须冲洗干净。
离心机的使用
打开电源开关； 平衡放置离心管；盖上盖子。 调节时间旋钮至10min； 缓慢调节速度旋钮至9档，每5-10s上升1档； 离心完毕后机器自动停止，待完全停止后，打开盖子取出离心管。 离心管必须平衡后，才能启动离心机； 离心机的盖子必须盖紧；


离心过程中不要用重物撞击离心机；
兔肝脱氧核糖核酸（DNA）的提取和测定
实验目的 学习从动物组织中提取DNA及其含量、纯度测定的原 理和方法 掌握离心机的使用方法
实验原理
在0.15M的氯化钠溶液中脱氧核糖核蛋白的溶解度最低。 用0.15M氯化钠溶液洗涤可洗去其它物质。 沉淀用SDS处理，SDS使蛋白质与DNA解离，再用氯仿 －异丙醇抽提，将蛋白质沉淀除去，而DNA则溶解。 DNA溶液用乙醇沉淀析出。
加入15% SDS时要慢，边搅边滴加（两人配合）。
SDS的温度不能太低，易凝固。吸过SDS的吸管要及时清洗。
加入CHCl3/IAA液离心后，分为三层，由上到下为：无机相-蛋白
相-有机相。DNA溶解在无机相中，吸取无机相时动作要轻，不要
吸到蛋白相。
CHCl3/IAA会溶解有机玻璃，用完后不能竖直放置在试管架上，必
加 0.15M NaCl-0.1M Na2EDTA至4ml 轻搅 10min 加塞反复 倒置抽提 10min 重复 一次
DNA析出
逐滴加入0.5ml 15% SDS
用玻棒挑出
搅拌10min
去塞！离心
挑取DNA至一离 心管(小烧杯)用10ml 0.01N NaOH溶解
加1ml 5M NaCl
吸取上清液 勿吸到中间层！
要等离心机完全停止转动后再打开盖子。
二苯胺显色法测定DNA含量
实验原理
DNA的α-脱氧核糖在酸性条件下转变成ω-羟基-r酮基戊
醛，与二苯胺共热后形成蓝色化合物，该化合物在 595nm处最大吸收。每ml含20－400µ g范围内光密度与 DNA的浓度成正比。用标准曲线法测定DNA含量。 用生物分光光度计（用紫外光度法）分析DNA含量与 纯度
注意事项
尽可能避免DNA的断裂 1. 匀浆时应保持低温，且匀浆时间应短； 2. 实验中使用的吸取DNA水溶液的滴管口应粗短并成钝口。 保持DNA活性，避免酸碱或其他变性因素使DNA变性。 搅动不要太大，以免使DNA断裂。 整个实验过程应在低温条件下进行。 搅拌时动作要轻，反复倒置抽提，不可激烈振荡。
实验操作
1. 弃上清留沉淀
兔肝
离心
1X SSC洗 两次
加至8ml 1X SSC
3.弃上清留沉淀 （脱氧核糖核蛋白）
称取4 g 加 8ml பைடு நூலகம்X SSC
离心
匀浆、过滤
2.弃上清留沉淀
取8ml匀浆液 离心
加至 8ml 0.15M NaCl-0.1M Na2EDTA
沉淀
等体积氯仿-异 丙醇混合液
加约2倍 体积 95% 乙醇
相当于该光密度值DNA的含量。
核酸紫外吸收的测定
核酸在220-320nm处呈特征性吸收，在260nm处有最 大吸收，测A260/A280可得知核酸的大致纯度。 A260/A280 ≈1.8 > 1.8 < 1.8 表示DNA纯 RNA含量高 蛋白含量高
实验操作
以0.01N NaOH 为空白管，调零，按“blank”。样品池中加 入样品，按“sample”，记录样品液的A260/A280比值和DNA浓度。
实验操作
取8支试管，按实验指导的表格加入试剂。 加毕置沸水浴10分钟，取出冷却；以0号管（空白管）调零点，于 595nm波长比色。 以光密度为纵坐标，DNA含量（µ g/ml）为横坐标，绘制标准曲线. 将实验中所得到的兔肝DNA溶液作为待测样品，取两只试管，分别标 “U”和“B”，按表加入试剂。 混匀，置沸水中10min, 取出冷却。 在595nm处，以B管调零，测得待测液的光密度值，从标准曲线上查出