第２３卷第４期水生生物学报ｖｏｌ２３．Ｎｏ４
１９９９年１２月ＡｃＴＡＨ、ｒＤＲｏＢＩｏＬｏＧＩＣＡｓ丌ＮＩｃＡＤｅｃ．．１９９９
雨生红球藻培养基的改良＋邱保胜刘其芳（中国科学院水生生物研究所，武汉４３００７２
ＡＮＩＭＰＲｏＶＥＭＥＮＴｏＮＴＨＥＧＲｏＷＴＨＭＥＤＩＵＭＦｏＲ
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关键词雨生红球藻．培养基，缓冲体系，磷酸盐，甘氨酰甘氨酸Ｋｅｙｗｏｒｄｓ上ｋＰＨ础ｆｏｃｏｃｃ“ｓＰｍⅥ口船，Ｍｅｄｉｕｍ，Ｂｕｆｋｒ’Ｐｈｏｓｐｈａ培，Ｇｌｙｃｙｌｇｌｙｃｉｎｅ
近年来．雨生红球藻（胁Ｐ，，ｊ盯加ｃｏｆｃ“５ｐ『“ｖ抽ｍＲｏｔｅｔ
ｗｉｌｌ）作为一种获取天然虾青索的资源被广泛
重视”‘“．目前，有关雨生红球藻的研究主要集中于虾青素的积累机制、合成调控及其生物学功能…。关于雨生红球蓁生长调控方面的工作报道较少，还没有一个很理想的红球藻培养基口），从而在很大程度上阻碍了对雨生红球藻的深入研究与开发利用．雨生红球藻尤其是它的绿色游动细胞对环境ｐＨ值的改变较敏感，其生长状况与培养液的ＤＨ稳定性关系密切“‘”．而目前较多采用的ＭｃＭ．ＢＢＭ和ＢＧ一１ｌ培养基都存在着缓冲能力过弱的问题”ｌ。Ｍｃｌａｃｈｌａｎ曾试图将Ｔ＾ｓ引入ＡＳＭＧ培养基以增强其缓冲能力，但效果不佳”１．为此，作者研究了磷酸盐（№ＨＰｏ。·２Ｈｏ—ｋ｝Ⅱ吣．·３Ｈｏ）和甘氪酰甘氨酸缓冲体系对雨生红球藻生长的影响．以期实现两者优势互补．
Ｉ材料与方法１．１材料雨生红球藻（Ｈｐｍｖ抽，矿－６Ｂ）采自江苏镇江，在本实验室分离纯化，每次以绿色游动细胞接种．１．２培养条件培养温度２２℃，光照强度７０卜ｍ０１．ｑｌｌａｎｔａ·ｍ·ｓ－。．２４ｈ连续光照；静止培养．１１３生长测定以单位体积培养物叶绿素含量作为生长指标，叶绿裹测定采用丙酮提取Ｆ】。１．４ｐＨ翻定采用精密ｐＨ试纸测定。１．５磷酸盐缓冲体系对皿Ｐ如ｖ抽脯Ｂ生长的影响以ｓＭ【”培养基中的磷酸盐缓冲体系（Ｎａ｝ｉ’Ｐｏ。·
２｝Ｌ口Ｋ｝ＩＦ．ｏ，·３Ｈｏｊ为基准．即２６．０啪ｏＩ·Ｌ’ＮａＨ２ＰＯ．·２ｆＬＯ、６．６０ｍｍ０１．Ｌ—Ｋ｝￡Ｐｏ。·３｝ＬＯ为
Ｐ．当浓度分别为６５、１６５ｍｍ０１·Ｌ＿。，１３Ｏ、３３０ｍｍ０１·Ｌ，１９５、４．９５ｎｌｍ０１．Ｌ～，２６０，６．６０ＴｒⅡｎ０１．Ｌ叫
·国家自然科学基金（№３９５７００８６）资助．）邱保胜．刘其芳．红球藻研究进展。水生生物学报待发表１９９８讲＿ｏｌ收到；１９９９—０４一１８修回
