DNS法测定酶活实验方法总结及优化方案
目前纤维素酶没有统一的测定方法，诸多因素影响纤维素酶酶活测定大小的比较。

选择适宜的酶活测定条件，提高测定结果的准确性，可根据有关资料中采用的测定条件，以及通过控制变量法对酶活力测定中的主要影响因素进行研究。

目前实验室采用测酶活方法：
1、葡萄糖标准曲线制作：
530nm比色。

2、酶活测定方法：
考虑到酶液中培养基成分会对吸光值造成一定的影响，所以空白管0还是采用先将酶高温灭活的方法，后面保持实验条件一致，显色时间与标准曲线的显色时间保持一致。

单位酶活的计算：T n k OD ml U 1000
1
)/(⨯⨯⨯=酶活力 n ：稀释倍数； K ：曲线斜率； T ：反应时间，min ； 1000：mg 换算成ug.
以下是近期所做的实验结果：
葡萄糖标准曲线
两种产纤维素酶细菌不同测试结果
测定结果
实验结论：从以上几种对酶液的处理方法来看，183的酶活要比R2高，两种菌都是以胞外酶为主。

目前尚没找到有关于加缓冲溶液并且超声破碎的文献，所得测量结果与前面三种方法均不符，这一步需另外探索。

根据《纤维素酶活力测定条件研究》（夏服宝等，《饲料工业》2005年第26卷第16期）和《影响纤维素酶活力测定的几个因素》（刘妙莲等，中国食品发酵工业研究所）这两篇文献，实验室可先从底物浓度、温度、DNS用量、显色时间以及对菌体的超声破碎时间这几方面进行探索，进而优化实验方法。

刚果红染色法：常用的刚果红染色法有两种，
一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板
时就加入刚果红。

方法一在长出茵落的培养基上，覆盖质量浓度为1 mg
／mI。

的CR溶液，10～15 min后，倒去CR溶液，加入物质的量浓度为l mol／I。

的NaCI溶液，15 min后倒掉NaCl溶液，此时，产生纤维素酶的
茵落周围将会出现透明圈。

方法二配制质量浓度为10 mg／mI。

的CR溶液，灭菌后，按照每200 mI。

培养基加入1 mI。

的比例加入CR溶液，混匀后倒平板。

等培养基上长
出茵落后，产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的透明圈。

两种刚果红染色法的比较刚果红在筛选纤维素分解菌上的应用已经
有超过20年的历史，课本中给出了两种方法。

方法一是传统的方法，缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间
发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。

方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂问题，缺点是由于在纤维素
粉和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出
现假阳性反应。

但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊，因为培养基中纤维素占主要地位，因此可以与纤维素酶产生的透明圈相区分。

方法二的另一缺点是：有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红而形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分。

测酶活的方法主要有这两种刚果红法主要是操作简便，但是准确率不高。

DNS 法操作很烦但是准确率较高。