中国兽医杂志２０１０年（第４６卷）第１１期 ７１
氟苯尼考肺靶向明胶微球制备方法的试验
刘 澜 ，田 玲 ，冯华兵 ，杜继红。，葛 冰 ，葛代兴 ，杨秀玉
（１．北京大北农动物保健技术研究中心。北京怀柔１０１４０７；２．北京市农业局，北京海淀１０００２９
３．北京『ｌ 兽药饲料监察所．北京海淀１００１０７；４．中国兽医药品监察所，北京海淀１０００８１）
中图分类号：￥８５９．７９ ９．１ 文献标识码：Ｂ 文章编码：０５２９—６００５（２０１０）１１ ００７１－０３
氟苯尼考（ＦＦＣ）是动物专用广谱抗菌药，临床
用于预防和治疗畜禽的各种细菌感染，但常规制剂
往往治疗效率较低 。肺靶向氟苯尼考明胶微球是
指将氟苯尼考分散在明胶中形成的微球状分散体
系，它可通过控制明胶微球的球径范同，将药物最大
限度地运送到肺部组织，使药物在肺部浓集超出传
统制剂的数倍乃至数百倍，以达到靶向治疗作用。
近年来，国内外学者一 一研究表明，明胶微球粒径在
５～３０ ｍ之间，微球静脉注射后经血液循环到达肺
部，可被分布在肺组织的网状内皮系统吞噬或被肺
部毛细血管机械性摄取，而呈现良好的肺靶向性。
本试验以明胶为载体，采用两步法制备了氟苯尼考
肺靶向明胶微球（ｆｌｏｒｆｅｎｉｃｏｌ ｇｅｌａｔｉｎ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ，
ＦＦＣ—ＧＭＳ），并通过单因素试验、均匀试验、正交试
验对影响微球粒径、形态等的因素进行了考察，优化
处方、丁艺，为肺靶向氟苯尼考明胶微球的制备提供
科学依据。
１ 材料
１．１ 仪器 扫描电子显微镜（Ｓ一３４００Ｎ，日本ＨＩ—
ＴＡＣＨＩ）；ＤＳＣ扫描仪（ｄｉａｍｏｎｄ ６，ＰＥ）；激光粒度
分布仪（２０００，马尔文）；高效液相色谱仪（Ｗａ—
ｔｅｒｓ２４８７，美国Ｗａｔｅｒｓ）；恒速数显搅拌机（ＪＨＳ ２／
６Ｏ，杭州仪表电机有限公司）；数显恒温磁力搅拌器 （０７ＨＷＳ一１，杭州仪表电机有限公司）；超声波清洗
器（ＫＱ５２００，昆山市超声仪器有限公司）；生物显微
镜（ＸＳＰｔＣ２Ｏ３，重庆光学仪器有限公司）；真空干燥
箱（ＤＺ １ＢＣ，天津泰斯特）。
１．２试验药品与试剂 氟苯尼考购自浙江海翔药
业股份有限公司（批号：Ｐ０４８—２００８２４３）；氟苯尼考对
照品购自中国兽医药品监察所（批号：Ｋ０３００８０１，含
量：９９．５ ）；明胶、液体石蜡、Ｓｐａｎ一８０、Ｔｗｅｅｎ一８０、
石油醚、甲醛、异丙醇均购自北京化学试剂公司（化
学纯）；胃蛋白酶购自北京化学试剂公司。
２方法与结果
２．１ 空白明胶微球（ｇｅｌａｔｉｎ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ，ＧＭＳ）的
制备 采用乳化交联法制备空白明胶微球 一，以明
胶水溶液为分散相，液体石蜡为连续相，加入适宜的
乳化剂，机械搅拌得稳定乳剂（ｗ／ｏ），然后加入异丙