万方数据３９２水生生物学报２３卷时代表磷酸盐缓冲体系的量为１／４Ｐ，ｌ／２Ｐ．３，４Ｐ和Ｐ。比较Ａｆ表而ＡｓＭＧ［６１培养基ｊ，ｓ’（表示ｓＭ培养基中不含ＮａＡｃ·３Ｈｏ与ＮａＨＰｏ．·２｝Ｌｐｋ｝Ⅱ叼．·３｝Ｌｏ）和ＡＳ７（表示ＡｓＭＧ与ｓ’ｌ１混合）中磷酸盐缓
冲体系的加入量（１，４Ｐ、Ｉ，２Ｐ、３／４Ｐ和Ｐ）对Ｈ口ｍｖｆｄ，聃一６Ｂ生长的影响。每水平两个重复，１．６甘氨酰甘氨酸与磷酸盐缓冲体系对Ｈｐ山ｐ缸临＿６Ｂ生长的影响比较Ａ７（表示ＡｓＭＧ培养基巾不
含甘氧酰甘氨酸）和Ａ，Ｓ‘（表示Ａ７与Ｓ７以ｌｌ｛昆合）中Ｇ（表示ＡｓＭＧ培养基中的甘氨酰甘氩酸，１０咖０１．Ｌ＿。时为＋Ｇ，５ｍｍｏｌ·Ｌ１时为＋１／２Ｇ，不加人以—Ｇ表示）的加入与否及磷酸盐缓冲体系
（３，４Ｐ和Ｐ）对Ｈ口ｍｖⅢ，＂．６Ｂ生长的影响，每水平两个重复．１．１实验数据分析数据处理采用方差分析和最小显著差数法ｔ“Ｄ）的多重比较，对稳定期单位体积培养物叶绿索含量进行分析．
２结果与讨论２．１磷酸盐缓冲体系对Ｈｐｍｖｆ４州Ｂ生长的影响
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目目１…“ｄ，
固ｌ培养基Ａ中碑酸盐缓冲体系对ｐＨ值和儿，ｍ，埘ｎ—Ｂ牛长的影响ＦｉＰｌＥｍｃｂｏｆｐｈｏｓｐｈ北ｏｎｔｌ】ｔｐＨｖ划ｕｅａｔｌｄｇｒ。ｗｔｌｌｏｆＨ口山ｐｒ“豇ｒ６ＢＡ·叶绿索。一ｏｐＨＡ＋ｌ／２ＰｂＡ十３，４ＰＡ＋Ｐ
图１和图２所示：在Ａ中（园水槽有限．故仅做磷酸盐缓冲体系为ｌ，２Ｐ、３／４Ｐ和Ｐ三个水平，各一个重复），当磷酸盐缓冲体系为１／２Ｐ时培养液的ＤＨ值在接种后第９ｄ有较大幅度上升．单位体积培养物叶绿素含量在接种后第１２ｄ也相应有所下降；当磷酸盐缓冲体系为３／４Ｐ和Ｐ时，ＨｐｍｖＥ口，ｆｒ６Ｂ在
培养全过程中，培养液ｐＨ值卜升幅度较前者小，Ｈ口，“ｖ缸肛６Ｂ的生长未出现受抑制现
象。在ｓ７中，当磷酸盐缓冲体系为ｌ／４Ｐ时，培养液口Ｈ值在接种后第５ｄ急剧上升至８２，Ｈ口ｍｖｚ“ｆ打一６Ｂ的生长也相应受到抑制；当磷酸盐缓冲体系为１／２Ｐ、３／４Ｐ和Ｐ时．培
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８时间Ｔｌｎｌｅ，（ｄ］图２培养基ｓ７和Ａｓ’巾磷酸盐缓冲体系对口Ｈ值和Ｈ口ｍ州ｆ㈣Ｂ生长的影响
Ｒｇ２ＥＨｂｃｂｏｆｐｈｏｓｐｈａｋｍｅｐＨｖ甜ｕｅａｎｄｇｒｏｗｌｌｌｏｆＨＰｍｖⅢｆｆｓ＿６ＢｓａｒＩｄＡｓ图例同图ｌ注ａｓ’＋１／４ＰｂＳ’＋１／２Ｐｓ７＋３，４Ｐｄｓ７＋ＰＡＳ７十１，４ＰｆＡＳ’＋Ｉ／２ＰＡＳ’＋３，４ＰｈＡＳ’＋Ｐ
万方数据４期邱保胜等．雨生红球藻培养基的改良３９３养涟的ｐＨ值始终稳定在６．９至７４之间．培养后期Ｈ
