上海百贺仪器科技有限公司提供ｗｗｗ．ｓｏｕｔｈｈｋ．ｃｎ
紫外分光光度法测定蛋白质含量
摘要：
考马斯亮兰G250与蛋白质结合，在0－1000ug/ml范围内，于波长595nm
处的吸光度与蛋白质含量成正比，可用于蛋白质含量的测定。

考马斯亮兰G250
与蛋白质结合迅速，结合产物在室温下10分钟内较为稳定，是一种较好的蛋白
质定量测定方法。

1.实验部分
1.1仪器与试剂：
Labtech UV POWER紫外分光光度计；玻璃比色皿一套；考马斯亮蓝G250；
牛血清蛋白；超纯水。

1.2试液的制备：
牛血清蛋白标准溶液（1000ug/ml）的制备称取100mg牛血清蛋白置100ml
容量瓶中，加入超纯水溶解并定容。

考马斯亮兰G250试剂称取100mg考马斯亮兰G250，溶于50ml95％的乙
醇后，加入120ml85％的磷酸，用水稀释至1升。

2.结果与讨论
2.1校正曲线的绘制
准确吸取1000ug/ml牛血清蛋白标准溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml
分别加入到6只10ml试管中，然后用超纯水补充到0.1ml，各试管分别加入5ml
考马斯亮兰G250试剂，混合均匀后，即可依次在595nm处测定吸光度。

以浓度
为横坐标，吸光度为纵坐标绘制校正曲线如下图，校正曲线方程为
A=0.613556C+0.001008，R=0.9994。

上海百贺仪器科技有限公司ｗｗｗ．ｓｏｕｔｈｈｋ．ｃｎ
2.2精密度
配制0.6mg/ml牛血清蛋白的考马斯亮兰溶液连续进样6次，得到吸光度的
相对标准偏差。

表1精密度测定结果
次数123456RSD% A0.26260.26220.26200.26280.26290.26260.13
2.3稳定性
取1mg/ml牛血清蛋白标准溶液每十分钟测定一次，50分钟内的吸光度变化
如下表2。

表2稳定度测定结果
时间（min）A1A2A3A平均
00.55110.55230.55160.5517
100.52040.51840.51680.5185
200.49100.49010.49030.4905
300.47650.47160.47210.4734
400.45240.44750.44400.4480
500.39820.39350.40310.3983
3.结论
该方法测定快速、简便，干扰物少，是目前灵敏度较高的蛋白质含量测定
的紫外分光光度法。