甲烷含量进行测定，隔半个月测定一次，３个月后
终止对甲烷含量的测定。
烷菌计数结果与实际情况有一定的出入。另外，产
甲烷菌的培养耗时较长，通常需要ｌ一３个月才能获
收稿日期：２０ｌＯ・１２－２２ 项目来源：干法沼气发酵微生物学与工艺学的研究（００３２００９０３１） 作者简介：张云飞（１９８０一）。男，硕士，主要从事环境微生物方面研究。
（下转第４０页）
万方数据
中国沼气劬ｉ，ｌ口口魄脚２０１１，２９（２） 人员应避免设计复杂的构筑物和昂贵的机械设备， 尽量设计适合当地实际情况的处理设施和通用机 械。此外，厌氧消化器应尽量设计钢筑混凝土结构， 以降低防腐维护费用，因为一个高质量的钢筋混凝 土消化器稳定运行１５年甚至更长的时间是完全可 能的Ｍ Ｊ。否则，系统运行费用高，企业难以负担，即 ５．２经济效益分析
ｆｈ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ０ｆ
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』Ｉ知￡＾口，１０舻，ｌ，ｗｈｉｃｈ
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１０
户用沼气发酵液产甲烷茵计数结果 根据ＭＰＮ计数方法测得ｌ号样中产甲烷菌数
量为９．５×１０５个・ｍＬ～。６号样中产甲烷菌数量
为９．５×１０６个・ｍＬ～。显微计数法测得ｌ号样品 产甲烷菌数量１１×１０５个・ｍＬ一，６号样品产甲烷
菌数量１０
２．２
ｘ
１０６个・ｍＬ～。
沼气工程发酵液产甲烷茵计数结果 根据ＭＰＮ计数方法测得Ｄ号样中产甲烷菌数
方法
甲烷菌ＭＰＮ记数方法【６ Ｊ：取１ ｍＬ发酵液，加 入９ ｍＬ培养基∞’中，逐级稀释到１０９，每个梯度三 个重复。接种完毕后按照４：１的比例加入Ｈ：和 ＣＯ：，放人３５ｃＣ培养箱中进行培养。１个星期后对
数量的方法较常用的为最大可能数法（即ＭＰＮ计 数法）瞪】。由于人工培养基和培养条件的限制，加
之一些不可培养甲烷菌的存在，造成ＭＰＮ法对产甲
ｍＬ样品中加入０．０５
ｍＬ
３％Ｎａ２Ｓ溶液，可使样
品中产甲烷菌的荧光保持稳定，保证了计数的正常 进行。其作用原理有待进一步研究。 ３显微计数法存在的问题
（１）对表１分析发现：户用沼气池中两样品的
显微计数结果为ＭＰＮ计数结果的１．０５和１．１６倍； 显微计数的基础是甲烷菌在特定波长条件下能 发射出蓝绿色荧光。有文献报道少数甲烷菌的荧光
显微计数方法＂ｊ：取ｌ ｍＬ发酵液，注入９
ｍＬ
水中，取少量放于计数甲烷菌的血球计数板”１，于
通讯作者：尹小波，Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｉ∞ｂｏｙｉｎ＠ｙａｌｌ００．ｃⅢ．ｃｎ
万方数据
中国沼气Ｃ五ｉ，ｌ口Ｂ如ｇ∞２０１１，２９（２）

显微镜紫外光下４０倍观察，并进行计数。
２结果与分析
２．１
行的评价。而据文献报道旧１很多甲烷菌是不可培 养的，因此培养以后的结果会低于实际值。所以通 过ＭＰＮ计数所获的统计结果会比实际悬浮液中甲 烷菌的数目小。 分析两种方法的计数结果发现：显微计数是对 沼液中所有甲烷菌直接观察结果，ＭＰＮ是通过培养 方法获得的产甲烷菌数量。因此，显微计数结果更 接近真实值，而ＭＰＮ计数结果比甲烷菌实际数量 少。 加之ＭＰＮ准备时间以及培养时间都很长，操作 较繁琐，获得最终试验结果需要好几个月的时间，一 些特殊样品（如：低温、高盐样品）需要的时间会更 长。因此显微计数方法比ＭＰＮ法更简便、快速。 综上所述，显微计数法相比ＭＰＮ计数法具有诸 多的技术优势，监测结果更接近于真实情况。由于 其具有简便快速的特点，还可以用于厌氧消化系统 运行过程实时监测和动态跟踪。 ２．４对荧光消失较快的产甲烷茵计数 笔者在试验中发现：一些发酵不正常的沼气工 程中甲烷菌活性较弱，荧光消失较快，通常情况下还 未及时计数荧光便消失殆尽。解决方法：采用在每
［１］农业部．全国生猪优势区域布局规划（２００８—２０１５） ［ＥＢ／ＯＬ］．Ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｈｒｉ．ｇｏｖ．ｃＩ∥ｇｏｖｐｕｂｌｉｃ，２０１０一
１１一１３．
按全市已建成规模养殖场沼气工程２５．ｏ万
ｍ３，平均容积产气率０．４０ ｍ３・ｍ。３ｄ。（地埋式常温
沼气工程）计算，全市每年可产沼气３６５０万ｍ３。若 折算为原煤，可每年节约原煤１２．Ｏ万吨；若用于发 电，按ｌ矗沼气发２ Ｋｗｈ计，可发电７３００万Ｋｗｈ。
６１００４ｌ，Ｃｈｉｎａ；２．Ｎ删啦Ａｇ—ｃｌｌｌｔＩＩＩ试ＭｅｃｈａＩｌｉｚａｔｉｏｎ ＩＤｓｔｉｔＩＩｔｅ ｏｆ ＭｉＩｌｉＳｔｒｙ ｏｆ Ａ鲥砌ｔＩｌｒｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００１４，Ｃｈｉ・ ∞；３．Ｅｎ、ｒｉｒ０衄ｅｎｔａＩ Ｍｏｎｉｔｏ血ｇ Ｓｔａｔｉｏｎ ｏｆｊｉｎＩｌｉｕ，ＣｈｅＩｌｇｄｕ ６１００００，Ｃｌｌｉ衄）
