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肺脾气虚动物模型造模方法

一、肺脾气虚动物模型的复制方法:
模型的建立方法:模型组采用<实用中医证侯动物模型学》之"烟熏法肺气虚证动物模型"复制法,并复合木瓜蛋白酶雾化吸人法复制SD大鼠"肺气虚证"模型。

番泻叶冷服泻下法复制"脾气虚证"模型。

具体方法如下:将以上3组大鼠分别置于特制的lm3烟室中。

用刨花、锯末、烟叶各30-50g,另加硫磺5-10g,点燃烟熏,每日2次,每次30分钟,注意适当通风,以防大鼠窒息。

造模期6o天。

并于造模开始后第3o、32、34、36天给以上各组大鼠木瓜蛋白酶雾化吸人,具体方法如下:在大鼠清醒状态下,每次将5只大鼠放入一40×40×40cm的与超声波雾化器相连的透明雾化箱中,通过雾化管向箱中喷入用0.9%Nacl液稀释为3g的木瓜蛋白酶,每次雾化量2ml。

造模第20天开始,以浓度为lg/ml冰冷的番泻叶浸液,按lml/100g体重的剂量给大鼠灌胃,每日1次,持续3o天。

正常对照组,分室常规喂养,不做任何处理。

参考文献:李亚光,曹柏龙,贾东岩.慢性阻塞性肺疾病"肺脾气虚证"复合证型动物模型的研究.内蒙古中医药,2005年第5期:18-19.
二、肺气虚动物模型的复制方法:
1. 造模方法:气管内注入脂多糖(LPS)并烟熏方法复制肺气肿/COPD肺气虚证大鼠模型。

(此法最常用)
具体方法:于模型复制的第1和14天用10%水合氯醛腹腔麻醉后,行气管内注入LPS200ug /200ul,庆大霉素局部抗炎,缝合皮肤并消毒。

术后第2~13、15~28天,置于1 m×1 m ×1 m的烟室中,香烟(焦油量为12 mg,烟气烟碱量为1.1 mg)烟熏,每日30 min;自由进食、饮水。

对照组:将每只大鼠于第1、14天气管内注入0.9%氯化钠注射液200 u1;于第2~13、15-28天,置于无烟熏同样环境中饲养,余法同模型组。

参考文献:
王哲,王春田,任艳玲.肺气虚模型大鼠血ET、IL一1β及TNF-α含量的变化.中国老年学杂志,2008,12月第28卷:2414-2416.
刘向国,方志斌,蔡圣荣,肺气肿肺气虚证模型大鼠肺组织中基质金属蛋白酶表达的变化. 中国中医药科技,2006,13( 5):289-291.
刘茜,刘向国,武松. 肺气肿肺气虚证模型大鼠胸腺指数、脾脏指数变化的实验研究. 甘肃中医学院学报, 2006,23(1):20-22.
李泽庚,彭波,杰根.肺气虚证模型大鼠的建立. 北京中医,2005,24(1):53-55.
2.方法:用烟熏并复合木瓜蛋白酶雾化吸入法复制COPD"肺气虚证"大鼠模型。

具体方法:动物造模采用《实用中医证候动物模型学》之"烟熏法肺气虚证动物模型"复制法,并复合木瓜蛋白酶雾化吸人法,复制SD大鼠"肺气虚证"COPD模型。

每5只大鼠置于自制透明塑料箱中,用刨花、锯末、烟叶各30~50g,另加硫磺5~10g,点燃烟熏,每日2次,每次30min,注意适当通风,以防大鼠窒息。

并于造模开始后第30、32、34、36天将超声波雾化器与透明塑料箱相连,通过雾化管向箱中大鼠喷人浓度为0.3%的木瓜蛋白酶,每5只大鼠2mL。

造模期60天。

正常对照组置于正常无烟环境中饲养。

参考文献:张葵,刘良丽, 欧江琴.COPD肺气虚证模型大鼠血清TNF-αIL-8的表达和意义,
辽宁中医药大学学报.2008,10(6):200-201.
3.造模方法:SO2吸入复制肺气虚模型。

具体方法:取本院动物房健康小白鼠(体重20~30 g)为造型对象,实验期间喂养等同实验前,实验分批进行。

每批5只,置于玻璃罩内,以1%SO 2吸入30秒/每次.1次/每天,连续20天。

设空白对照组.
参考文献:陆和屏,齐幼龄.肺气虚动物模型的实验研究. 中国病理生理杂志,1996,12,(6):622-622.
4. 造模方法:采用风寒和二氧化硫吸入综合刺激复制大鼠肺气虚证模型。

