l 把上述样品的分析应用到组中，在Flow Jo软件界面中单击打开布局编辑器，在工作台的样品空间把 “分析的细胞群体结点”拖入布局编辑器中，单击布局编辑器右上角的Batch工具。输出整个实验 组的数据。如（图五 ）所示
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张千 君
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（图一 ）
FlowJo分 析细胞周期数据 的过程
1. 把细胞周期样品拖入FlowJo软件，双击打开原始数据。如(图二)所示：
(图 二 )
X轴选择FSC,Y轴选择SSC。分析细胞周期的细胞选择上图所示的细胞群体进行分析。 2. 在SSC/FSC图中双击分析的细胞群体，如（图三 ）所示：
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Flow Jo软件分析细胞周期样品
细胞周期检 测的原理：
核酸染料可以与DNA分子特异性的结合，细胞周期检测中PI最为常用。PI为插入性核酸荧光染料，能选择 性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流 式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。 细胞周期示意图如（图一 ）所示
已有 1394 次阅读 2012-3-20 12:20 | 个人分类:FlowJo使用 | 系统分类:科研笔记 | 关键词:FLOWJO软件, 流式数据，细胞周期分析，
Flow Jo软件分析细胞周期样品
作 者 ： 胡 金涛
细胞周期的检测是流式细胞仪最为广泛的应用之一。细胞周期是指以有丝分裂方式增殖的细胞从亲代 分裂结束到子细胞分裂结束所经历的过程。通常由G0/G1期、S期、G2期和M期组成。G1期：细胞开始 RNA和蛋白质的合成，但DNA含量仍保持二倍体。S期：DNA开始合成，这时细胞核内DNA的含量介于 G1期和G2期之间。当DNA复制结束成为4倍体时，细胞进入G2期。G2期的细胞继续合成RNA及蛋白质， 直到进入M期。因此，单纯从DNA含量无法区分G2期和M期。一旦有丝分裂发生，细胞分裂成两个细胞， 这两个细胞或者进入下一个细胞周期，或者进入静止期（G0期），而G0期从DNA含量上同样无法与G1期 区分。因此，整个复制周期可以描述为G0/G1、S、G2/M期。通过核酸染料PI标记DNA,并由流式细胞仪 进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%、S%、G2/M%，了解增殖能力，在肿瘤 病理学研究中，通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。
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GMT+8, 2012-10-18 15:07
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通常来说，G2的位置为G1的2倍。 你可以根据相对固定的那个峰来确定另外一个峰的位置，如G1峰相 对固定的话，就选择G2峰的均数为G1的2倍(2G1)；如果G2峰相对固定的话，就选择G1峰为G2峰 的0.5G2
细 胞 周 期结 果 分 析 ：
4. 图三中各个区域的含义：
l G1期含义：细胞进行大量物质合成时期，为DNA合成做准备。 l S期含义：开始至完成DNA的合成以及合成组蛋白。 l G2/M期的含义：DNA复制结束和开始有丝分裂之间的间隙。
当的调整。
曲线调整原则：粉色的曲线为模型曲线，黑色的为样本曲线，理想状况是粉色和黑色曲线吻合一致为最 佳。拟和的好坏可以根据右边的RMS值来判断。RMS(root mean square)值越小越好。但是这只是 一个相对值，只在同样本不同模拟情况下，选取最小值来达到最佳拟和。你可以选中G1期的峰或 G2期的峰，根据调节按钮调节峰的宽度
3. 在FlowJo工作台中选中“用于周期分析的二倍体细胞”这个结点，在工具栏的“工具”中选择“细胞 周期”。 如（图四 ）所示
说明：
（图四 ）
1) 分析的模型有Watson和DJF两种，用户可以选择任意一种进行分析，两模型间没有实质的差别。模式
右边是两种模型的显示方式。
2) 细胞周期拟合原则：G1峰限制和G2峰限制。根据实验结果拟合情况，对G1峰限制和G2峰限制进行适
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（图五）
细胞周期FCS原始数据下载： 细胞周期A.LMD 细胞周期B.LMD
细胞周期C.LMD
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（图三 ）
X轴选择FL3-LIN,用来表示PI的线性信号。Y轴选择FL3-PEAK,用来表示PI的峰值信号。本实验数据采集采 用的是贝克曼仪器采集的数据。（如果是BD的仪器采集的数据 ，X轴选择FL2-W,用来表 示PI的宽度 信 号。Y轴 选择FL2-A,用来表 示PI的 面积信号），如上图所示多倍体或异倍体细胞不予分析。
l Ploidy:倍体。原指染色体数目。流式中用来描述总的DNA含量。二倍体细胞有正常细胞的DNA 含量 但不排除染色体的异常。
l S期含量 :S期细胞占总细胞周期的比例。
细 胞 周 期数 据 结 果 输 出
6. 细胞周期结果的输出根据最终的需求可以有多种输出方式
l 在细胞周期分析窗口工具栏中选择“文件”并单击，选择下拉菜单中的“另存为”，选择保存位置、 重新命名文件名以及文件保存的文件类型（SVG、PNG、EMF、JPG）。
l 通常，根据G1期、S期 、G2期的百分含量来判断细胞周期的变化。相对于正常的细胞，加药 或 者 照 射 的细 胞 的 周 期 可 能会 发 生 变 。 一 般 根 据S+G2期 的 百 分 含 量 判断 处 理 后 的细 胞 是 促 进增 殖还是抑制增殖。
5. 细胞周期分析常用术语：
l CV：变异系数。不同细胞群体DNA含量的细微差别可能有生物学上的重要意义，因此DNA含量的流 式分析中分辨率尤其关键。通常检测分辨率或精度由G0/G1峰的CV来反映。影响CV的因素主要 包括两方面：仪器因素和样品制备及染色过程对标本的人为影响。
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