Bradford法测定蛋白质的浓度
原理
Bradford测定蛋白质浓度的方法和考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度一样，是利用蛋白质-染料结合的原理，定量地测定微量蛋白质浓度的快速灵敏的方法。

该法是根据最常用的两种蛋白浓度检测方法之一Bradford法研制而成，实现了蛋白浓度测定的快速，稳定和高灵敏度。

利用此方法检测速度极快，10～20个样品只需不足10分钟即可完成。

灵敏度高，检测浓度下限达到25ug/ml,最小检测蛋白量达到
0.5ug,待测样品体积为1～20ul。

且在50～1000 ug/ml浓度范围内有较好的线性关系。

Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。

样品中-巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。

但受略高浓度的去垢剂影响。

需确保SDS低于
0.01%，Triton X-100低于
0.05%，Tween 20, 60, 80低于
0.015%。

试剂和仪器
一、试剂
试剂盒自备：
G250染色液、BSA标准蛋白。

BSA标准蛋白浓度已稀释至500μg/ml，-20℃保存。

二、测试样品
待测样品蛋白浓度稀释在50-500μg/ml范围内为宜。

三、仪器
96孔酶标、酶标仪。

操作方法
标准品编号
500ug/mlBSA/μl
蒸馏水/μl10302
1.5
28.45
12
186
6830
0分别于小离心管中混匀后，取20μl加入到对应酶标孔中待测样品编号31415……待测样品稀释后，各取20μl加入到相应酶标孔中G250/μl200μl/孔
反应3-5min
1.用酶标仪测定A595nm处的吸光值。

2.根据标准曲线计算待测样品的蛋白浓度。