醇脱水再加入甲醛或戊二醛交联固化制成明胶
微球。
２．１．１油相、乳化剂的选择 根据相关文献一 ～一，
选择以液体石蜡为油相，考察以Ｔｗｅｅｎ一８０、Ｓｐａｎ一８Ｏ
或两者的混合物作为乳化剂时制得的乳剂的稳定
性，从而进行乳化剂的筛选，结果见表１。结果表明
以Ｔｗｅｅｎ ８０和Ｓｐａｎ一８０（ｗ／ｗ为１：１）为混合乳化
剂效果最好。
表１ 乳化剂对乳化效果的影响
２．１．２ 固化条件的选择 先将ｌ０ 明胶溶液分散
于液体石蜡中，机械搅拌，尝试用甲醛或戊二醛、异
丙醇固化制得明胶微球，通过 微镜观察微球的外
观形态。通过预试验，甲醛和戊二醛的固化效果无
收稿日期：２００９ ０７】４
基金项目：北京市海淀区科技项目（Ｋ２００７０７７）
作者简介：刘澜（１ ９６９），女．高级兽医师，博士，从事新兽药研发
工作，Ｅ ｍａｉｌ：ｍｓｌｉｕｔｏｎｇ＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ
通讯作者：杨秀玉，Ｅ ｍａｉｌ：ｙａｎｇｘｉｕｙｕ＠ｉｖｄｃ．ｇｏｖ．ｃｎ 显著性差别，正式试验我们选择以甲醛和异丙醇作
为固化剂，固化时间分别为１ ｈ，考察不同的甲醛、
异丙醇投料量对微球形态的影响。结果见表２。随
着甲醛和异丙醇投料量的增多，得到的球形颗粒增
多，粘连减少，流动性增强，但是增加到一定程度后，
这种改变趋势减弱，综合考虑工艺、成本、有机溶剂
的残留等因素，选择以１０ ｍＬ甲醛和２Ｏ ｍＬ异丙醇
为固化剂。
２．１．３ ＧＭＳ制备工艺的优化
综合考察影响微球 ７２ 中国兽医杂志２０１０年（第４６卷）第１１期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａ１ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
形成的５因素（明胶浓度、油相体积、乳化剂用量、乳
化温度、搅拌速率），对其进行５因素４水平的均匀
试验。均匀试验设计详见表３。通过光学显微镜直 接观察ＧＭＳ的均匀性、粒径范围、形状与粘连程
度，结果发现编号２、编号３较好，但仍有粘连且形
态不完美。
表３均匀试验设计
编号 明胶浓度（ ） 乳化剂用量（ｇ） 乳化温度（℃） 搅拌速率（ｒ・ｍｉｎ ）
５００
８００
１ ｏｏｏ １ ５ＯＯ
根据均匀试验结果结合相关文献 ：确定乳化
温度为６０℃。进一步采用４因素３水平的正交试
验，将ＧＭＳ的平均粒径（Ｓ ）、粒径分布均匀程度
（Ｓ ）、不粘连程度（Ｓ。）作为评价指标，分别评分。每
批评价５００个微球，且对结果进行综合评分Ｓ（Ｓ— ｓ ＋ｓ 一Ｓ。），Ｓ愈高，微球的质量越好，详见表４。
从表４中可以看出编号６总分最高。综合分析确定
ＧＭＳ最佳制备工艺为：明胶浓度１Ｏ ，油相体积为
５５ ｍＬ，乳化剂用量为０．４ ｇ，乳化温度为６０￣Ｃ，搅拌
速率为１ ０００ ｒ／ｍｉｎ。
表４正交试验设计
