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染色
考马斯亮蓝G250：20mg溶于10ml 95％ 乙醇，加入20ml磷酸，用双蒸水定容至 200ml，定容前用玻璃棒搅溶。（在恒温箱 中染色20分钟）
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脱色
25％甲醇，7.5％乙酸，室温振摇下脱色， 总共配置200ml。
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总结
1.在进行水蛭粉末获取时，是否直接将整个水蛭搅碎就能 使用了。 2.当抽干仪温度为52度会不会改变水蛭素的性质 3.在水液减压浓缩蒸压干燥得纯化样品A和B时，应用小离 心管或称量纸收集精品A和B 4.点样时加可溶性淀粉对水蛭素的水性溶是否有影响
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精制
将粗品A和B分别溶于250和200ml蒸馏水中，各装入已捡漏的透析 袋(析袋MW值为6000)，扎紧上口，放置有蒸馏水的烧杯中，4度冰箱
放置，每隔8小时换水，连续透析48h，取出透析袋，水液减压浓缩蒸
压干燥得纯化样品A和B,A得量1.19克，收率7.9％，B得量0.21克，收 率1.4％。（按书上介绍;A的收率应为0.104％，B收率为0.0825％)
水蛭素
水蛭素抗凝血物质的提取
粗品提取： 粉碎水蛭样品15g，生理盐水225ml，4度冰箱放置24h，倾出上清 （上清液的PH为7.4)，同法提取3次，合并提取液，磷酸调PH至4.4， 冷贮12h，取上清（上清液的PH为4.6) ，加入无水乙醇使其含量为61 ％，（加入乙醇后溶液的PH为6.6）（无水乙醇本身的PH为8.4）用稀 盐酸调PH至6，放置过夜，倾出上清（该上清的PH为6.1），沉淀用61 ％的乙醇洗涤3次，抽干得粗品A，滤液合并于上清液，再加入乙醇使 其含量为85％，静置24h后同同前处理取沉淀物洗涤抽干（抽干时仪 器调的温度为52度）得到粗品B。 加入无水乙醇使其含量为61％,用稀盐酸调PH至6
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精制
将粗品A和B分别溶于250和200ml蒸馏水中，各装入已捡漏的透析袋内
(透析袋MW值为6000)，扎紧上口，放置有蒸馏水的烧杯中，4度冰箱放置， 每隔8小时换水，连续透析48h，取出透析袋，水液减压浓缩蒸压干燥得纯 化样品A和B,A得量1.19克，收率7.9％，B得量0.21克，收率1.4％。(按书 上介绍;A的收率应为0.104％，B收率为0.0825％)（得到的A为深棕色粉末状
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胶的制作（制作分离胶5%）
1.分离胶缓冲液：10毫升 2.单体贮液： 21.36毫升 3.双蒸水： 48.66毫升 4. TEMED: 150毫升 5.过硫酸铵： 150毫升
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制作浓缩胶(3%)
1.浓缩胶缓冲液： 2.单体贮液： 3.双蒸水： 4.TEMED: 5.过硫酸铵： 2.5毫升 2.76毫升 14.68毫升 10毫升 60毫升
5.在下次点样时取大于0பைடு நூலகம்20克的A和B充分溶于蒸馏水，并 取上清进行点样。
固体，B的颜色比A要淡也为棕色固体;)，(起始时配置的水蛭样品与生理盐水比例 越高最后得到的A和B的颜色越深)
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水蛭样品与生理盐水1:5和1:15得到的最后产物A的图片
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电泳时溶液的配置
（1）0.005MTris—Hcl溶液（pH=8.8）：称取0.06055g Tris溶于50mL水， 用2N盐酸调pH至8.8，定容至100mL。 （2）分离胶缓冲液（pH=8.9）：称取36.3g Tris溶于60mL双蒸水中，用 2N盐酸调pH至8.9，再用双蒸水定容至100mL，4°C保存备用。 （3）单体贮液：称取30g丙烯酰胺和0.8g甲叉双丙烯酰胺，先用70mL双 蒸水溶解，再用双蒸水定容至100mL，过滤后用棕色瓶装，于4°C下 保存备用。 （4）电极缓冲液：称0.6gTris和2.88g甘氨酸溶于双蒸水，调pH至8.3，定 容至1000mL。 （5）10%过硫酸铵溶液：称取1g过硫酸铵溶于10mL双蒸水中，使用前 现配。 （6）浓缩胶缓冲液：称6.06gTris溶于60mL双蒸水中，调pH至6.8，再用 双蒸水定容至100mL，于4°C下保存备用。 （7）0.0252%七水硫酸亚铁溶液：称0.0252g七水硫酸亚铁溶于100mL双 蒸水中即可。
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用两块普通玻璃作为制备板框的材料。大小为23×23×0.3cm的方 形玻璃一块，23×23×0.3cm的凹型玻璃一块。
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◆ 点样：先将提取的 A和B溶解在含有7.5％可溶性淀粉的双 蒸水中，取20uL样品点样，marker的尺度为3到10 ◆ 不连续电泳：电泳开始前，加0.2%溴酚蓝作指示剂。采用 不连续电泳，初始电压为161V，电流为32mA，时间1小时 35分钟，当溴酚蓝通过浓缩胶与分离胶界面时，立即将电 压升高至200V，电流为32mA，时间1小时35分钟，时间为 4小时30分钟，待溴酚蓝电泳至凝胶底部时，电泳结束， 电泳时间约6小时。