（１）规模养殖场建设规划要有前瞻性，应尽量 远离城市，向远郊和外围发展，注意养殖业与种植业
相结合，配套相应的土地面积，为生态养殖与循环农 业提供基础条件。
（２）成都地区人平均耕地不足ｌ亩，且条块分 割，不成规模，特别是远郊农村劳动力转移较慢，因
此消纳沼肥所需土地能力有限，故把握养殖场的适 度规模很重要。 （３）养殖业受自然与市场双重风险影响，赢利
微薄，投入用于粪污处理的资金有限，沼气工程技术
（上接第２５页） ［４］林代炎，林新坚，等．产甲烷菌在厌氧消化中的应用 研究进展［Ｊ］．福建农业学报，２００８，２３（１）：１０６—１１０． ［５］ 张云飞，尹小波，刘翔波．一种细胞计数板［Ｐ］．中国专 利：２００９２０１２６６９７，２０１０—０１—２０． ［８］
环境效益的有机结合，为可持续的生态环境保护和 农业生产走出了新路。
为此，笔者提出以下建议：
［２］张克强，高怀友．畜禽养殖业污染物处理与处置［Ｍ］． 北京：化学工业出版社．２００４． 【３］刘京，刘志丹，袁宪正，等．沼气生产及利于一瑞典经 验［Ｊ］．中国沼气，２００８，２６（６）：３８． ［４］孙家宾，刘田，杨章荣，等．城镇净化沼气池残渣还田 处理试点研究［Ｊ］．中国沼气，１９９９，１７（２）：３６—４０． ［５］李倩，蔡磊，蔡昌达．３Ｍｗ集中式热电联产沼气工程 设计与建设［Ｊ］．可再生能源，２００９，２７（１）：９７—１００． ［６］ 曾邦龙．上海市畜禽粪污治理沼气工程及资源综合利 用［Ｊ］．中国沼气，２０００，１８（３）：３２． ［７］邓良伟，陈缓．欧洲沼气工程发展现状［Ｊ］．中国沼 气，２００７，２５（３）：３０．
ＡｂｓｔＩ。ａｃｔ：Ｂａｃｔｅｒｉａ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄｓ ｇ芎ｎ ｉｎ
ｏｆ ＭＰＮ锄ｄ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ
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１．２
关注沼气发酵三个阶段及各阶段中不同微生物的作 用¨以Ｊ，发现沼气发酵限速步骤是产甲烷阶段【３Ｊ，而
其中起主导作用的是产甲烷菌，因此产甲烷菌也逐 步成为研究的重点。关于产甲烷菌的研究工作涉及 甲烷菌的代谢、活性及其影响因子等领域¨１。这些
工作仅仅是从定性的角度对产甲烷菌进行研究，而
定量的研究确略显不足。在沼气发酵过程中甲烷菌 的数量在一定程度上反映了沼气发酵的运行情况， 因此对其数量的研究也相当重要。目前检测甲烷菌
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ＭｉＩＩｉｓｔｒｙ ｏｆ ＡｇｒｉｃＩｌｌｔ盯ｅ，ｃｈｅｎｇｄｕ
沼气是可再生清洁能源，既可替代秸秆、薪柴等 传统生物质能源，也可替代石油、煤炭等商品能源，
是我国能源战略的重要组成部分。发展沼气对增加 优质能源供应、缓解国家能源压力具有重大的现实 意义。 人们在以往有关沼气发酵微生物的研究中重点
得试验结果。 因此，寻找一种简便准确的产甲烷菌定量检测 方法是沼气发酵研究和生产中亟待解决的技术难题 之一。本文针对不同类型的沼气发酵样品，进行了 产甲烷菌快速计数方法的研究。 １材料与方法 １．１材料 根据发酵主要类型，分别选取４个样品作为研 究对象。ｌ号和６号为户用沼气发酵液样品，Ｄ号和 Ｅ号为沼气工程发酵液样品。
中国沼气傩ｉ∞日垤∞２０１１，２９（２）
沼气发酵过程中产甲烷菌快速计数方法的研究
张云飞１，曲浩丽２，李
强１。代莉蓉１，邓 宇１，尹小波１，张培松３
（１．农业部沼气科学研究所，成都６１０Ｄ４１；２．农业部南京机械化研究所，南京２１００１４；３．金牛区环境监测站，成都６１００００）
摘要：文章采用ＭＰＮ以及显微计数两种方法对不同样品中甲烷菌数目进行检测。试验结果表明：显微计数用于 沼气发酵过程中的甲烷菌检测是可行的。该法比ＭＰＮ计数更加快速简便，结果也更接近真实情况。 关键词：甲烷菌；显微计数；ＭＰＮ计数 中图分类号：ｓ２１６．４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００一１１６６（２０１１）０２—００２４一０３
而在大中型沼气工程中两样品显微计数结果为 ＭＰＮ计数结果的１．８４和１．９５倍，因此无论是对户
用沼气发酵液的样品又或者是沼气工程发酵液样品
很弱，不易被观察到，如ｄ扎￡危口肋ｆ＾戚５０ｅ＾ｎｇｅｎ护…。
因此对含有这类甲烷菌的样品计数会使最终计数结 果比实际值偏低。就目前的显微计数方法和手段对 这类甲烷菌进行计数比较困难，因此今后能否通过 从菌自身人手又或仪器设备的改进等手段将其发射