编号 明胶浓度（ ） 油相体积（ｍＬ） 乳化剂用量（ｇ） 搅拌速率（ｒ・ｒａｉｎ ） Ｓｌ Ｓ２ Ｓ
６７．１５
１２１．７８
１１３．Ｏ２
１３１．１８ １１０．１３
１３９．４３
１２１．７６ １Ｏ３．５８
８９．６７
注：Ｓｊ一（１一ｆ ａ—ｄｒ｛，／ｄｒ）Ｘ１００；ａ为粒径平均数；出为微球要求的粒径；ｄｒ－－ｉ０ Ｕｒｎ）；ｓ２：粒径的标准偏差；Ｓ３＝（５０Ｏ—Ｎ）×１００／５００；Ｎ
是微球粘连数；Ｓ：总分
２．１．４ ＧＭＳ的制备工艺 将已充分溶胀的１０
明胶溶液８ ｍＩ 滴人含有０．４ ｇ乳化剂的５５ ｍＬ液
体石蜡中，在６０℃水浴中搅拌乳化１ ５ ｒａｉｎ，转速
１ ０００ ｒ／ｍｉｎ。冰水浴迅速冷却，以细流状加入
２０ｍＬ异丙醇搅拌１ ｈ，再加入甲醛１Ｏ ｍＬ，搅拌交
联固化１ ｈ，抽滤。用异丙醇一乙醚洗涤，至洗尽甲
醛，用石油醚洗去微球表面的液体石蜡，真空干燥。
过２００目筛，得类白色微球粉末。用光散色法测定
微球平均粒径为１０．２３ ｔｚｍ，粒径范围５．０～３０ ｍ
的数目占总数的９０．８ ，结果见图１。
２．２ ＦＦＣ—ＧＭＳ制备Ｔ艺的确定 采用两步法制
备氟苯尼考明胶微球，将氟苯尼考溶解于３０ 二甲
基甲酰胺水溶液中，加入ＧＭＳ，静置浸入２ ｈ，抽
滤，用蒸馏水洗净二甲基甲酰胺，真空干燥，过２００
目筛，得类白色微球粉末，形态见图２。用光散色法
测定微球平均粒径为１０．５７ ｔｚｍ，粒径范围５．０～ ｌＯ０ ８Ｏ ６０ ４０ ２Ｏ ０
图１ 明胶微球的粒径分布
３０ ｍ的数目占总数的８８．３ ，达到肺部靶向的设
计要求。
２．３差示扫描量热法验证ＦＦＣ—ＧＭＳ的形成 操
作条件：扫描温度３０℃～３５０℃，扫描速度２Ｏ ｄｅｇ・
ｍｉｎ，分别测得ＦＦＣ、ＧＭＳ与ＦＦＣ—ＧＭＳ的ＤＳＣ曲
线。结果见图３。从曲线上看出ＦＦＣ在２７０℃左右
有特征峰，ＧＭＳ在３００℃左右有特征吸收峰，但
ＦＦＣ—ＧＭＳ基本上无ＦＦＣ或ＧＭＳ的特征吸收峰， 一６ ８ ０ ４ ０ ４ ８ ２ Ｏ ｓ一 ｎ
∞鸺％船∞ 中曰 医杂志２０１ ０年（第ｄ ６卷）第１１期 ７３
图２氟苯尼考明胶微球
Ａ：光学显微镜照片（１００×）；Ｂ：电子显微镜照片（８ ０００×）
而有其本身２４５℃左右有特征峰，说明确实形成了
ＦＦＣ—ＧＭＳ
Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（０）
图３差示扫描量热法曲线
Ａ：氟苯尼考；Ｂ：空白明胶微球；Ｃ：氟苯尼考明胶微球
２．４ ＦＦＣ—ＧＭＳ巾载药量的测定 称取一定量微
球，置于烧杯中，加入２Ｏ ｍＩ 蒸馏水，加入０．２ ｇ胃
蛋白酶，用稀盐酸调溶液ｐＨ值至３．５，而后将烧杯
置于４０℃±３℃水溶液中搅拌水解３ ｈ，破坏明胶微
球使氟苯尼考释放一 ；冉加入２０ ｍＩ Ｎ，Ｎ一二甲基
甲酰胺，继续搅拌３０ ｒａｉｎ后用０．２２ ｍ的微孔滤膜
过滤，滤液用Ｎ，Ｎ二甲基甲酰胺定容至５Ｏ ｍＬ。