口ｍｌｆ“，Ｌ—Ｂ的生长在磷酸盐缓冲体系为３／４Ｐ时较其它水平条件下好．在Ａｓ７中，当磷酸盐缓冲体系为Ｉ／４Ｐ和１／２Ｐ时，培养液的ｐＨ值在培养过程中均变化较大，分别上升孚８．２和８ｌ，Ｈ，ｍⅢｆ妒６Ｂ的生长
冲体系为３／４Ｐ和Ｐ时，Ｈｐ『Ⅳ１，埘，时６Ｂ牛长过程中培养液的ｐＨ值变动较小，培养后期未出现生长受抑制现象；Ｈ口ｍ，－ｆ口打ｒ６Ｂ的生长在磷酸盐缓冲体系为３／４Ｐ时也较其它水平好．
７和Ａｓ与磷酸盐缓冲体系的加人量（，、／，３，４Ｐ和Ｐ）对Ｈ
山Ⅲ，矿生长的影响均具有极显著差异尸叭，尸．。由二磷酸盐缓冲体系为ｌ，４Ｐ和ｌ／２Ｐ时．Ｈｐｍ、·岫，舻６Ｂ的生长在培养后期通常受抑制，故在此未对磷酸盐缓冲体系与其生Ｋ
Ⅻ的＊系作多重比较．对三种培养基进行多重比较衷明：在采用磷酸盐作缓冲体系后，Ａｓ７最有利于ＨＦｍｖ坷，打＿６Ｂ生长，Ａ其次，ｓ７最差。Ａ和ＡＳ’均较ｓ７有利于．Ｈ＿ｐｍｖ坩肛６Ｂ生长，很可能是由于阿者中都存在有廿氨酰甘氯酸的缘故．
缓冲体系为３／４Ｐ时较为Ｐ时更适合Ｈｐ缸Ⅲ，旷６Ｂ生长．故作者认为培养基Ａ’
倍时间为１异．如在相同的培养条件下（２２℃．１３０“ｍ０１．ｑ咖【｛ｉ·ｍ＿·ｓ＇。、政良Ｂ（＇广ｌｌ培养基中以１．５％。ｏ，充气培养）．雨生红球藻细胞数．叶绿素，蛋白质和干重的加倍时间分别为１４．４、２５７．２８ｑ和３４７ｈ”１
４８１２４８１２４
１２４８ｌ：时间Ｔ…／
万方数据３９４水生生物学报２３卷Ｈ口ｍ１－啦ｆ打一６Ｂ在Ａ’ｓ７＋３／４Ｐ＋ｌ／２Ｇ培养基中的生长速度（叶绿索加倍时间ｌ８．８ｈ）略慢于其他研究者以细胞数为基准各自得出的雨生红球藻的最快生长速率（００５４ｈ。１［９】、０，９７ｄ—１３】．分别相当于加倍时间为１２９和１７３ｈ），但是鉴于以』－原因及实验材料等的差异性，本实验结果仍有力地表明：Ａ７ｓ７＋３／４Ｐ十１／２Ｇ能较好地满足Ｈｐｍｒｆｄ，卜６Ｂ的营养需求。在ＡｓＭＧ培养基中，甘氨酰甘氨酸原本用作缓冲剂，迄今未见甘氨酰甘氪酸促进红球藻生长的报道，本实强结果清晰表明．Ｈ口ｍｖｍ凰一６Ｂ的生长在有甘氨酰甘氨酸存在的情提下得到屁著改善，但甘
氨酰甘氮酸促进Ｈ口ｍｖ抽，旷６Ｂ生长的机理尚不清楚。在乙醇酸途径中，有一中间产物甘氨酸，培养基中的甘氨酰甘氨酸是否与之有关，尚不得而知．这无疑值得今后深人探讨。
参考文献Ｇ啪ｇＭ．Ｄ７Ｓｏｕ７ａＦＭＬ，ＢｏｒｏｗｌＥｋａＭａｆＡｆｇ刖ｃａｒｏｋｎ伽ｄｓ５ＩＳｃｃｏｎｄａｒｙｃａｒｏｋｎｏｌｄｓ２
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