２１，Ｃｈｉｎａ；３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｌａｂｏｕｒ　Ｈｙｇｉｅｎｅ，　ｔｈｅ　Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ．Ｈｅｂｅｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ　０５００１　７，Ｃｈｉｎａ）　

ＡＢＳＴＲＡＣＴ：０ｂｊｅｅｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍａｌｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ａｎｄ　ｃｌａｒｉｆｙ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ａｃｔｉｏｎ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｆｏｒｔｙ　ｈｅａｌｔｈｙ　Ｓｐｒａｇｕｅ—Ｄａｗｌｅｙ　ａｄｕｌｔ　ｍａｌｅ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｆｏｕｒ　ｇｒｏｕｐｓ．　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｄｏｓｅｓ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ［０，２．７，４．５，７．５　ｇ／（ｋｇ・ｄ）］ｗｅｒｅ　ａｄｍｉｎｓｔｒａｔｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｒａｔｓ　ｆｏｒ　１　３　ｗｅｅｋｓ　ｂｙ　ａ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｔｕｂｅ．Ｓｅｒｕｍ　ｓｅｘｕａｌ　ｈｏｒｍｏｎｅｓ：ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ（Ｔ），ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ　ｈｏｒｍｏｎｅ（ＬＨ）ａｎｄ　ｆｏｌｌｉｃｌｅ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　ｈｏｒｍｏｎｅ（ＦＳＨ）ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｌｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｔｅｓｔｉｃｌｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｂｙ　ｌｉｇｈｔ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ　ａｎｄ　ｅｌｅｃｔｒｏｎ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．Ｔｈｅ　ｍａｌｏｎａｌｄｅｈｖｄｅ（ＭＤＡ）ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ　ｗａｓ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｓｅｒｕｍ　Ｔ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｅｔｈａｎｏｌ—ｔｒｅａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１）．Ｓｅｒｕｍ　ＬＨ　ａｎｄ　ＦＳＨ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ—ｔｒｅａｔｅｄ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ａｌｓｏ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｏｆ　ｃｏｎｔｒｏｌｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｌｉｇｈｔ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｅｓｔｅｓ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｇｅｒｍ　ｃｅｌｌｓ　ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｓｌｏｕｇｈｅｄ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｅｌｅｍｅｎｔ　ｉｎ　ｔｕｂｕｌａｒ　ｌｕｍｅｎ　ｏｆ　ａｌｃｏｈｏｌ—ｔｒｅａｔｅｄ　ｒａｔｓ．　

［收稿日期］２００５～０１－２４　修回日期］２００５—０３—０９　［作者简介］赵松（１９７２一），男，山东泰安人，河北医科大学基础　医学院博士研究生，从事肾病和肿瘤的病理学研究。　

维普资讯 http://www.cqvip.com 河北医科大学学报　第２６卷第３期　・　１６５　・　Ｅｌｅｃｔｒｏｎ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｓｅｍｉｎｉｆｅｒｏｕｓ　ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ—ｔｒｅａｔｅｄ　ｒａｔｓ　ｗａｓ　ｄｉｓｏｒｇａｎｉｚｅｄ　ａｎｄ　ｔｈａｔ　ｓｅｒｔｏｌｉ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ａｌｌ　ｓｏｒｔｓ　ｏｆ　ｇｅｒｍ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ．Ｔｈｅ　ｄｅｇｒｅｅ　ｏｆ　ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ　ｉｎ　ｕｒｙ　ｗａｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏ１．ＭＤＡ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ　ｉｎ　ｅｔｈａｎｏｌ　４．５，７．５　ｇ／（ｋｇ・ｄ）ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｍａｒｋｅｄｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｐ＜０．０１）．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｅｔｈａｎｏｌ　ｉＳ　ａ　ｋｎｏｗｎ　ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ　ｔｏｘｉｎ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｕｓｅ　ｌｅａｄｓ　ｔｏ　ｇｅｒｍ　ｃｅｌｌ　ｉｎｉｕｒｙ　ａｎｄ　ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ　ｓｔｅｒｏｉｄｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｅｑＳ　ｗｅｌｌ　ａｓ　ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ—ｐｉｔｕｉｔａｒｙ　ａｘｉｓ　ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ　ｒｅｌｅａｓｅ．Ｉ　ｉｐｉｄ　ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ｍａｙ　ｂｅ　ａ　ｐｕｔａｔｉｖｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｔｈａｔ　ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ．ａｔ　ｌｅａｓｔ　ｉｎ　ｐａｒｔ，ｔｏ　ｔｈｅ　ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ　ｉｎｊ　ｕｒｙ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｅｔｈａｎｏ１　ａｂｕｓｅ．　ＭｅＳＨ：ｅｔｈａｎｏｌ；ｔｅｓｔｉｓ；ｕｒｏｇｅｎｉｔａｌ　ｓｙｓｔｅｍ／ｉｎｊ；ｒａｔｓ　

