• 关键词：羊水细胞； Ad5载体；永生细胞；神经元分化； 神经营养因子
1. 引言
• 羊水细胞（AFCs）被广泛用于遗传突变的产前检查，但 关于这些细胞起源和鉴定的信息很少。 • 羊水细胞可分成经典的三大类：A.类上皮E型细胞; B.羊水 特定AF型细胞; C.纤维原F型细胞。 • 在确定条件下，羊膜上皮细胞已被报道可分化为能合成并 分泌神经递素的成熟神经细胞，这暗示了一些羊膜上皮细 胞可能保持多能干细胞的表现型。
3.1 转化羊水细 胞的体外鉴定 （二）
3.2 神经标记 表达的免疫细 胞化学检测
3.3 神经营养因子的 检测
4. 讨论
• 一些人认为，像HEK-293和HER等Ad5E1转化的人细胞系 是由神经细胞衍生而来的，本文的目的是研究Ad5E1转化 的人类羊水衍生细胞是否也具有神经元特性。 • 由Ad5E1基因作用羊水衍生细胞的转化产生了一类成长细 胞系，该细胞系展示了与上皮细胞一致的表型。
• 虽然这些细胞不显示任何典型神经细胞形态，但神经的前 体细胞以及如GFAP等神经胶质谱系标记的表达可以被证 实。 • PCR数据显示神经营养因子NGF和BDNF在培养的转化羊 水细胞中存在，且该转化羊水细胞是处于未刺激条件下。
• 使用腺病毒转化羊水衍生细胞作为提供生长因子的来 源比使用神经干细胞（该细胞很难获得）作为神经营 养因子供应者更有可行性。本研究显示通过腺病毒转 化及适当的培养细胞，并利用这些细胞所产生的神经 营养因子来治疗CNS疾病比初始提出的方案更快速。 • Ad5 E1转化羊水源细胞的神经特性与Ad5 E1转化 HEK-293细胞一致，它们能表达大量蛋白质及兔脑疫 苗NF-M，NF-L的mRNA；这些蛋白质在神经元中限 制性表达，这就提出了Ad5 E1转化细胞可能优先地影 响早期分化神经细胞。 • 在将来，利用转化羊水衍生细胞的神经源性去发展新 的分化模型，并使之在神经变性疾病中得到使用。
• 若干人胚视网膜细胞系能通过Ad5 E1转化产生，这暗示 了Ad5 E1可能优先转化人神经细胞系。 • 本文研究了神经元标记蛋白在E1转化羊水衍生细胞中的 表达。结果显示，Ad5 E1转化羊水源性细胞系的细胞能 表达上皮标记细胞角蛋白。此外，未受刺激的转化细胞
和在神经诱导介质中培养的细胞一样，表达各种神经元
的和神经胶质的标记蛋白。
2. 材料与方法
1）羊水细胞转化和细胞系增殖；
2）羊水细胞的细胞培养；
3）在低氧压下培养； 4）永生羊水源细胞的神经诱导；
5）海拉细胞的培养；
6）RT-PCR分析； 7）内源性分泌的神经营养因子的测量； 8）细胞的免疫细胞化学染色； 9）统计分析。
3. 结果
3.1 转化羊水 细胞的体外鉴 定（一）
专业英语读书报告
腺病毒转化后羊水衍生细胞的 神经元特性
Neuronal characteristics denoviral transformation
报告人：许洁 06生物工程
摘要
• 通过人腺病毒（Ad5）E1基因功能的作用，初期人类羊水细胞的高效 转化会在稳定细胞系中发生，该细胞系还能展示上皮样细胞的形态学 特性。 • 本研究利用免疫细胞化学方法证实了上皮细胞标记物的表达，显示神 经元以及诸如波形蛋白、A2B5、GFAP等神经胶质标记蛋白的表达 ，此外，神经营养因子也能在转化羊水细胞的细胞培养上浮物中检测 出来。 • 本研究结果与之前Ad5 E1转化的胚肾细胞系（HEK-293）实验结果 一致，且提出了一种关于上皮细胞和E1转化羊水衍生细胞神经元标 记蛋白共同表达及神经元样细胞优先转化的假说。