病理科免疫组化在临床上得应用及其意义免疫组化技术就是以免疫学得抗原抗体反应为其理论基础发展起来得一门方法学,在生物学领域尤其就是在医学得基础与临床研究中发挥重要得作用,对疾病尤其就是肿瘤得诊断、鉴别诊断及发病机制得研究提供了强有力得手段、免疫组化技术就是２0世纪70年代初Sｔeｒb Bergｅr 在酶标法得基础上发明得,80年代在外国开始应用于临床研究与诊断,90年代初在我国逐渐开始应用于疑难病例得诊断与鉴别诊断。
随着新技术得不断发展,抗体种类从研发开始得十几种发展到目前数百种抗体应用于临床科研得各个领域,我国在临床病理诊断上可用抗体293种。
由于抗体较昂贵,所以各院根据活检量与病种不同选择不同得抗体,这些抗体对大部分疑难病例得诊断起到重要得辅助作用、对病人得预后及指导治疗具有重要得意义。
一、目前常用得抗体分四大类１。
上皮性标记物:ＣＫhigh(AE3), CK loｗ,CＫ－paｎ,CK1９,ＣＫ7, CＫ20,EMＡ,CEA,－CA １5-３,SCLC , E—Ｃalｄeｈerin,CA125, Tg(甲状腺球蛋白) ,TTＦ—1ﻫAＦP。
这些抗体阳性,表明肿瘤组织起源于上皮组织,如果就是恶性肿瘤,就就是癌2ﻫ.间叶组织标记物:SMA ,Dｅsｍｉｎ,Ｖiｍｅｎtｉn,Lysｏzymｅ,AAＣT, CD68 MｙoD1,CＤ11７,这些抗体阳性,表明肿瘤组织起源于间叶组织,如果就是恶性肿瘤,就就是肉瘤、3ﻫ、神经及神经内分泌标记物:CgA ,Ｓｙnaptｏphyｓin,NSＥ,S－１00:NF (神经纤维丝蛋白),GFＡP,CD９9,CD56、4淋巴细胞标志物:T ceｌl标记物:CD3, CＤ45ＲＯ, CD43,CＤ5, CD8,ＣD4,ALK,GｒａｎmB , CD５6 。
ﻫＢｃell标记物:CＤ—20 ,CD79a,CD2３, ＣD10,Ｋappa ,Laｍｂｄa ＣD2１CD38 ,CyｃlinD1 ,Bcl—2。
ﻫ其它:LCA,ＣD1５,ＣD3０,MPO,CD3４,TｄＴ,这些抗体用于淋巴瘤33个亚型得诊断与鉴别诊断。
ﻫ二、目前开展得系列检查与意义1。
乳腺癌五项(ＥR、PR、C—ｅｒbB-２(Her－2)、Ki—6７、Ｐ53)ER、PR阳性,90％得病人对三苯氧胺类药物疗效好。
C-ｅｒｂB-2阳性(2+—3+)可服用抗Her—２基因药物。
如果ER与ＰR均阴性,Ｃ－eｒbB－2强阳性预示预后不好。
Ki—6７就是细胞生长指数,代表细胞周期中除G０期以外得细胞生长速度。
Ｋi—67值越高表明肿瘤细胞生长越快,预后越不好。
Ｐ5３就是广谱致癌基因,在许多肿瘤中都有表达,表达值越高预后越不好。
据报道,国际上目前有抗P53基因阳性得药物用于治疗肿瘤。
2。
垂体腺瘤功能六项检查ＬH( 促黄体生成素),ＦSＨ(卵泡刺激素),ACTH(促肾上腺皮质激素),ＴSH( 促甲状腺素),PR Ｌ(泌乳素)GH(生长激素) 。
根据某一种抗体阳性表达进行术后药物治疗。
３.恶性肿瘤得Kｉ—6７与P53常规检查目前得研究表明,大部肿瘤得复发、转移取决于Ki—67值与Ｐ５3值,而与肿瘤得组织得分型关系不就是十分密切,如中分化腺癌,如果Ki-6７与P５3值超过50％,预后不佳,相反,如肿瘤得组织分型为低分化腺癌,而Ki－67与P53值较低,预后也会较中分化或高分化癌得预后稍好。
4ﻫ.GIST(胃肠道间质瘤)与EGIＳＴ(胃肠道外间质瘤)得诊断ﻫGIＳT就是90年代新发现得肿瘤,过去均诊断为平滑肌瘤或平滑肌肉瘤,现在经过一组免疫组化可将其诊断,GIST得生物学形为一般无良性,因为小于２cｍ得ＧＩST偶而也有转移。
