血清直接胆红素DBIL测定
1.实验原理
直接胆红素与2,4-二氯苯胺重氮盐形成重氮化合物，在酸性条件下呈红色。
2.标本：
2.1病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。
3.标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。
4.标本运输：常温条件下避光保存运输。
5.标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。
6.实验材料
6.1试剂：申能总胆红素试剂盒：14108271701 试剂＋试剂2 6.1.1试剂组成
试剂1：16×64ml
EDTA-Na20.07mmol/L
氯化钠6.6g/L
氨基磺酸70mmol/L
试剂2：6×16ml
2,4-二氯苯胺重氮盐0.09mmol/L
盐酸130mmol/L
EDTA-Na20.02mmol/L
6.1.2试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为18个月。
试剂2必需避光保存。
试剂不可冰冻。
6.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.5注意事项：此试剂为体外诊断用。
警告！腐蚀剂！不要入口。
避免和眼睛，皮肤或衣服接触。
如果接触到，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟。
接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。
6.2校准品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
6.3质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
7.仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪
8.操作步骤
8.1项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件
检验结果的判断与分析
10.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控
图，判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11.计算方法以TruCalU复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算，以μmol/L报告。
手工测定计算方法为：
△Au
直接胆红素(μmol/L)=--------×校准液浓度
△As
12.参考值范围：≤6.8mol/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
13.临床意义：胆红素是血红蛋白的降解产物。
游离胆红素非极性很强，几乎不溶解于水。
在血液中与白蛋白形成复合物由脾脏向肝脏运输。
在肝脏中，胆红素与葡萄糖醛酸结合,生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸酯由胆管排入肠道。
溶血（肝前黄疸）、实质的肝损伤（肝性黄疸）和胆管堵塞（肝后黄疸）都会导致血液胆红素增高，形成高胆红素血症。
人群中常见先天性慢性高胆红素血症，称为Gilbert综合症。
由于胆红素降解酶的功能滞后以及出生后红细胞破碎增多，使60～70%的婴儿血液出现总胆红素增高。
常用的胆红素检测方法能检测总胆红素和直接胆红素。
直接胆红素的测定主要检测水溶性的结合胆红素，因此可以根据总胆红素和直接胆红素的差来估计游离胆红素的含量。
14.操作性能
14.1线性范围：1.7～171mol/L
14.2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法5，AU1000批内精密度小于4%或SD≤0.04，总精密度小于5%或SD≤0.07。
用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。
批内精密度
n=20 x
(μ
mol/L)
s
(μ
mol/L)
CV
(%)
批间精密
度
n=20
x
(μ
mol/L)
s
(μ
mol/L)
CV
(%)
样品1 6.0 0.20 3.34 样品1 6.2 0.19 3.12 样品2 12.8 0.12 1.00 样品2 13.0 0.19 1.46 样品3 36.4 0.26 0.71 样品3 35.4 0.46 1.30 14.3方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对85个样品进行DBIL检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.95x+0.68μmol/L；r=0.995。
14.4灵敏度：1.7mol/L。
14.5病人结果可报告范围：1.7～171μmol/L
15超出范围结果处理本法线性上限为171mol/L。
样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。
16.病危报警值的处理无。
17.方法局限性
17.1本法线性上限为171mol/L。
样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。
17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L，甘油三酯浓度≤22.6mmol/L时没有观察到干扰。
血红蛋白浓度≥0.50g/L将产
生干扰。
18.补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。
19.参考文献：
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NCCLS,InterferenceTestinginClinicalChemistry,EP7-P,1986.
Young,D.S.,EffectsofDrugsonClinicalLaboratoryTests,4thEdition,AACCPr ess,1995.
NCCLS,EvaluationProtocolEP5-T2,1992.
Rand,R.N.,DIPasque,A.,ClinChem1962;8:570
Henry,J.,Cannon,D.C.,Winkelmann,J.V.,Clinicalchemistry,principlesandt echnics,Harper&RowPublishersIns.,HagerstownMaryland,1974:1042 Thomas,L.:Laboranddiagnose,4thedition,DieMedizinischeVerlagsgesell schaft,Marburg,1992:235
20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。