具体方法:采用风寒和二氧化硫(SO2)综合刺激。

SO2刺激量为200-250ppm,每日刺激1小时,持续13天。

风寒刺激用低于太鼠生活环境温度5℃的冷风,每日刺激15分钟,持续13天,每次在SO2刺激结束后即
进行风寒刺激。

肺气虚组和喂药组大鼠进行刺激,其余组大鼠不进行。

刺激在动物实验室进行,动物实验室温度为19-21℃,相对湿度为70-76% 。

参考文献:徐锡鸿,孔繁智. 大鼠肺气虚"证"模型的建立.中医杂志,1994, 35(4):230-232.
5、单纯烟熏方法复制肺气虚大鼠模型。

具体方法:将实验小鼠随机分为造型组和对照组造型组小鼠每日上午置于静式染毒柜内,用香烟烟熏,连续2支,每支香烟约燃烟10分钟,两支香烟之间间隔5分钟,每周连续6天。

对照组动物除不用香烟烟薰,其他条件与造型组相同,实验在室温(16℃~22℃)中进行。

参考文献:彭国瑞,许志奇,曾详国."肺气虚"型慢性支气管炎动物模型的实验研究.北京实验动物科学与管理, 1994, 11( 3: 31-33.
三、脾气虚大鼠模型的复制:
1.方法:以大黄法、游泳力竭法、饥饿法三因素复合的方法复制脾气虚证大鼠模型。

(此法最常用)
具体方法:每日上午以3ml/只灌服大黄制液,1次/d;每日下午将动物负重,于大鼠尾根部缠绕重量为大鼠体重10%的保险丝,放入水深50cm、水温20℃的水槽中游泳,以力竭为度,即大鼠鼻尖没入水面10秒,1次/d;控制饮食,每日上午8:00给食,下午8:00撤食。

正常组每天上午以3ml/只灌服生理盐水,1次/d,自由饮食,共21d。

参考文献:
胡久略,贺又舜.参苓白术散对脾气虚证大鼠血清胃泌素影响的实验研究.时珍国医国药,2010,21(12):3346-3347.
宋红,郑小伟,王颖.多因素复合建立脾气虚证大鼠模型及以方测证研究.浙江中医杂志, 2008,43(3):136-138.
郑小伟,王颖, 宋红.三种脾气虚证模型大鼠血清胃泌素及胃窦G细胞的比较研究. 中华中医药杂志,2OO6,21(6):338-340.
2. 运用小承气汤加饥饱失常法复制脾气虚证的动物模型
具体方法:脾气虚模型的建立与分组SD大鼠9O只,随机分为15组,每组6只。

空白组:生理盐水4 ml灌服,隔日1次,连续42 d;脾气虚证模型组:小承气汤煎液4 ml(1 ml药液含原生药0.25 g)隔日灌胃1次,喂药当日禁食,饮水不限,次日喂饲不限,连续42天,复制脾气虚模型;余为白术茯苓汤组;总多糖高、中、低剂量组;总络合物高、中、低剂
量组;白术内酯Ⅲ高、中、低剂量组,上述3组分配伍之高、中、低剂量组,均于第43天分别给予相应浓度药液4 ml,1次d/,连续7 d。

参考文献:罗云波,贾波,祝捷. 白术茯苓汤及水煎液提取分离组分对脾气虚大鼠VIP受体的影响. 时珍国医国药,2010,21(5):1045-1046.
3. 方法:体质筛选、苦寒泻下加耗气破气降气法。

造模方药制作:方1:生大黄:厚朴:枳实=2:1:1,大黄后下,常规制成200%煎剂。

方2:广豆根:旋复花:槟榔=3:1:1,常规制成250%浓度煎剂。

药化饲料:用方1,常规制成浓度750g/600mL煎液。

每600mL药液加入6000g原饲料粉中,按SPF饲料规范制成药化饲料。

药化饮水:旋复花:槟榔= 1:1。

常规制成l6.7%(50g /300mL)煎液。

造模方法:先采用游泳时间法测定体质,体质弱者用于造模(详后)。

方1和方2分别于4~C 交
替灌喂,4mid只,次,方1和方2灌喂次数按3/2比例,造模前18d 3次,d,后12d 4次,d。

每两次灌喂间隔≥3.5h。

同时以药化饲料自由喂饲,药化饮水自由饮用。

造模30d。

参考文献:周永生,樊雅莉,陈小野.脾气虚证动物模型规范化的初步研究--分免疫功能方面.实验动物科学与管理, 2003,20(2):1-5.
4.其他方法:
5种方法均造模12d。

大黄模型:生大黄,后下,常规制成200%煎剂。

室温下灌喂,每天6ml/只, d (1次)。

耗气破气模型:厚朴:枳实:生大黄=3:3:2,常规制成200%煎剂。

室温下灌喂,6ml/只,d(1
次)。

限量营养模型:按对照组食量的半量(9g/只,d,以笼为单位)饲料喂饲。

劳倦过度模型:游泳消耗体力法。

22℃水温,动物游泳至连续"冒泡"5次终止。

2次/d,两次间隔5h。

利血平模型:利血平注射液,腹侧皮下注射,0.15mg/kg, bw/d,1次/d。

参考文献:周永生,樊雅莉,陈小野.脾气虚证动物模型规范化的初步研究--分免疫功能方面.实验动物科学与管理, 2003,20(2):1-5.。

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