细胞转染的原理操作步骤以及小技巧
细胞转染是一种将外源DNA、RNA、蛋白质等分子导入到细胞内的实
验技术。

这种技术可以用来研究基因功能、发现新的信号通路和治疗基因
疾病等。

下面将介绍细胞转染的原理、操作步骤以及一些小技巧。

一、细胞转染的原理：
细胞转染主要通过三种方法实现：物理法、化学法和生物学法。

1.物理法：通过高压、电穿孔、微射流等方式，使细胞膜发生瞬时破裂，从而使DNA、RNA等外源分子进入细胞。

常用的物理法有电穿孔法和
基因枪法。

2.化学法：通过化学物质，如聚吡咯、脂质体等，使外源分子与细胞
膜结合，从而实现转染。

常用的化学法有聚乙烯亚胺（PEI）法、磷酸钙
共沉淀法等。

3.生物学法：通过利用病毒载体将外源基因导入目标细胞，实现基因
的转移。

常用的生物学法有腺相关病毒（AAV）转染、逆转录病毒（RETRO）转染等。

二、细胞转染的操作步骤：
1.细胞的预处理：根据细胞类型和实验要求，将细胞培养至合适的状态。

通常细胞应处于快速生长期，但还未达到接触抑制的阶段。

对于一些
特定的细胞，如悬浮细胞，可能需要将其转接至适当的培养基中。

2.外源分子的准备：将外源DNA、RNA等转染载体制备好。

如将DNA
克隆并纯化至高质量的质粒DNA，或将RNA合成或纯化。

根据实验要求选
择合适的转染载体。

3.转染方法的选择：根据实验要求选择合适的转染方法，如物理法、
化学法或生物学法。

一般情况下，物理法适用于悬浮细胞，化学法适用于
贴壁细胞，而生物学法适用于大多数细胞类型。

4.细胞转染操作：
a.物理法：
i.电穿孔法：将细胞悬浮于含有外源分子的缓冲液中，然后通过电穿
孔仪的电极或电穿孔板进行电穿孔。

ii. 基因枪法：使用基因枪将外源分子直接“枪”入目标细胞中。

b.化学法：
i.PEI法：将PEI与外源DNA或RNA按一定比例混合，在适当条件下
形成复合物，然后添加至目标细胞中。

ii. 磷酸钙共沉淀法：将外源DNA与磷酸钙按比例混合，并静置形成
磷酸钙- DNA沉淀，然后加入至目标细胞中。

c.生物学法：
i.腺相关病毒转染：将目标细胞与适当浓度的腺相关病毒混合，经过
适当的培养条件，将目标基因导入到细胞中。

ii. 逆转录病毒转染：将逆转录病毒与外源基因共同转染至细胞中，
病毒将外源基因导入细胞核。

5.转染后的处理：
a.单个细胞的扩增：将转染成功的细胞进行扩增，以保证转染成功率。

b.表达分析：在适当的时间点收集转染细胞，进行蛋白质或RNA的提取，然后进行表达分析。

三、细胞转染的小技巧：
1.转染前检测：转染前可使用荧光染料标记转染载体，然后通过荧光
显微镜观察转染效果，并根据观察结果微调转染条件。

2.适当改变培养基成分：对于一些难以转染的细胞，可以通过改变培
养基的成分或混合不同细胞培养基来提高转染效率。

3.优化转染条件：将转染方法的各个参数进行优化，如电穿孔的电压、时间和宽度等，可以提高转染效率。

4.使用小分子化合物：添加一些小分子化合物，如二甲基亚砜（DMSO）或反式克钠（TTNPB）等，可以增加细胞膜通透性，提高转染效率。

5.稳定表达：对于需要在细胞系中稳定表达的外源基因，可以引入抗
生素或筛选标记，如GFP（绿色荧光蛋白）等，用于选定转染成功的细胞。

通过合理地选择转染方法和优化转染条件，可以提高细胞转染效率和
成功率。

此外，还可以根据细胞类型和实验要求，选择适合的转染载体、
荧光染料和转染检测方法，以确保实验的准确性和稳定性。