其良恶性程度取决于肿瘤得大小与核分裂像,国际确定GI ＳT侵袭行为危险性得推荐方案如下:危险程度大小核分裂数ﻫ很低〈2ｃm <５/５０HPＦﻫ低2－５cｍ〈５/５0HＰF中等<5cm5-10cm 6—１0/5０ＨPF〈5/５0ＨＰFﻫ高〉5cm＞10cm不计>5/50ＨＰF不计>10／50HPＦﻫＧIST得免疫组化结果为:ＣD1１7(+)、ＣD34(±)、S—100(±)Actin(±)、Deｓmｉn(—)、ＣD１17阳性可用格林卫治疗,且效果较好。
５。
淋巴瘤得ＷＨO分型ﻫ淋巴瘤WHO最新分型有33个亚型,每个亚型得预后与治疗方案均有所不同,而淋巴瘤得诊断与分型又就是极其困难得,就是病理中得难中之难,“没有一个病理学家不在淋巴瘤上犯错误"这就是我国一位病理名家说得话,美国得淋巴瘤误诊率为33%,所以诊断淋巴瘤得免疫组化方案必须“双份套餐式”得,即每一种组织得标记物必须用2种以上得抗体,如我们诊断B细胞淋巴瘤,必须有CD２0与CD79a阳性正面证实,同时还需要用CD3阴性反面来证实,因此诊断淋巴瘤需８—10种左右得抗体,才能准确地反应出淋巴瘤各种亚型得信息。
ﻫ三、免疫组化在肿瘤靶向治疗中得作用ﻫ１、目前肿瘤得靶向治疗已经引起人们得重视,许多靶向药物逐渐应用于临床治疗。
第一个靶向治疗得药物就是治疗淋巴瘤得抗CD２0嵌与性抗体就是Ｒituxan。
抗肿瘤单抗偶联物Ｚevalin(Iｂrｉtumｏｍab tｉｕxetａn)用于Rｉtuxan治疗无效或复发得低度恶性Ｂ细胞瘤。
2。
抗血管内皮生长因子(ＶEGF)重组人源化单抗Aｖａstin(Ｂevaｃiｚｕｍab)有抗肿瘤内新生血管形成作用,最近被批准为治疗转移性结直肠癌得一线药物、3.抗表皮生长因子受体(EGＦR)嵌合性单抗Ｅrbiｔuｘ(Cｅtuximab)用于治疗标准化疗无效,且EGFR阳性得转移性结直肠癌。
４.抗C－ｋit(CD117)得药物格林卫对治疗大部分GＩSＴ有明显得疗效、5ﻫ.Herｃeptｉn就是一种人源化单抗用于治疗Heｒ—２高表达得乳腺癌与其它实体瘤如卵巢癌、前列腺癌与非小细胞肺癌。
因为有了这些靶向药物得治疗,因此在病理上检测这些靶基因得表达对于指导临床用药非常有意义。
34ＢＥ12:角收白抗体,阳性提示良性病变。
前列腺抗基底细胞特异抗体(34ＢE12)就是一种高分子量细胞角蛋白抗体,它标记前列腺基底细胞阳性率高,而恶性分泌上皮细胞阴性,前列腺基底细胞存在与否就是判断癌与非癌得一个重要标志,34BE12明确阳性者都应诊断良性,侵润性前列腺癌34BE12阴性。
ﻫＰ63:抑癌基因,阳性提示良性病变。
就是一种新近认识得基底细胞标记物,与Ｐ５3具有同源性,染基底细胞比34BE12更敏感,因P５３在良性增生、萎缩、腺病与不典型增生中可有假阴性,而P63几乎均呈阳性,在疑难得前列腺病变中应用P６3或P63加34ＢE12得混合试剂检测对诊断更有帮助。
ﻫP５０4S:一前列腺癌得新标记,即使在小得针刺活检中癌得P504S阳性率仍为95％,而良性腺体(萎缩、腺病、硬化性腺病与基底细胞增生)均阴性,与３４ＢＥ12及P６3染色结果正相反,三者联合应用对比明显,对前列腺良恶性病变得诊断很有帮助。
ﻫﻫKｉ—６7:为细胞增值得一种标记,在细胞周期G1、S、G２、M期均有表达,G0期缺如,其与许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。
PCNA:增埴细胞核抗原。
ﻫCEA:多数腺癌表达。
ﻫRb:(ｒetinobｌastｏma视网膜母细胞瘤)基因就是肿瘤抑制基因,调节细胞周期。
P５3:在免疫组化中均为突变型,阳性率越高,预后约差。