乙醇是一种常用的化学试剂，也是食用酒的主　要成分。随着生活方式的改变，酗酒已成为重要的　社会问题。有关研究表明，乙醇是一种确认的致畸　物，母亲孕期大量饮酒可致“胎儿乙醇综合征”　：男　性酗酒除可影响身体健康外，可引起后代发育和行　为异常　一。为提高人类生命质量和优生优育，研究　乙醇的生殖遗传毒性具深远意义。本研究通过经口　灌胃给予雄性大鼠乙醇，观察乙醇对睾丸组织形态　学及生殖内分泌激素的影响，并初步探讨了乙醇引　起睾丸损伤的作用机制。　１材料和方法　１．１　实验动物及分组：选体质量１８０～２２０　ｇ健康　成熟雄性ＳＤ大鼠４０只（河北省实验动物中心提　供），随机分为４组：对照组、乙醇２．７、４．５、７．５　ｇ／（ｋｇ・ｄ）组，每组１０只。各乙醇处理组均用无水　乙醇加入不同量蒸馏水灌胃，灌胃量为１５　ｍＩ　／ｋｇ，　对照组给予等量蒸馏水，１次／ｄ，连续１３周。于末　次染毒２４　ｈ后用乙醚麻醉动物，眼眶静脉丛采血后　处死，取双侧睾丸，称重，一侧待做睾丸线粒体丙二　醛（ｍａｌｏｎａｌｄｅｈｙｄｅ，ＭＤＡ）含量测定，另一侧用于组　织形态学观察。　１．２观察指标及方法　１．２．１睾丸光镜病理切片制作：取一侧睾丸部分组　织Ｂｏｕｉｎ液固定，常规石蜡包埋切片，ＨＥ染色，光　镜下观察睾丸组织病理学变化。　１．２．２睾丸超薄切片制作及观察：取一侧睾丸部分　组织，双蒸水冲洗，在冰面上分别切割成２　ｍｍ×　２　ｍｍ×４　ｍｍ小块，４　戊二醛固定，环氧树脂包　埋，超薄切片，醋酸双氧铀和枸橼酸铅双重染色法染　色，于日本产Ｈ一７５００型透射电镜下观察睾丸组织　超微结构。　１．２．３血清睾酮、黄体生成素、卵泡刺激素测定：采　用放射免疫法。由北京核仪器厂产Ｆ一６４６Ａ型微机　单头放射免疫仪进行测定。试剂盒由中国原子能科　学院同位素研究所提供。　１．２．４　睾丸线粒体ＭＤＡ含量测定：取一侧睾丸．　摘除被膜后，加入６倍体积的含０．２５　ｍｍｏｌ／Ｌ蔗　糖、１　ｍｍｏｌ／Ｉ　氯化镁、１０　ｍｍｏｌ／Ｉ　Ｔｒｉｓ—ＨＣ１缓冲液　（ＰＨ一７．４），在冰浴下制成匀浆，使用日本产ＲＰ２０　型高速冷冻离心机在４℃条件下６００　ｒ／ｍｉｎ离心取　上清夜，再以９　７００　ｒ／ｍｉｎ离心３０　ｍｉｎ，得沉淀于　０．１５　ｍｍｏｌ／Ｌ　ＫＣ１—０．１５　ｒｅｔｏｏｌ／Ｉ　ＫＨ　２ＰＯｌ缓冲液　（ｐＨ一７．４）冲洗，再以同样速度离心３０　ｍｉｎ，最后得　睾丸线粒体。ＭＤＡ测定用南京建成生物研究所试　剂盒，严格按操作说明书进行；考马斯亮兰法测定蛋　白含量。　１．３统计学处理：应用ＳＰＳＳ　１０．０统计软件，进行　Ｄｕｎｎｅｔｔ检验，Ｐ　ｄ０．０５为有统计学意义。