２．４．１ 回收率精密称取２Ｏ ｍｇ干燥空白明胶微
球，分别加入氟苯尼考１ ｍｇ、２．５ ｍｇ、 ｍｇ，同上操
作后，精密量取１０ Ｉ 滤注入液相色谱仪，记录色谱
图。另取氟苯尼考对照品适量，加入流动相制成浓
度为５０ ｔｚｇ／ｍＬ的溶液，同法测定。按外标法以峰
面积计算氟苯尼考浓度。色谱柱：ＭＳＣ一１ ８；流动相：
乙腈一水一冰醋酸（５００：９８５：１５）；检测波长为
２２４ ｎｍ。测得低、巾、高不同加入量的平均回收牢
为１０２．１ （ｎ一５）。
２．４．２氟苯尼考药物含量的测定 精密称取干燥
微球２０ ｍｇ，同上操作后，精密量取１０ Ｌ滤注入液
相色谱仪，记录色谱图。另取氟苯尼考对照品适量，
加人流动相制成浓度为５０ｔｚｇ／ｍＬ的溶液，同法测
定。按外标法以峰面积计算氟苯尼考浓度。色谱 柱：ＭＳＣ １８；流动相：乙腈水冰醋酸（５００：９８５：
１５）；检测波长为２２４ ｎｍ。得ＦＦＣ—ＧＭＳ中载药量
为１２１．２ ｒａｇ／ｇ（ｎ＝＝＝３）。
２．５ ＦＦＣ—ＧＭＳ药物包封率的测定 精密称取干
燥样品２０ ｍｇ，用少量蒸馏水涡旋洗涤３次后弃去
洗液，残余微球７０℃烘干。按２．４项下方法测定水
洗后微球巾的氟苯尼考含量，并计算包封率，得
ＦＦＣ ＧＭＳ药物包封率为９０．３１ 。
包封率（ ）一（水洗后微球中的药物含量／载药量）
×１００
２．６ ＦＦＣ—ＧＭＳ稳定性考察 将ＦＦＣ ＧＭＳ密封
于西林瓶内，分别置于４℃，室温（２Ｏ℃±５℃）和
４０℃相对湿度７５ 的条件下３个月，每月检查，其
外观、形态、载药量几乎无变化，结果见表５。说明
ＦＦＣ ＧＭＳ稳定性较好。
３讨论
３．１（３－ＭＳ的制备工艺 本试验以明胶为载体，采
用乳化交联法制备了肺靶向明胶微球。根据相关文
献及单因素考察确定了油相、乳化剂和固化条件，运
用均匀设计和正交设计的试验方法考察了影响成球
的五个因素包括明胶浓度、油相的体积、乳化剂的用
量、乳化温度和搅拌速率，并通过方差分析发现明胶
浓度对成球效果的影响最显著，其次为乳化剂用量、
搅拌速率、连续相体积、乳化温度，进一步优化并确
定了制备工艺。用该工艺制备的微球外观形态较
好，平均粒径为１０．２３ ｐｔｍ，粒径范同５．０ ｔｚｍ～３Ｏ
／＊ｍ的数目占总数的９Ｏ．８ 。
３．２ ＦＦＣ—ＧＭＳ的制备Ｔ艺 氟苯尼考在水中的
溶解性较差，如直接采用乳化交联法制备微球，微球
的含药量较低。本试验采用两步法，以３０ 二甲基
甲酰水溶液为溶剂不仅能够较好的溶解氟苯尼考，
而且能够很容易的浸润明胶微球，且溶液可反复用
于浸泡，提高药物收率并最终得到载药量较高的氟
苯尼考肺靶向明胶微球。
３．３ ＦＦＣ ＧＭＳ的体外评价 影响微球肺靶向的
主要因素是微球粒径的大小，国内外学者研究证实 一 ｒｇ—ａｆ１ ０ ｃ叫事０Ｅ ｕ｝
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