2,4- D和6-BA对烟草组织培养的影响刘璐华南师范大学生命科学学院 08生物科学一班 20082501055
摘要：以烟草为实验材料，在不同配方的培养基（①MS + 6-BA0.5 mg/L + 2,4- D0.5mg/L
②MS + 2,4-D0.5mg/L ③MS + 6-BA2.0mg/L + 2,4-D0.5mg/L）中进行组织培养，
观察其愈伤组织的形成及分化。
通过实验，我们得出，6-BA与2,4- D配合使用，
可以更有效地诱导愈伤组织的形成。
单独使用2,4- D可促进愈伤组织根的分化，而
6-BA则可以有效地诱导愈伤组织芽的分化，且6-BA浓度为2.0mg/L时的效果比浓
度为0.5 mg/L时要好。
关键词：烟草组织培养2,4- D 6-BA
烟草(Nicotiana tabacum L.) ，属茄科烟草属，是植物组织培养的模式植物。
生长调节物质是植物组织培养中不可缺少的一类物质，虽然用量极少，但它们对外植体愈伤组织诱导起着重要的调节作用，其中以生长素类和细胞分裂素最为常用。
常用的生长素类有2,4- D、NAA、IAA、IBA，而细胞分裂素类主要有KT、6-BA、ZT、2-iP、4-PU和TDZ。
本研究以烟草叶片为材料，结合本小组和其他两组的实验结果，探讨2,4-D对愈伤组织形成与分化的作用，以及它和不同浓度6-BA共同使用的效果。
1 材料与方法
1.1材料
烟草（Nicotiana tabacum L.）
1.2方法
1.2.1配制MS培养基母液和植物生长调节物质母液。
[1]
1.2.2配制培养基和灭菌。
[1]培养基的配方为①MS + 6-BA0.5 mg/L + 2,4- D0.5mg/L（我们第2实验小组所做）②MS + 2,4-D0.5mg/L（由第1实验小组所做）③MS + 6-BA2.0mg/L + 2,4-D0.5mg/L（由第7实验小组所做）
1.2.3外植体（烟草叶片）的消毒与接种。
[1]观察记录各组的愈伤组织生长情况以及污染情况。
1.2.4愈伤组织的继代培养。
将愈伤组织转入配方为MS + 6-BA1.0mg/L + NAA0.5mg/L的培养基上进行继代培养，观察记录生长情况。
2 结果分析
2.1愈伤组织的形成
培养开始的3天内，外植体在形态上并无明显变化，只是其体积比接种时稍微大了一些。
5天后，外植体从切口处开始膨大并出现黄色小颗粒，形成愈伤组织，外植体隆起且边缘有卷曲现象。
而污染方面，我们第2组一共接种16瓶培养基，有5瓶出现了霉菌污染，污染率为31.25% 。
对比三个实验组的愈伤组织，可以发现，我们第2实验小组的愈伤组织生长情况与第7
实验小组的差不多，而第1实验小组则较差一些。
（见图1 ，图2）
图1 愈伤组织的生长情况（培养基配方为MS + 6-BA0.5 mg/L + 2,4- D0.5mg/L）
图2 愈伤组织的生长情况（培养基配方为MS + 2,4- D0.5mg/L）
2.2愈伤组织的分化
我们组进行继代培养的愈伤组织在继代培养1周后愈伤组织变紧，有芽形成，但在培养的3周内没有形成根（见图3）。
而第1组的愈伤组织形成了根，但未形成芽（见图4）；第7组的情况与我们组类似，但出芽率比我们组要高（见图5）。
图3 愈伤组织的分化（培养基配方为MS + 6-BA0.5 mg/L + 2,4- D0.5mg/L）
图4 愈伤组织的分化（培养基配方为MS + 2,4- D0.5mg/L）
图5 愈伤组织的分化（培养基配方为MS + 6-BA2.0mg/L + 2,4- D0.5mg/L）
3 讨论
通过实验，我们可以得出，6-BA与2,4- D配合使用，可以更有效地诱导愈伤组织的形成。
单独使用2,4- D可促进愈伤组织根的分化，而6-BA则可以有效地诱导愈伤组织芽的分化，且6-BA浓度为2.0mg/L时的效果比浓度为0.5 mg/L时要好。
生长调节物质是培养基中不可缺少的，虽然用量极少，但对外植体愈伤组织诱导起着重要的调节作用，其中以生长素类和细胞分裂素最为常用。
2,4- D（2,4-二氯苯氧乙酸）属于生长素类物质，其主要作用是诱导愈伤组织的形成、胚状体的产生以及试管苗的生根。
6-BA （6-苄基腺嘌呤）属于细胞分裂素类物质，它可以促进细胞分裂，诱导芽分化，促进侧芽萌发生长，抑制器官衰老，延缓叶片老化，还能显著改变生长调节物的作用。
[2] 2,4- D虽然提高了愈伤组织诱导率，但是可能由于较高浓度的2,4- D对种胚具有一定的毒害作用，因此会抑制植物的形态发生。
[3]而附加低浓度的6-BA是不能有效诱导愈伤组织的分化，[4]加入过高浓度的6-BA则会增进多酚氧化酶活性的作用，从而在培养基内产生并积累了酚、醌类深褐色色素物质，这类物质常因抑制愈伤组织的生长而导致毒害，严重时愈伤组织完全褐化而死亡。
[5]
当然，愈伤组织的形成和分化，不仅与激素的绝对含量，细胞分裂素和生长素的比例有关，而且还和培养温度，光照强度等有关。
如我们进行培养时，温度都较低，这对于愈伤组织的形成以及根茎的分化都是有影响的。
4 参考文献
【1】潘瑞炽.植物细胞工程.广州：广东高等教育出版社，2008:152-159.
【2】吴丽芳,陆伟东,丁伟,张鸭关.不同激素配比对红掌叶片愈伤组织诱导的影响[J].贵州农业科学,2010,38(8)：17-18.
【3】杜雪玲,张振霞,刘萍,杨中艺,符义坤.2,4-D和6-BA对多年生黑麦草愈伤组织诱导影响的研究[J].草原与草坪,2005,(03)：49-51.
【4】张同庆,姚根怀,吴中心.激素对烟草愈伤组织分化影响的研究[J].烟草科技, 1992,(06)：33-36.
【5】王荔,杨艳琼,杨德,李本逊.不同激素浓度及培养基对烟草愈伤组织分化的影响[J].
云南农业大学学报,1999,14(04):372-375.。