・实验研究・黄芩黄素抑制兔角膜新生血管的形成张 黎 胡燕华I nh i b iti on of ba i ca le i n on cornea l neova scul ar i za ti on i n rabb itZhang L i,Hu Yanhua.D epa rt m en t of O ph tha l m ology,U nion Hospital of Tong ji M edical College,Huazhong U niversity of S cience and Technology,W uhan430022,China Abstract O bjecti ve The activity of122LOX is necessary t o the p r oliferati on of vascular endothelial cells sti m ulated by basic fibr osis gr owth fact or(bFGF),and122LOX p rducti on212(s)2HETE can p r omote neovascularizati on directly.Our study was t o investigate the influence of baicalein,a122LOX selective inhibit or,on corneal neovascularizati on(C NV)of rabbit. M ethods Ani m al model of CNV was induced by corneal pocket assay in15rabbits,and the sl ow2releasing table containing500ng of bFGF was put int o pocket t o sti m ulate CNV.P BS dr op s with30μmol/L of baicalein was t op ically ad m inistrated4ti m es daily f or10days in the right eyes of rabbits as the experi m ent gr oup,and P BS dr op s without baicalein was used at the same way in the left eyes as contr ol gr oup after p lace of bFGF.I nk was poured int o heart of model t o dis p lay the C NV10days after modeling,and then p ictures scanning s oft w are was used t o analyze the C NV area.The hist opathol ogic exa m inati on was perf or med foll owing the ink dyeing. Results The CNV area was(1614167±182131)p icture ele ment in the right eyes of rabbits and(12102140±284197) p icture ele ment in the left eyes,showing CNV inhibited by86166%by baicalein.The hist opathol ogy exa m inati on showed that CNV was more and thicker in the superficial corneal str oma layer in contr ol gr oup with a vacuole shape cr oss secti on,and the ink could be seen in the vacuole.No massive phl ogocytes infiltrati on was found in the CNV area.Only fe wer black ink dots were seen in the C NV in the right eyes,indicating CNV was obvi ously decreased after use of baicalein. Conclusi on Baicalein can effectively supp ress CNV of rabbit.These results offer a ne w app r oach t o clinical treat m ent of CNV. Key words baicalein;corneal;neovascularizati on摘要 目的 探讨122LOX选择性抑制剂黄芩黄素(baicalein)对兔角膜新生血管形成的影响。
方法 角膜微袋法制作兔角膜新生血管动物模型,动物右眼均滴30μmol/L黄芩黄素滴眼液,左眼为阴性对照,4次/d,1滴/次,共10d。
墨汁灌注后照相,照片扫描后进行软件分析得新生血管面积。
结果 10d后角膜新生血管面积对照组为(12102140±284197)像素,实验组为(1614167±182131)像素。
角膜新生血管被抑制了86166%。
病理组织学检查,对照组角膜基质浅层新生血管较多且粗大,呈各种形态的空泡状断面,空泡内可见黑色墨汁,未见大量炎细胞浸润。
实验组新生血管明显减少,只见少许黑色墨汁小点,亦未见大量炎细胞浸润。
结论 黄芩黄素可有效抑制兔角膜新生血管的形成;将为临床治疗角膜新生血管提供一条新的更有效的途径。
关键词 黄芩黄素;角膜;新生血管分类号 R772 文献标识码A 文章编号100320808(2006)0420364203 角膜新生血管是由缺氧、炎症、损伤等多种有害刺激引起的反应,也是角膜移植失败的首要原因。
虽然激光和手术提供了抑制角膜新生血管的方法,但并不能完全抑制角膜新生血管。
近年来国外研究发现血管内皮细胞的花生四烯酸(AA)代谢,尤其脂氧酶(LOX)途径的122LOX在血管生成方面起重要作用[1]。
由此 作者单位:430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科(张黎,博士研究生,现在郑州,河南省眼科研究所450003)通讯作者:张黎(Email:lizhangtt@)我们推测122LOX选择性抑制剂对血管形成有抑制作用,并可能成为治疗角膜新生血管的一条新途径。
目前国内外尚未见相关报道。
我们选用122LOX选择性抑制剂黄芩黄素进行在体研究,以期为临床治疗提供一条新的、更有效的途径。
1 材料与方法1.1 实验动物体重2～215kg的新西兰健康白色家兔15只(雌雄・463・Chin Ophthal Res,August2006,Vol.24,No.4 不限),华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。
1.2 方法1.2.1 滴眼液的配制 实验组滴眼液成分为30μmol/L 黄芩黄素、10%T ween20、1%D MS O,用P BS 配制,pH 调至714。
对照组滴眼液成分为10%T ween20、1%D MS O,用P BS 配制,pH 调至714[2]。
1.2.2 bFGF 缓释药丸的制备和新生血管墨染标本的制作见文献[3]。
1.2.3 动物模型的制作[3]与实验分组 15只新西兰白色家兔,双眼角膜中央做长约3mm 半厚切口,用2mm 宽巩膜隧道刀向12点角膜缘做潜行隧道,隧道顶端距角膜缘2mm 。
用显微镊将缓释药丸植入隧道顶端。
右眼为实验组,左眼为对照组。
术后右眼滴实验组滴眼液,左眼滴对照组滴眼液,4次/d,1滴/次,共10d 。
1.2.4 角膜新生血管的定量分析 照片用I m age p r o p lus V 415软件进行分析得新生血管面积。
1.2.5 组织病理学检查 植入术后第10d 进行墨染,无菌条件下取下角膜组织立即固定,进行病理学检查。
1.3 统计学方法计量资料以x ±s 表示,两样本均数间的差异采用配对t 检验进行统计学处理。
数据统计运算采用SPSS 1010统计软件进行处理,以P <0105作为差异具有显著统计学意义的标准。
2 结果2.1 黄芩黄素抑制实验两组各15眼植入bFGF 缓释小丸10d 后,角膜新生血管面积对照组为(12102140±284197)像素,实验组为(1614167±182131)像素。
可见角膜新生血管被抑制了86166%,经配对的t 检验显示具有显著统计学差异(P <0101)(表1,图1,2)。
表1 两组间角膜新生血管面积的比较(x ±s )Table 1 Comparis on of C NV area bet w een t w o gr oup s (x ±s )Gr oup CNV area in different ti m e4d 6d 8d10dContr ol 576167±23161874113±2919810314180±3611412102140±284197Experi m ent-210133±8172613160±1081491614167±182131 t 761783771610612 P<0101<0101<0101 (Paired t test )图1 第10d 对照组角膜新生血管生长密集活跃,已包绕植入物 图2 第10d 实验组角膜新生血管生长明显稀疏细小,较对照组少F i g .1 CNV had gr own cr owdedly and wrapped the i m p lant body on the 10th day in contr ol gr oup F i g .2 CNV only started t o gr ow int o i m p lanting area s parsely on the 10th day in experi m ent gr oup图3 第10d 角膜组织切片苏木精-伊红染色 对照组角膜基质浅层新生血管较多且粗大,呈各种形态的空泡状断面,空泡边缘可见黑色墨汁贴壁。