野生型半衰期很短。
ﻫNm23:就是转移抑制基因,其阳性表达与肿瘤转移呈负相关。
E—Cａ,E钙粘附蛋白,介导细胞间粘连作用得跨膜糖蛋白,其功能丧失引起细胞之间连接得破坏,主要用于肿瘤侵袭与转移方面得研究、ﻫﻫＰS2:(雌激素调节蛋白),其表达与ER表达有关,可作为内分泌治疗与预后判断得指标之一。
ﻫﻫCK１8:低分子量角蛋白,主要标记各种单层上皮包括腺上皮,而复层鳞状上皮常阴性,主要用于腺癌诊断。
ﻫﻫＣK19:分布于单层上皮与间皮,常用于腺癌诊断,肝细胞不表达,而胆管为阳性反应。
Hｅpｐａｒ1:肝细胞抗原,正常肝细胞与高分化肝细胞癌阳性,低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。
ﻫCK２0:用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤Ｍerkｅl细胞癌诊断。
鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜与卵巢非黏液性肿瘤常阴性。
ﻫﻫＣK7:卵巢、肺与乳腺上皮常阳性,结肠、前列腺、胃肠道上皮阴性。
ﻫﻫＶillin:绒毛蛋白,正常组织中,ｖillin通常只表达于有刷状缘得细胞上,如胃肠道上皮细胞、胰腺与胆管上皮细胞以及肾实质得上皮细胞中(特别就是近曲小管)、Vｉｌlｉn在胃肠道癌、胰腺癌、胆囊癌与胆管癌组织中有很高得表达率,具有明显腺样结构得肿瘤上没有ｖilｌin 表达,则这个肿瘤为胃肠道、胰腺、胆囊或胆管来源得可能性极低、ﻫ乳腺癌也经常成为女性患者未知原发部位转移癌要鉴别排除得一种疾病。
因为在转移癌组织上观察到明显得ｖｉｌｌin免疫组化阳性染色,则这个肿瘤就极不可能为乳腺来源。
其她vｉllｉｎ免疫组化染色通常为阴性表达得肿瘤还有:如卵巢浆液性癌、尿道移行细胞癌与前列腺癌。
间皮瘤也经常为villiｎ阴性表达,因此在一些情况下Villｉｎ还可以作为鉴别间皮瘤与腺癌使用抗体得一种。
但就是也有一些非胃肠道来源得肿瘤可表达villiｎ,如子宫内膜样腺癌、卵巢粘液性癌、肾细胞癌与小部分肺癌、也有一些专家报道Villin在部分宫颈内膜腺癌病例中表达。
ﻫﻫ肝癌得诊断:Villiｎ免疫组化染色可以显示出毛细胆管结构,因此它也可能在表达部分肝癌得管状结构上很有用。
多克隆ＣEA就是用于此目得得第一种试剂,而且CD10(ＣALLA)在表达肝癌得该结构上也非常有用、多克隆CEA、ｖillｉn与CＤ1０(CALLA)在肝癌病例上得表达,相互之间并没有任何得冲突,因此如果怀疑肝癌得可能性,建议将这三种抗体共同使用以协助疑难病例得诊断。
ﻫViｌlin在神经内分泌肿瘤上得应用:Vilｌｉn在神经内分泌肿瘤得研究上也很有帮助。
众所周知,类癌与胰腺得胰岛细胞肿瘤具有相相似得形态学特征,仅在形态学上区分这两种肿瘤几乎就是不可能得。
Vilｌin在这种情况下特别有用,因为据文献报道在85％得胃肠道类癌病例中有ｖillin得表达,但在胰岛细胞肿瘤上未见阳性表达报道、Viｌｌin在类癌上得表达通常为胞膜阳性。
另外,有一些证据表明villiｎ在胃与下消化道得小细胞癌上得表达率比在其她部位得小细胞癌上要高、如:肺、食道、膀胱或前列腺等、据文献报道,大约有40%得肺类癌病例villｉｎ阳性,在其她一些神经内分泌肿瘤上,如甲状腺髓样癌与少数得美克尔细胞瘤上也有villin得表达。
ﻫMRP1:多药耐药相关蛋白1,影响化疗敏感性,与预后相关。
MDＲ多药耐药基因、ﻫﻫTS:胸苷合成酶,就是5－FU重要作用靶点,如果其高表达,阳性反映＋+以上,提示肿瘤细胞对5FU耐药。